葛根异黄酮对AD模型大鼠抗衰老作用研究

覃红斌，魏 蕾

1.湖北民族学院医学院(湖北恩施445000)

2.武汉大学基础医学院(湖北武汉430071)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)，是慢性进行性中枢神经系统病变导致的疾病，以渐进性记忆障碍、认知功能障碍、人格改变以及语言障碍等神经精神症状为特征，目前已经成为仅次于心血管病、肿瘤、脑卒中的第四大老年性疾病［1］。本实验通过观察葛根异黄酮对AD模型大鼠血液、肝脏、脑组织中的相关酶活性改变，进而探讨葛根异黄酮的作用机理，为葛根异黄酮用于临床提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 wistar大鼠68只，雌雄不限，4月龄，体重(190±20)g，由武汉大学医学部实验动物中心提供。

1.2 实验药物及试剂 葛根异黄酮(南阳张仲景现代医药公司);D－半乳糖(上海试剂二厂);SOD、GSH－Px、MDA、MAO试剂盒(南京建成生物工程研究所);酶联免疫检测仪DG3022(华东电子管厂)。

1.3 动物模型制作及分组 68只wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组、药物组(分低、高剂量组)，每组17只。模型制作参照文献［2］。对照组每天颈背部皮下注射等量生理盐水，连续6周。造模成功后，第二天开始分别每天以(40 mg/kg、160 mg/kg)葛根异黄酮灌胃给药;模型组和对照组每天给予80 mg/kg生理盐水灌胃，连续8周。

1.4 MDA及酶活性测定 连续8周后取血液，并将大鼠断头处死后取肝脏、脑组织，制作10%组织匀浆，分别检测其丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH－Px)、单胺氧化酶(MAO)的酶学活性。

2 结果

2.1 各组大鼠血液 SOD、GSH－PX、MDA、MAO 的变化情况 从表1显示，模型组血液中SOD、GSHPx、MAO活力显著降低，MDA含量显著增高，与对照组比较均有显著性差异(P＜0.01);与模型组比较，葛根异黄酮低、高剂量组血液中SOD、GSH－Px活力显著增高，MDA含量显著降低(P＜0.05)，而且高剂量组差异更明显(P＜0.01)，MAO活力未见显著差异。

2.2 各组大鼠肝脏 SOD、GSH－PX、MDA、MAO 的变化情况 与对照组比较，模型组肝脏中SOD、GSH－Px、MAO活力显著降低，MDA含量显著增高(P＜0.01);与模型组比较，葛根异黄酮低、高剂量组肝脏中SOD、GSH－Px活力显著增高，MDA含量显著降低(P＜0.05)，而且高剂量组差异更明显(P＜0.01)。MAO活力未见显著差异，见表2。

2.3 各组大鼠海马组织中 SOD、GSH－Px、MDA、MAO的变化情况 从表3可见，模型组大鼠海马中SOD、GSH－Px活性明显降低，MAO的活性和MDA含量明显增加(P＜0.01);药物低高剂量组大鼠海马中SOD、GSH－Px活性明显增高，MAO的活性和MDA的含量明显减少，与模型组比较，有明显差异(P ＜0.05)。

表1 各组大鼠血液中SOD、GSH－Px、MDA、MAO水平变化(±s，n=17)

表1 各组大鼠血液中SOD、GSH－Px、MDA、MAO水平变化(±s，n=17)

与对照组比较，#P ＜0.01;葛根异黄酮低、高剂量组与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

组别 SOD(U/mgprot) GSH－Px(活力单位) MDA(nmol/mgprot) MAO(U/h/mgprot)对照组 106.89 ±36.57 285.81 ±153.37 63.36 ±29.84 152.23 ±66.95 AD 模型组 73.44 ±21.45# 166.24 ±82.46# 98.57 ±23.50# 128.93 ±23.65#葛根异黄酮低剂量组 118.68 ±32.68* 197.01 ±131.41* 56.23 ±17.42* 127.75 ±24.42葛根异黄酮高剂量组 121.74±26.32＊＊ 294.38±153.35＊＊ 48.92±17.31＊＊126.18 ±22.54

表2 各组大鼠肝脏中SOD、GSH－Px、MDA、MAO水平变化 (±s，n=17)

表2 各组大鼠肝脏中SOD、GSH－Px、MDA、MAO水平变化 (±s，n=17)

与对照组比较，#P ＜0.01;葛根异黄酮低、高剂量组与模型组比较，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01.

