HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量

姜茁松，王丽娜*，耿玮

（吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033）

HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A的含量

姜茁松，王丽娜*，耿玮

（吉林省食品药品检验所，吉林 长春 130033）

目的：建立HPLC测定谷红注射液中羟基红花黄色素A含量的分析方法。方法：采用Agilent ExtendC18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈－含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液（9∶91）为流动相，流速：1.0m L·m i n－1，检测波长：40 3nm，柱温：35℃。结果：羟基红花黄色素A浓度在0.0 0 7936～0.1984m g·m L－1线性关系良好（r＝0.9999，n＝6），平均加样回收率为99.7%（RSD＝1.3%，n＝9）。结论：本方法操作简便、准确，重复性好，可有效控制该制剂的质量。

HPLC；谷红注射液；羟基红花黄色素A

谷红注射液为中西药复方制剂，现行标准为国家食品药品监督管理局国家药品标准 （试行）WS-10001-（HD-1506）-2004，其处方由红花提取液、乙酰谷酰胺及适量辅料组成，其产品规格为5，10，20m L，类别为脑功能改善药，用于治疗脑血管疾病如脑供血不足、脑血栓、脑栓塞及脑出血恢复期；还可用于治疗冠心病、脉管炎等。该制剂标准中收载了液相色谱法测定乙酰谷酰胺含量的方法，对红花提取液尚未规定含量控制方法。红花为活血化瘀代表药，常用于治疗冠心病、脑血栓等心脑血管疾病，羟基红花黄色素A是红花主要有效成分，具有抗血小板激活因子的作用［1］。本文在参考相关文献［2-7］的基础上，建立了羟基红花黄色素A的含量测定方法，旨在全面、有效控制该产品的内在质量。

1 仪器与试药

安捷伦110 0型高效液相色谱仪，岛津U V-170 0型紫外－可见分光光度计；Milli-Q超纯水系统，SartoriusBT25S型电子天平。

羟基红花黄色素A对照品 （中国药品生物制品检定所，批号：111637-200905，供含量测定用，含量以91.8%计），谷红注射液［博安兄弟制药 （中国）有限公司，批号：20090601，20090602，20090603］。甲醇、乙腈均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent ExtendC18、AgilentHCC18、VenusilMPC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈－含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液（9∶91）；流速：1.0m L·m i n－1；柱温：35℃；检测波长：403nm；进样量：10μ L。理论板数按羟基红花黄色素A峰计，应不低于6000。

2.2 对照品溶液的制备

取羟基红花黄色素A对照品适量，精密称定，加水制成每1m L中含0.0 4m g的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取本品5m L，置25m L量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 空白干扰试验

按处方量 （不含红花提取液）制备阴性对照溶液，按2.1项下色谱条件进行试验，结果见图1，阴性对照溶液不干扰主成分的检测。

2.5 线性关系考察

精密称取羟基红花黄色素A对照品9.92m g，置50m L量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；分别精密量取0.4，1.0，2.0，6.0，8.0m L，置10m L量瓶中，加水稀释制成0.0 0 796，0.0 1984，0.0 3968，0.119，0.1587m g·m L－1系列浓度的溶液。按2.1项下色谱条件，取上述溶液及贮备液各进样10μ L，以浓度X（mg·m L－1）为横坐标，以峰面积Y为纵坐标，进行线性回归，回归方程为Y＝2.8×107X＋7326，r＝0.9999，结果表明在0.0 796～1.984μ g呈良好的线性关系。

图1 谷红注射液及对照品HPLC图

2.6 精密度试验

精密吸取浓度为36.36μ g·m L－1的羟基红花黄色素A对照品溶液10μ L，注入液相色谱仪，连续进样6次，羟基红花黄色素A峰面积的R S D＝0.1%（n＝6）。

2.7 重复性试验

取同一批号谷红注射液（20090601），按2.3项下制备供试品溶液并测定，计算平均含量为0.2522m g·m L－1（n＝6），R S D＝0.8%。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，按2.1项下色谱条件，分别于0，2，5，10，12h进样测定，结果羟基红花黄色素A峰面积的R S D＝0.8%（n＝5）。

