HPLC法测定多动宁胶囊中盐酸小檗碱的含量

陈云松

（丹东市中心医院，辽宁丹东 118002）

多动宁胶囊为治疗儿童多动症的中成药，标准为国家药品监督管理局标准（试行）WS-5111（B-0111）-2002，由黄柏、熟地黄、龟甲、远志、石菖蒲、山茱萸等共十一味药材组成，具有滋养肝肾，开窍，宁心安神的功效[1-3]。标准中有熊果酸的含量测定，但方法为薄层扫描法，操作复杂，误差比较大。笔者采用了HPLC法[4-5]对其臣药黄柏中主要有效成分之一的盐酸小檗碱进行了含量测定，方法简便、准确，重现性好。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本Shimadzu公司LC－10ATVP高效液相色谱仪；检测器：SPD－M10ATVP；Class-vp 工作站；SK7200HP 超声波清洗器（上海科导超声波仪器有限公司）。

1.2 试药

盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200208，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为二次蒸馏水；其他试剂均为分析纯；多动宁胶囊（批号：20070302、20070303、20070304，河南灵佑药业有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil-C18TM 钻石 （4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.033 mol/L 磷酸二氢钾溶液（40∶60）；检测波长：345 nm；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min。 理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000。

2.2 对照品溶液制备

精密称取减压干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品10.06 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取此液2 ml，置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升含盐酸小檗碱20.12 μg）。

2.3 供试品溶液制备[6-8]

取重量差异项下的内容物0.2 g，研匀，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇20 ml，超声处理（功率250 W，频率20 kHz）30 min，取出，滤过，滤液蒸干，用少量无水乙醇溶解，加在氧化铝柱上（中性氧化铝 100～200目，10 g，内径约0.9 cm，干法装柱），用无水乙醇60 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10 ml，摇匀，即得。

2.4 阴性对照溶液制备

阴性对照样品按处方比例配制，其中缺黄柏成分，按供试品方法测定，照“2.3”项下方法制备，得阴性对照溶液。

2.5 系统适用性试验

分别取盐酸小檗碱对照品溶液和供试品溶液各10 μl，按上述色谱条件进行试验，考察系统适用性。HPLC色谱图见图1。结果显示在盐酸小檗碱对照品吸收峰位置处无干扰[4-5]。

2.6 线性关系考察

精密吸取 0.5、1、2、4、8 ml对照品贮备液分别置于 10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀后各吸取10 μl溶液注入液相色谱仪中，测定峰面积，以盐酸小檗碱进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得回归方程：Y＝68812.70X+93781.42（r=0.9998），表明盐酸小檗碱在 0.0503～0.8048 μg范围内呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

分别精密吸取10 μl浓度为20.12 μg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，按上述色谱条件，连续进样测定5次，结果平均峰面积为1539657，RSD=1.03%。

2.8 稳定性试验

精密吸取等份供试品溶液分别放置 2、4、8、12、16、20、24h 测定供试品中盐酸小檗碱的峰面积，测得其峰面积的平均值为1576452，RSD为1.21%，表明供试品溶液至少在24 h内稳定。

2.9 重现性试验

精密吸取等份供试品6份，按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液，测定供试品中盐酸小檗碱的含量，结果平均含量为 0.43 mg/粒，RSD=1.25%。

2.10 回收率试验

取已知盐酸小檗碱含量的多动宁胶囊样品 （批号：20070302，盐酸小檗碱含量为 0.45 mg/粒）约 0.1 g，精密称定，共6份，分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液（5.030 μg/ml）25 ml，测定多动宁胶囊中盐酸小檗碱的含量，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery test(n=6)

2.11 样品含量测定

按“2.3”项下方法操作，制备供试品溶液，测定三批多动宁胶囊中盐酸小檗碱的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 讨论

采用高效液相色谱法对多动宁胶囊中盐酸小檗碱的含量进行测定，色谱条件：色谱柱为Diamonsil-C18TM钻石（4.6mm×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相：乙腈-0.033 mol/L 磷酸二氢钾溶液（40∶60）；检测波长：345 nm；柱温：25℃；流速：1.0 ml/min；理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000。盐酸小檗碱在0.0503～0.8048 μg范围内线性关系良好(r=0.9998)。盐酸小檗碱平均回收率为98.33%，RSD=0.63%。

笔者曾采用甲醇20 ml超声提取后直接进样，结果样品分离效果差，杂质峰较多，而用甲醇提取，经中性氧化铝柱处理，然后再进样，杂质峰少，取得了很好的分离效果[6-8]，故确立为含量测定方法。本法操作简便，效果好，结果准确，能真实地反映多动宁胶囊中盐酸小檗碱的实际含量，可用于其质量控制。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:化学工业出版社,2005:6.

[2]张旭香,张兴运,许志红.薄层扫描法测定长安升白颗粒中小檗碱的含量[J].中草药,2002,33(7):619.

[3]肖培根.中药志[M].北京:化学工业出版社,2001:668.

[4]窦志英,孙巍,田丽莉,等.HPLC法比较延胡索生品与不同炮制中3种有效成分的含量[J].中药材,2007,30(4):399-400.

[5] 武剑峰,姜晓冬,滕义生,等.高效液相色谱法测定降脂宁颗粒中2，3，5，4一四羟基二苯乙烯-2-O-B-D-葡萄糖苷的含量[J].中国药事,2006,20(11):693-694.

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[8]张旭香,张兴运,许志红.薄层扫描法测定长安升白颗粒中小檗碱的含量[J].中草药,2002,33(7):619.