玻璃苣醇提取物对实验性哮喘豚鼠平喘作用机制的研究

刚宏林，何志一，李鸿钟，刘相辉，孙志国

(1.哈尔滨市食品药品检验检测中心，黑龙江 哈尔滨 150500;2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

玻璃苣(Borago officinalis L.)系紫草科，玻璃苣属植物。现今国内对玻璃苣研究较少，但是国外研究已证实，玻璃苣全株提取物具催乳，消炎利肾作用，并有解表发汗的作用，玻璃苣的花、茎、叶里含有生物碱和钾，经常被用作镇痛剂、止血药(收敛剂)、利尿剂和润肤剂。为了探讨玻璃苣醇提取物的抗炎平喘作用及其作用机制，我们采用豚鼠复制哮喘模型，对玻璃苣醇提取物的抗哮喘作用机制进行了实验研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 药物 本实验采用玻璃苣全株作为原料药，由哈尔滨市药品食品检验检测中心提供。

1.1.2 仪器与试剂

磷酸组织胺(上海惠世生化试剂有限公司，批号090308);NO试剂盒(酶法);IFN－γ和IL－4试剂盒(酶法);地塞米松;超声雾化吸入器;低温离心机。

1.1.3 动物

豚鼠48只，雌雄各半，体质量200g～250g，购自黑龙江中医药大学动物实验中心，使用许可证号:SCXK(黑)2003007，保持室温20℃左右，自由采食。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与给药 将48只健康SPF级豚鼠随机分为6组，每组8只。空白对照组不给予药物;阳对药组给予地塞米松1mg/kg，模型组给于等容量生理盐水，玻璃苣醇提取物高剂量组1.05g/kg，中剂量组0.52g/kg、低剂量组0.255g/kg。灌胃给药，每日1次，连续7天。

1.2.2 模型制备 每天各组动物均于给药后30min，采用雾化器进行激发诱喘［1］。实验标本获得与处理参照前期研究内容［2］。

1.3 统计学处理

采用SPSS 13.0统计软件进行分析。两组均数比较采用t检验分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液中EOS计数的影响

玻璃苣醇提取物经灌胃给药后检测结果分析发现，与模型组比较，玻璃苣醇提物组能够明显降低EOS的含量，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，并且呈明显的剂量依赖性，见表1。

表1 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液中嗜酸性粒细胞含量(±s)

表1 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液中嗜酸性粒细胞含量(±s)

注:与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P＜0.01。

组别 n 剂量(g/kg) EOS(40倍，5个视野)空白组 8 － 0.88±0.64＊＊模型组 8 等容量生理盐水 3.25±2.87地塞米松组 8 1mg 3.00 ±2.73*高剂量组 8 1.050 1.38 ±0.92*中剂量组 8 0.525 1.50 ±1.19*低剂量组 8 0.255 1.75 ±1.28*

2.2 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液中NO含量的影响

经灌胃给药的玻璃苣醇提物的各剂量组明显降低肺灌洗液上清中NO含量，与模型组比较，差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)，并且呈明显的剂量依赖性，见表2。

表2 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液上清中NO含量(±s)

表2 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液上清中NO含量(±s)

注:与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

组别 n 剂量(g/kg) NO(pg/mL)空白组 8 － 22.16±14.31＊＊模型组 8 等容量生理盐水 37.74±22.35地塞米松组 8 1mg 21.17 ± －12.87*高剂量组 8 1.050 20.669 ±4.69*中剂量组 8 0.525 21.28 ±8.14*低剂量组 8 0.255 21.49 ±4.85*

2.3 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺灌洗液中IFN－γ和IL－4含量的影响

模型组的IL－4含量明显增加，而IFN－γ的含量显著降低，地塞米松阳性对照组能够显著降低IL－4含量水平，同时提高IFN－γ含量水平。玻璃苣醇提物不同剂量组均能够降低IL－4含量，亦能够提高IFN－γ含量，且其作用疗效优于阳性对照组，见表3。

表3 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺泡灌洗液中IFN－γ和IL－4含量(±s)

