高效液相色谱梯度洗脱法同时测定保心宁片中3种皂苷含量

李海泉

(安徽中医学院第一附属医院，安徽 合肥 230031)

保心宁片由丹参、三七、当归、枳壳4味中药组方[1]，具有活血化瘀、行气止痛的功效，临床用于心绞痛、心律失常，能改善冠心病症状等。但其质量标准中只有部分中药的理化鉴别，尚缺定量测定内容。为控制保心宁片的质量，笔者参考有关文献[2－3]，用高效液相色谱梯度洗脱法测定了方中主药三七有效成分的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪，包括四元泵、自动进样器、检测器、二极管阵列检测器。人参皂苷Rg1对照品(批号为110703－200726)、人参皂苷Rb1对照品(批号为110704－200420)和三七皂苷R1对照品(批号为110745－200517)均购自中国药品生物制品检定所;保心宁片(通化正和药业有限公司);乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Agilent Technologies Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相A为乙腈，流动相B为水(按表1规定进行梯度洗脱);流速:1.0 mL/min;检测波长:203 nm;进样量:10 μL。理论板数按三七皂苷R1峰计算不低于4 000;三七皂苷R1与相邻峰的分离度均大于1.5;拖尾因子均符合要求。在此条件下的色谱图见图1。

表1 梯度洗脱程序表

2.2 溶液制备

精密称取保心宁片3.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定质量，放置过夜，置80℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，置25 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得供试品溶液。精密称取人参皂苷Rg1对照品 10.55 mg、人参皂苷Rb1对照品11.65 mg和三七皂苷R1对照品 12.73 mg，置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成每1 mL 含人参皂苷 Rg10.211 mg，人参皂苷Rb10.233 mg和三七皂苷R10.254 6 mg的对照品混合贮备溶液。并按处方比例和供试品溶液制备方法制备缺三七的阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

标准曲线绘制:精密吸取对照品混合贮备溶液 3，5，10，15，20，25 μL，依法测定，以峰面积积分值为纵坐标、对照品进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，分别得回归方程人参皂苷 Rg1Y=243.937 6X+12.362 4，r=0.999 9(n=6);人参皂苷 Rb1Y=230.240 9X+7.331 9，r=0.999 9(n=6);三 七 皂 苷 R1 Y=240.659 8 X+12.836 0，r=0.999 9(n=6)。结果表明，人参皂苷 Rg1进样量在 0.633 ～5.275 μg范围内、人参皂苷 Rb1在 0.699～5.825 μg范围内、三七皂苷 R1在0.764～6.365 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:精密吸取供试品溶液，重复进样6次，测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1的峰面积积分值，结果的RSD分别为1.5%，1.9%和1.3%(n=6)，表明方法精密度较好。

重现性试验:取同一批(批号为090603)样品，依法平行制备5份供试品溶液并测定，计算供试品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷 R1的含量，结果的RSD分别为1.2%，1.9%和1.5%(n=5)，表明方法重现性较好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，于15 h内每隔3 h进样1次。结果的 RSD分别为 2.2%，4.4%和 2.4%(n=6)，表明供试品溶液在15 h内稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为090401，三七皂苷R1含量 14.45 mg/g，人参皂苷 Rg1含量 5.74 mg/g，人参皂苷 Rb1含量3.95 mg/g)6份，每份约1.9 g，精密称定，分别精密加入三七皂苷 R1对照品溶液(1.413 g/L)、人参皂苷 Rg1对照品溶液(1.083 g/L)和人参皂苷 Rb1对照品溶液(1.362 g/L)各 10 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并测定，计算回收率。结果见表2。

表2 加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

分别精密量取不同批号的保心宁片，按供试品溶液制备方法操作，进样分析，用标准曲线回归方程计算3批保心宁片样品中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和三七皂苷R1含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果(mg/片，n=3)

3 讨论

本试验以方中三七的有效成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量为质控指标。测定结果表明，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1峰能与杂质峰很好分离，且阴性样品无干扰，效果满意。参照2005年版《中华人民共和国药典(一部)》三七药材含量测定的检验方法，采用十八烷基键合硅烷胶为填充剂的分析柱，比较不同的流动相。结果以乙腈－水为流动相进行梯度洗脱时样品中的三七成分能有效分离，避免了其他成分的干扰。可见，本试验所用方法简单易行、结果准确、重现性好，对控制本品质量具有一定的意义。

[1]WS3－B－0345－90，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第 2 册)[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:10.

[3]刘玉珍，刘庆荣，钱车余.保心宁片质量标准的研究[J].中成药，1994，16(1):20 － 21.