HPLC-ELSD法测定健脾益气胶囊中黄芪甲苷的含量

2011-09-20邱凯锋李国成张小兵

中国医药指南 2011年27期

邱凯锋李国成张小兵

（1 中山大学孙逸仙纪念医院，广东广州 510120；2 广州市花城制药厂，广东广州510555）

健脾益气胶囊由黄芪、炒白术、茯苓、延胡索等十味药材组成，具有健脾胃、益气血，用于脾胃虚弱，气血不足等症。方中君药黄芪的主要成分为黄芪甲苷，对于本制剂的疗效发挥起到了很大作用，以此作为含量测定指标具有合理性。为提高产品质量的稳定性，本文建立了测定黄芪甲苷含量HPLC-ELSD法，从而为控制该产品的质量提供依据。

1 仪器与试药

岛津LC20A高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器（SEDEX-75）；色谱柱为Hypersil BDS-C18柱；LCsolution操作系统。

黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号110781-200613），乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

采用Hypersil BDS C18色谱柱（5μm，200mm×5.0mm）；流动相是乙腈-水（32∶68）；流速1.0mL/min；载气为3.5mL/min；蒸发光散射检测器漂移温度40℃；理论板数以黄芪甲苷峰计应不低于3000。

2.2 对照品溶液制备

将黄芪甲苷对照品干燥至恒重，精密称取适量，用甲醇溶解稀释成浓度为0.1mg/mL的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备[1]

精密量取本品5g，置索氏提取器中，用甲醇50mL冷浸，第2天再加甲醇适量，加热回流，待提取液无色后取出，放冷，滤过，并用少量甲醇分次洗涤容器，合并洗液和滤液，蒸干，加水50mL于残渣，微热使之溶解，然后用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40mL，合并正丁醇提取液，再用氨试液充分洗涤，每次40mL，2次，最后分取正丁醇液，蒸干，用甲醇溶解残渣后移至5mL的量瓶，取甲醇加至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.4 阴性供试品溶液的制备

精密称取缺少黄芪的阴性样品5g，按2.3中相同方法制备阴性供试品溶液。

2.5 系统适应性试验[2]

精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪。结果表明，供试品色谱中黄芪甲苷色谱峰与其他成分峰分离良好，其色谱峰的保留时间与对照品一致，阴性供试品溶液色谱峰未见干扰。理论板数以黄芪甲苷峰计应不低于3000。见图1。

2.6 线性关系的考察

精密量取黄芪甲苷对照品，加甲醇溶解稀释得0.50mg/mL的对照品储备液。分别精密量取该溶液1、2、4、5、6、8、10mL于10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，然后分别精密量取各浓度对照品溶液10μL，进样测定，记录色谱图，以对照品浓度（μg/mL）为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：Y=4.0206X-6.4720，r=0.9996。结果表明，黄芪甲苷在进样量0.20～2.00μg范围内浓度与峰面积呈良好线性关系。

2.7 精密度试验

精密量取黄芪甲苷对照品溶液10μL，进样，在上述色谱条件下测定。重复进样6次，测得黄芪甲苷峰面积RSD为0.96%，表明此法的进样精密度良好。

2.8 重复性试验

取同一供试液，重复进样6次，RSD为1.793%。表明方法重复性好。

2.9 回收率试验

精密量取样品9份，每份分别精密加入一定量对照品溶液（取样量和加入量详见表1），按上述供试品溶液制备方法操作，在“2.1”项色谱条件下进行进样测定，记录色谱图，计算回收率和RSD（%），测得平均回收率为97.32%，RSD为2.31%。

图1 健脾益气胶囊的高效液相色谱图

表1 回收率试验测定结果

2.10 稳定性考察

取同一供试品溶液，分别在0，2，4，6，8h进样测定，结果黄芪甲苷色谱峰面积RSD=2.41%（n=5），说明供试品溶液在8h内稳定。

2.11 样品测定

分别精密吸取对照品（0.1mg/mL）和供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定即得。分别测定3批样品，每g含黄芪以黄芪甲苷（C41H68O14）计分别是29.3μg，31.4μg，27.6μg。根据以上样品的测定结果，本品含量限度初步定为每g含黄芪以黄芪甲苷（C15H26O）计，不得少于15.0μg。