2.9 加样回收率试验

精密量取已知含量的谷红注射液样品（20090 60 1，0.2522m g·m L－1）9份，各1m L，分别置5m L量瓶中，再分别精密量取羟基红花黄色素A对照品溶液（0.0 992m g·m L－1）2，2.5，3.0m L各3份，分别加入到上述9个量瓶中，加水定容至刻度，再分别取上述溶液各10μ L注入液相色谱仪，记录色谱图，按照拟定的方法测定含量并计算回收率，结果见表1。

2.10 样品测定

取3批样品，各2份，分别制备样品溶液，进行测定，按外标法计算，测定结果见表2。

3 讨论

3.1 检测波长的选择

取羟基红花黄色素对照品适量，加水制成每1m L中含10μ g的溶液，在210～450nm波长扫描，结果在40 3nm波长处有最大吸收，故选择40 3nm为本实验的测定波长。

表1 羟基红花黄色素A回收率试验

表2 谷红注射液样品中羟基红花黄色素A含量测定

3.2 流动相的选择

《中国药典》2010年版一部收载了“红花”药材含量测定方法，流动相为甲醇－乙腈－0.7%磷酸溶液 （26∶2∶72），该色谱条件下色谱峰易拖尾，对色谱柱的选择性较高，而采用乙腈－含0.5%三乙胺的1%冰醋酸溶液 （9∶91）的流动相组成，改善了色谱峰的对称性，降低了对色谱柱的选择性。

3.3 不同色谱柱考察

取同一供试品溶液 （20090601）在不同品牌的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱（Agilent ExtendC18、AgilentHCC18、VenusilmPC18，规格皆为4.6mm× 250mm，5μm）上测定，羟基红花黄色素色谱峰的分离度均良好，测定结果基本一致，含量均值为0.25m g·m L－1，RSD＝0.6%（n＝6）。说明方法的耐用性较好。

实验表明本方法操作简便、准确，可有效控制该制剂的质量。3批谷红注射液中羟基红花黄色素含量有一定差距，提示应通过控制原料 （如红花提取液）的质量，从而实现该注射剂质量稳定。

［1］臧宝霞，金鸣，李金荣.羟基红花黄色素A抗凝作用的研究［J］.中草药，2007，38（5）：741-743.

［2］张艳利，杨兴鑫，李晓妮.HPLC法同时测定舒心通脑胶囊中羟基红花黄色素A和栀子苷含量［J］.药物分析杂志，2009，（12）：20 64-20 66.

［3］彭红，付建武，余日跃.复方当归注射液中羟基红花黄色素A和阿魏酸的含量测定［J］.时珍国医国药，2009，20（12）：2925-2927.

［4］李莉.高效液相色谱法测定红药片中羟基红花黄色素A的含量［J］.海峡药学，2009，21（7）：10 9-110.

［5］王焕芸，董立森，武鑫，等.反相高效液相色谱法测定红花清肝十三味丸中羟基红花黄色素A的含量［J］.中国新药杂志，20 0 8，17（11）：952-953.

［6］王玉华，郝美玲，王伟.HPLC测定蒙成药檀香清肺二十味丸中羟基红花黄色素A的含量［J］.中成药，20 0 8，30（1）：143-144.

［7］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：141.

Determination of the Hydroxysafflor Yellow A Contents of Safflower Extract and Aceglutamide Injection by HPLC

JiangZhuo-song，Wang Li-na，Geng Wei
（Jilin province Institute for Drug and Food Control，Changchun130033，China）

Objective：To develop a HPLC method for determination of hydroxysafflor yellow A in Safflower ex-tract and Aceglutmide injection.MethodsThe column was Agilent etend C18（4.6mm×250mm，5μm），the mo-bile phase consisted of acetonitrile and 0.5%triethylamine of1%glacial acetic acid solution，the flow rate was1.0mL·min－1，the detection wavelength was 403 nm，the column temperature was35℃.Results：The linear range of hydroxysafflor yellow A was0.007936～0.1984m g·m L－1（r＝0.9999，n＝6）.Thave rage sample recovery was 99.7%（R S D＝1.3%，n＝9）.ConclusionThe method is simple，accurate，stable and reliable.It can be used for quality control of Safflower extract and Aceglutamide injection.

HPLC；Safflower extract and Aceglutamide injection；Hydroxysafflor yellow A

*王丽娜，E-mail：linaw9213＠sina.com

2011-0 5-23）