液液萃取和大孔吸附树脂纯化银杏外种皮黄酮类化合物的比较研究

2011-07-26宋国斌席国萍

化学与生物工程 2011年10期

宋国斌，席国萍

(山西大同大学医学院，山西大同 037009)

银杏是世界上珍贵的药用植物资源[1，2]。银杏外种皮是银杏果仁的皮层，即种子硬壳的肉质皮层，俗称白果衣胞[3]。银杏外种皮的化学成分主要有黄酮类、银杏内酯类等化合物。其中黄酮类化合物具有扩张血管、降低血脂、抗氧自由基等重要作用，已成为当前生物制药的研究热点，而银杏药物中黄酮类化合物含量的高低，直接关系到药物的药效[4]。

作者在此比较了液液萃取法和大孔吸附树脂法对银杏外种皮黄酮类化合物的纯化效果，拟为银杏外种皮黄酮类化合物的开发利用提供参考。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

银杏外种皮采自贵州省贵阳市乌当区杨昌镇。

芦丁对照品，中国药检所；X-5、AB-8型大孔吸附树脂，天津南开大学化工厂；DM-130型大孔吸附树脂，山东鲁抗医药集团股份有限公司，其它试剂均为分析纯。

UNICO UV-2000型紫外可见分光光度计，上海丽度电子科技发展有限公司；RE-25型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；METTLER-AE240型电子天平，瑞士梅特勒公司；LABCONCO型冷冻真空干燥器，上海泽权仪器设备有限公司。

1.2 银杏外种皮黄酮类化合物的纯化

1.2.1 银杏外种皮的前处理

将银杏外种皮自然风干，然后放入50 ℃烘箱中烘烤至脆，粉碎，冰箱保存。

1.2.2 银杏外种皮黄酮提取物的制备

称取适量处理好的银杏外种皮，在70 ℃、用7 BV的60%(质量浓度，下同)乙醇回流提取4次，每次1 h；合并提取液，用旋转蒸发仪在50 ℃减压浓缩，冷冻干燥，备用

1.2.3 液液萃取法纯化

准确量取70%乙醇配制5份浓度为2.43 mg·mL-1的银杏外种皮黄酮提取液，每份100 mL，分别用正己烷、石油醚、环戊烷、甲苯、氯仿萃取至萃取溶剂无色，将乙醇提取液浓缩至干，冷冻干燥，得产品。

1.2.4 大孔吸附树脂法纯化

将处理好的X-5、AB-8、DM-130大孔吸附树脂湿法装柱(层析柱尺寸55 mm×800 mm)，装柱高度600 mm。准确量取70%乙醇配制3份浓度为2.45 mg·mL-1的银杏外种皮黄酮提取液，每份100 mL，上样。先用水洗至流出液无色，再用4～5 BV 90%乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，冷冻干燥，得产品。

1.3 银杏外种皮黄酮类化合物含量测定

用70%乙醇准确配制0.13 mg·mL-1的芦丁标准溶液。分别精确量取1.0 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL标准溶液置10 mL具塞试管中，以蒸馏水为空白，加30%乙醇至5 mL；先加5%NaNO2溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；再加10%Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀，放置6 min；最后加4%NaOH溶液4 mL；用蒸馏水稀释至10 mL，室温放置15～20 min。在波长510 nm处测定吸光度，由最小二乘法得浓度与吸光度标准曲线方程，并根据此方程计算黄酮类化合物含量[5]。