表3 玻璃苣醇提取物对豚鼠肺泡灌洗液中IFN－γ和IL－4含量(±s)

注:与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01。

组别 n 剂量(g/kg)IFN－γ(pg/ml)IL－4(pg/ml)空白组 8 － 194.49±113.68*175.74±115.32*模型组 8 等容量生理盐水 92.41±73.15 245.99±187.51地塞米松组 8 1mg 146.38 ±133.79*170.65 ±72.17＊＊高剂量组 8 1.050 160.96 ±94.97* 62.93 ±34.26＊＊中剂量组 8 0.525 143.50 ±40.62* 65.81 ±49.49＊＊低剂量组 8 0.255 134.98 ±44.53*110.53 ±62.05*

3 讨论

哮喘是一种慢性气道炎症疾病，由多种炎症介质、炎症细胞和细胞因子参与的一种气道慢性炎症性疾病。在外界激发因子的反复作用下，引起气道黏膜水肿，微血管通透性改变，气道分泌物增加，支气管平滑肌收缩，基底膜暴露等一系列病理改变。哮喘与多种炎症细胞介导有关系，包括EOS为主要效应细胞中嗜酸性粒细胞(EOS)在支气管哮喘发生发展中是处于核心地位的效应细胞，哮喘其炎症特征为嗜酸性粒细胞(EOS)在支气管组织内聚集和活化导致的可逆性气道阻塞、气道变应性炎症等［3］。

大量研究表明，Th亚群中Th1和Th2之间存在着交互调节的关系，Th1型和Th2型细胞亚群失衡，(Th2型优势应答)，是哮喘病理过程形成的始动因素和维持因素，哮喘的发作主要表现为Th2细胞数量的增多和功能亢进，导致气道局部嗜酸性粒细胞性慢性炎症，气道反应性增高而致哮喘。Thl主要合成释放IFN－γ、IL－2等细胞因子;Th2则主要生成IL－4、IL－5等。IFN－γ和IL－4是Thl和Th2类细胞因子中具有代表性的一对，IFN－γ/IL－4值的失衡被认为是哮喘的发病机制之一［4］。一氧化氮是近年来所发现的一种具有多种生物活性的重要信息分子，参与多种生理病理及过程，其在哮喘发病中的作用引起人们极大的兴趣，研究发现一定浓度的NO可以舒张支气管平滑肌，缓解哮喘症状;但当NO过度增高时可诱发气道黏膜水肿和阻塞。

本研究结果显示，哮喘模型组与正常对照组相比，哮喘模型组BALF中IFN－γ水平降低，NO、EOS和IL－4水平升高。经药物干预后，玻璃苣醇提取物能有效升高哮喘豚鼠BALF中IFN－γ水平，降低IL－4水平，减少Th2型细胞因子的合成，进而抑制过度亢进的Th2型优势应答，揭示玻璃苣醇提取物治疗哮喘可能与纠正IFN－γ与IL－4动态平衡有关。同时玻璃苣醇提取物能够减少EOS在肺部的聚集和降低NO浓度，从而减轻了气道EOS浸润性，使引喘潜伏期延长，减轻哮喘支气管粘膜的水中和阻塞，缓解支气管哮喘的症状，这可能是玻璃苣治疗哮喘及其作用机制之一。

［1］ 梁成结，陈江华.建立豚鼠哮喘模型的一种新方法［J］.热带医学杂志，2005，5(3):291 －296.

［2］ 刚宏林，何志一，刘相辉，等.玻璃苣醇提取物对实验性哮喘豚鼠平喘作用机制的实验研究［C］.中国药学大会暨第十届中国药师周论文集，2010.

［3］ 李寅超，赵宜红.辛夷挥发油对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞影响的实验研究［J］.现代预防医学，2006，33(8):1338 －1341.

［4］ 原爱红，薛汉荣 洪广祥，等.益气温阳护卫汤对哮喘豚鼠BALF Thl、Th2 细胞因子产生及调节的影响［J］.中国医药学报，2002，17(3):152－154.