妊娠期甲型H1N1流感患者T淋巴细胞亚群变化

邸庆国，张 玲，孙宝华，吕 静，迟玉敏，杜俊凤，姜明明，王晓晟，李桂馨

(河北医科大学附属沧州市中心医院，河北沧州061000)

2009年甲型H1N1流感具有以往流感相同的特点就是妊娠期妇女更易发展成重症患者［1，2］。有报道称妊娠期妇女患病住院率为普通人群的4倍［2］。本研究收集沧州地区两家三级综合医院确诊重症/危重症甲型H1N1流感病例56例，其中32例为妊娠期妇女，现对所有妊娠期病例资料进行整理分析，探讨T淋巴细胞亚群在妊娠期合并重症/危重症甲型H1N1流感发病过程中的变化及其临床意义。

1 资料与方法

1．1 临床资料 收集沧州地区两家三级综合医院隔离病房2009年11月10日～12月31日收治确诊重症/危重症甲型H1N1流感56例，选取其中妊娠期患者32例(A组)，年龄19～30岁。诊断标准参考卫生部办公厅印发《甲型H1N1流感诊疗方案(2009年第三版)》标准。重症与危重病例诊断依据:出现以下情况之一者为重症病例:①持续高热＞3 d;②剧烈咳嗽，咳脓痰、血痰，或胸痛;③呼吸频率快，呼吸困难，口唇紫绀;④神志改变:反应迟钝、嗜睡、躁动、惊厥等;⑤严重呕吐、腹泻，出现脱水表现;⑥影像学检查有肺炎征象;⑦肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)等心肌酶水平迅速增高;⑧原有基础疾病明显加重。出现以下情况之一者为危重病例:①呼吸衰竭;②感染中毒性休克;③多脏器功能不全;④出现其他需进行监护治疗的严重临床情况。A组于入院当日或次日采血完成相关化验检测。正常妊娠组(B组):随机抽取同期产科门诊健康孕妇20例，无妊娠合并症或并发症，孕期未使用过激素治疗。随机选取同期我院健康未孕生育期护士20例作为正常对照组。各组间平均年龄、妊娠组检测孕周无显著性差异。

1．2 T淋巴细胞亚群测定 晨起采集所有检测者外周静脉血2 ml，加入EDTA抗凝管，充分混匀后取抗凝全血 100 μl，分别加入 20 μl鼠抗 IgG1-FITC/IgG1-PE/IgG1-PC5、CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PC5、CD3-FITC/CD16CD56-PE(试剂源于美国BD公司)，涡旋器充分混匀，闭光孵育20～40 min，加入红细胞裂解液2 ml，闭光孵育10 min至液体透亮，离心，PBS缓冲液洗涤，过滤后，加入PBS缓冲液300 μl上流式细胞仪检测。所用流式细胞仪FACS Calibur购自美国BD公司，数据获取采用Cell Quest 3．2，检测T淋巴细胞亚群和NK细胞。同时抽取孕妇静脉血2 ml查血常规，以获得外周血白细胞计数，计算出淋巴细胞绝对值，用淋巴细胞绝对值乘以各亚群细胞百分率计算各亚群的绝对值。

1．3 统计学方法 采用SPSS13．0统计软件，计量资料用±s表示，两组间比较用t检验，以P≤0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 各组外周血白细胞及分类比较 见表1。

2．2 各组T淋巴细胞亚群和NK细胞改变 见表2。

表1 各组外周血白细胞及分类比较(/μl，±s)

表1 各组外周血白细胞及分类比较(/μl，±s)

注:与对照组比较，*P ＜0．05;与B 组比较，△P ＜0．05

组别 白细胞 中性粒细胞 淋巴细胞 单核细胞A 组绝对值(×109/L) 6．76±3．30△ 5．79±4．28 0．71±0．14＊△ 0．10±0．13＊△百分比(%) — 87．62±3．98＊△ 9．99±3．93＊△ 1．04±1．56＊△B组绝对值(×109/L) 9．90 ±2．31* 7．25 ±2．71* 2．59 ±0．87 0．54 ±0．26*百分比(%) — 74．13±6．84* 18．37±5．23* 5．56±2．18对照组绝对值(×109/L) 7．26 ±1．51 4．78 ±3．69 2．61 ±0．45 0．36 ±0．16百分比(%) —57．95 ±5．68 33．24 ±4．60 5．38 ±3．54

表2 各组T淋巴细胞亚群和NK细胞改变(/μl，±s)

表2 各组T淋巴细胞亚群和NK细胞改变(/μl，±s)

注:与对照组比较，*P ＜0．05;与B 组比较，△P ＜0．05

组别 CD3 CD4 CD8 CD4/CD8 CD15+56 A 组绝对值(×109/L) 546±308＊△ 231±158＊△ 207±210＊△ — 96±52＊△百分比(%) 69．82 ±10．67 35．53 ±8．25 33．41 ±9．21＊△ 0．89 ±0．37＊△ 7．59 ±2．98＊△B组绝对值(×109/L) 1 203±523* 538±183* 364±106* — 204±113*百分比(%) 66．12 ±6．36 38．47 ±5．21 28．25 ±3．82 1．40 ±0．27* 11．48 ±6．86*对照组绝对值(×109/L) 1 559±502 988±360 542±178 — 520±98百分比(%) 62．60 ±8．43 40．03 ±7．84 22．06 ±4．78 2．07 ±0．46 21．57 ±8．13