组别 SOD(U/mgprot) GSH－Px(活力单位) MDA(nmol/mgprot) MAO(U/h/mgprot)对照组 106.89 ±36.57 285.81 ±153.37 63.36 ±29.84 153.13 ±65.85 AD 模型组 73.44 ±21.45# 166.24 ±82.46# 98.57 ±23.50# 127.82 ±22.74#葛根异黄酮低剂量组 118.68 ±32.68* 197.01 ±131.41* 56.23 ±17.42* 126.85 ±23.52葛根异黄酮高剂量组 121.74±26.32* 249.36±153.35＊＊ 48.92±17.31＊＊138.18 ±22.54

表3 对大鼠脑中SOD、GSH－Px、MDA、MAO的影响(±s，n=17)

表3 对大鼠脑中SOD、GSH－Px、MDA、MAO的影响(±s，n=17)

与对照组比较，#P ＜0.05，##P ＜0.01;葛根异黄酮低、高剂量组与模型组比较，*P ＜0.05。

组别 SOD(U/mgprot) GSH－Px(活力单位) MDA(nmol/mgprot) MAO(U/h/mgprot)对照组 108.42 ±26.57 199.25 ±48.54 15.37 ±6.85 65.38±16.25 AD 模型组 78.49 ±36.55# 144.90 ±47.32# 27.68 ±10.43# 104.31 ±27.67##葛根异黄酮低剂量组 111.85 ±28.52* 156.45 ±38.42* 8.54 ±2.33* 79.48 ±18.56*葛根异黄酮高剂量组 120.53 ±38.58* 158.92 ±30.85* 5.87 ±4.53* 76.39 ±14.68*

3 讨论

葛根为常用中药，葛根异黄酮是其主要有效成分，包括葛根素、大豆苷元、大豆苷等［3］。近年来，国内外对葛根提取物的药理作用也进行了相关的研究:郑东升等人认为葛根异黄酮对雌激素低下动物显示弱雌激素活性，提示其有雌激素受体部分激动剂的特性［4］，还有治疗心血管疾病、抗癌等作用［5，6］。研究认为正常机体抗氧化系统的氧化酶SOD能将组织细胞的超氧阴离子自由基歧化生成过氧化氢，减少自由基对细胞组织的损伤;GSH－Px是机体的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的酶系统，可以将过氧化氢分解，清除MDA和其它过氧化氢产物，阻止体内自由基引起的膜脂质过氧化。现已明确许多疾病或者症状，如肿瘤、炎症、心脑缺血、动脉粥样硬化等，都与自由基有关［7，8］。本实验结果表明:葛根异黄酮对AD模型大鼠血液、肝脏、脑组织的酶活性产生改变，低、高剂量都能使其抗氧化酶活力显著增高，同时降低血液、肝脏及脑组织中MDA含量，提示葛根异黄酮具有明显的抗氧化作用。AD患者超氧化物歧化酶活性减弱，脑组织中葡萄糖－6磷酸脱氢酶增多，会导致氧化应激增加，自由基增多淤积，由于神经元富含对自由基敏感的不饱和脂肪酸，因此它容易受到自由基的伤害，最终使神经细胞死亡和AD的发生。本实验模型组大鼠海马中SOD活性降低，MAO的活性增高及MDA的含量增加;用药后各组大鼠海马中SOD活性增高，MAO的活性降低及MDA的含量减少，药物低高剂量组与模型组比较都有变化，而且高剂量组的差异更明显(P＜0.01)。提示葛根异黄酮使SOD、GSH－Px活性显著增加，而药物低、高剂量组之间MAO活力变化不大，说明葛根异黄酮对抗衰老作用的机理与抗自由基损伤有关，这对抗衰老药物的研制具有积极的意义。

卫生部药法监发［2002］51号文件将葛根列为药食两用植物并予以公布，葛根开发已列入国家食品工业产品深加工项目。恩施自治州属于富硒地区，尤其是富硒食品产业方兴未艾，现在富硒小麦草片、富硒玉米爽、富硒魔芋精粉等多种产品已经远销港澳台地区和欧美日等国。恩施自治州野葛根资源丰富，长期以来没有得到充分的开发和利用，如果对葛根异黄酮进行更深入研究，加大科技含量高的临床、保健用品开发，对人类健康事业和地方经济的发展都有很重要的价值。

［1］袁琳.老年痴呆的病理、病机及临床诊断［J］.现代康复，2001，5(1):68.

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［3］刘灿坤，于瑞杰.论古今药用葛根的品种［J］.时珍国药研究，1997，8(5):389.

［4］郑东升，孟倩超，葛根素和葛根异黄酮的雌激素样活性［J］.中药材，2002，25(8):566－568.

［5］陆莹，郭建平等，葛根异黄酮滴丸对大鼠心肌抗缺血作用的实验研究［J］.中华临床医药与护理，2007(6):7－8.

［6］彭安，陈敏珍.葛根提取物诱导人肝癌细胞分化的研究［J］.现代中西医结合杂志，2002，11(16):1533－1534.

［7］郑灵芝等.大豆异黄酮抗氧化性质的研究［J］.食品与药品，2006，8(2):48－50.

［8］谭文波，李国贵.王鹤续断洗脱液抗衰老作用的实验研究［J］.湖北民族学院学报(医学版)，2011，28(3):24－26.