3 讨论

目前，世界范围内流行的甲型H1N1流感是由人类甲型H1N1亚型的新病毒株引起的一种新型流感，大部分患者病情具有自限性，重症和死亡病例多有并发症或慢性基础疾病。孕产妇感染甲型H1N1流感病情进展迅速，如出现肺炎或急性呼吸窘迫综合征还可能危及孕产妇及胎儿的生命。

本组资料中甲型H1N1组白细胞总数与正常对照组比较无显著差异，中性粒细胞百分比高于对照组，同时伴随淋巴细胞百分比和绝对值的下降，单核细胞绝对值下降，推测中性粒细胞百分比的增加可能与后两者绝对值的减少相关。正常妊娠组外周血白细胞总数增加，并以中性粒细胞增加为主伴单核细胞绝对值增加，而淋巴细胞百分比下降。Minagawa等认为，妊娠期粒细胞增加及淋巴细胞减少可能与母体交感神经兴奋相关。张建平等［3］认为妊娠期粒细胞及单核细胞的增加与妊娠免疫耐受引起细胞免疫功能下降所致机体特异性免疫受到抑制，非特异性免疫代偿性增强有关。H1N1妊娠组比正常妊娠组外周血淋巴细胞和单核细胞的绝对值、百分比均下降，提示H1N1病毒加剧妊娠母体外周血白细胞组分的不均衡，使机体细胞免疫功能进一步急剧下降，这种改变可能与妊娠期患者易发重症相关。

研究已证实CD4+T细胞和细胞毒性T细胞(活化的CD8+细胞)是宿主肺部抵御感染的主要细胞，T淋巴细胞亚群测定可以比较准确的反应机体细胞免疫功能状态。妊娠期T淋巴细胞亚群变化尚有争议，本研究显示正常妊娠较正常未孕妇女外周血中CD4+、CD8+T细胞、CD4/CD8比值、NK细胞均降低。推测妊娠期母体细胞免疫功能状态受到一定抑制，这种改变可能与妊娠期免疫耐受相关。合并H1N1组比正常妊娠组上述指标进一步下降，这可能与外周血T细胞分布异常及淋巴细胞受到病毒攻击有关，提示机体细胞免疫功能受到严重抑制，与文献报道［4］相符。黄美先等［5］认为总 T 细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞可能与疾病严重程度正相关。Stephen E等研究显示孕妇淋巴细胞绝对值的减少及CD4/CD8比值的下降导致辅助T淋巴细胞减少，这部分效应被完全甚至过强的体液免疫所代替。Laibl等认为妊娠期肺炎病程较非妊娠期延长3倍，严重度增加9倍，需机械通气比例更高，这与妊娠期辅助性T细胞数目减少和NK细胞活性降低有关［6］。流感病毒感染后的第1周内(急性期)以高病毒、高抗原浓度及高促炎因子浓度为特点［7］，这些抗原呈递并推动效应性T细胞增值和分化，进而产生大量高度分化的T细胞，并积累到肺部发挥强大的效应功能，对于妊娠期妇女原本减少的淋巴细胞在此阶段则不能充分发挥其固有免疫防御机制。提示妊娠期T淋巴细胞亚群改变可能是妊娠期妇女患重症甲型H1N1流感肺炎的重要原因。

本研究结果提示，妊娠期免疫耐受所致细胞免疫功能抑制可能参与重症H1Nl流感的发生发展过程，应用细胞免疫增强剂可能对疾病过程有积极影响。

［1］Saleeby E，Chapman J，Morse J，et al．H1N1 influenza in pregnancy:cause for concern ［J］．Obstet Gynecol，2009，114(4):885-891．

［2］Jamieson DJ，Honein MA，Rasmussen SA，et al．H1N1 2009 influenza virus infection during pregnancy in the USA ［J］．Lancet，2009，374(9688):451-458．

［3］张建平，陈立斌，王蕴慧，等．足月妊娠分娩发动时孕妇外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的变化［J］．中山医科大学学报，2002，23(4):245-247．

［4］Lapinsky SE．H1N1 novel influenza A in pregnant and immunocompromised patients［J］．Crit Care Med，2010，38(4 Suppl):e52-57．

［5］黄美先，朱婧，潘韵峰，等．重型甲型H1N1流感患者外周血免疫细胞变化及其临床意义［J］．国际流行病学传染病学杂志，2010，37(4):236-238．

［6］Laibl V，Sheffield J．The management of respiratory infections during pregnancy［J］．Immunol Allergy Clin North Am，2006，26(1):155-172．

［7］Wang JP，Kurt-Jones EA，Finberg RW．Innate immunity to respiratory viruses［J］．Cell Microbiol，2007，9(7):1641-1646．