腹腔液中单核细胞趋化蛋白－1水平与子宫内膜异位症

文 思，方小玲

（1.广东省医学科学院，广东 广州 510080；2.广东省人民医院妇产科，广东 广州 510080；3.中南大学湘雅二医院妇产科，湖南 长沙 410011）

子宫内膜异位症（endometriosis，内异症）是妇产科常见和多发的良性疾病，有学者认为，内异症患者腹腔液中巨噬细胞的含量和活性增加，其所诱发的一系列免疫功能变化，在疾病的发生发展过程中起关键作用。单核细胞趋化蛋白－1(monocyteche motaticprotein-1，MCP-1)是最有效的单核/巨噬细胞趋化因子之一，是腹腔内巨噬细胞增多的始动因素之一。本研究通过用酶联免疫吸附剂测定（ELISA）法检测内异症患者腹腔液中MCP-1的水平，了解其与内异症发病、疾病分期及月经期别的关系，探讨其在疾病发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 研究对象和分组

2005年7月—2006年2月中南大学湘雅附二院妇科经腹腔镜确诊的内异症患者40例为研究组，同期因子宫肌瘤、卵巢良性肿瘤行腹腔镜手术的非内异症患者40例为对照组。两组患者年龄在14～45岁之间，月经规律，术前至少3个月未经任何内分泌药物治疗、抗炎治疗，均无内分泌代谢性疾病、恶性肿瘤、结缔组织病及乙型肝炎、结核等慢性疾病。研究组年龄为（30.10±0.86）岁，对照组年龄为（27.93±0.90）岁，两组比较，差异无显著性（P>0.05）。采用修订后的美国生育协会内异症分期评分法（r-AFS）[1]，对研究组患者进行分期，早期（Ⅰ～Ⅱ期，轻型）20例，晚期（Ⅲ～Ⅳ期，中重型）20例。根据末次月经及月经周期确定，研究组中19例患者手术时为增殖期，21例为分泌期；对照组中20例患者手术时为增殖期，20例为分泌期。

1.2 方法

（1）标本的收集和处理：腹腔镜手术常规置镜后，于进行手术操作开始前，直视下通过吸管吸取子宫直肠凹和膀胱子宫凹腹腔液。收集到的腹腔液立即于4℃下3000 r/min离心10min，取上清液少量分装于－70℃冷冻保存待测。

（2）MCP-1的测定：采用双抗体夹心桥联亲和素-生物素酶联免疫吸附剂测定(A B C-E L I S A法，试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司)。按照人MCP-1定量E L I S A试剂盒所定程序，测定腹腔液MCP-1水平。将零孔设为空白对照，用酶标仪在450 n m测定O.D.值，Well scanMK2酶标仪带有自动软件可进行定量分析，直接得到相应的浓度。

1.3 统计学方法

所有实验数据采用SPSS13.0f or windows软件包进行统计分析，计量资料均以（x±s）表示，采用t检验及单因素方差分析进行显著性分析。

2 结果

2.1 两组腹腔液中MC P-1的含量

研究组腹腔液中MCP-1浓度高于对照组，差异有显著性（P＜0.01），见表 1。

表1 对照组与研究组，腹腔液中MC P-1浓度（p g/mL）

2.2 腹腔液中MC P-1含量与内异症疾病分期的关系

研究组早期、晚期腹腔液中MCP-1浓度均高于对照组，差异均有显著性（P＜0.01）。研究组早期腹腔液中MCP-1浓度高于晚期，差异有显著性（P＜0.01），见表 2。

表2 对照组与研究组早期、晚期，腹腔液中MC P-1浓度（p g/mL）

2.3 两组腹腔液中MC P-1含量与月经期别的关系

对照组和研究组，不同月经期别腹腔液中MCP-1浓度均无显著性差异（P＞0.05），见表 3。

表3 对照组及研究组中，不同月经期别，腹腔液中MC P-1浓度（p g/mL）

3 讨论

3.1 MC P-1与内异症的关系

内异症患者腹腔液里观察到的主要细胞是巨噬细胞，它是自然免疫系统的主要成分，在正常情况下，通过参与免疫反应，清除月经期逆流入盆腔的子宫内膜碎片，以防止异位内膜植入[2]。

MCP-1属于C-C趋化因子（CCL2），是吸引单核细胞浸润至肿瘤及组织中的有效介质。它能募集外周血单核细胞迁移进入腹腔，通过提高细胞膜对钙的通透性而使单核细胞内钙离子浓度增加和呼吸爆发，产生并释放超氧阴离子，释放溶酶体酶，最终活化成为巨噬细胞，并能上调单核细胞和巨噬细胞黏附分子的表达以及细胞因子I L-1，I L-6的产生，导致腹腔液中巨噬细胞的数量和活性增加。

本研究显示（表1），内异症患者腹腔液中MCP-1浓度显著高于对照组。腹腔液中高浓度的MCP-1能募集大量单核/巨噬细胞进入腹腔，并激活巨噬细胞，导致腹腔中巨噬细胞的数量和活性明显增加。而活化的巨噬细胞能分泌许多血管源性生长因子和其他细胞因子，其分泌的细胞因子刺激腹膜间皮细胞产生MCP-1[3，4]，巨噬细胞本身也可分泌高水平的 MCP-1[5]，又可募集血液中的其他单核/巨噬细胞不断地迁入腹腔，并活化，从而形成一个正反馈级联放大效应。

在这种情况下，腹腔液中被MCP-1活化的巨噬细胞丧失了正常情况下清除异位内膜组织的功能，反而促进异位子宫内膜的种植和生长，参与内异症形成，提示MCP-1可能参与内异症的发病。

3.2 MC P-1与内异症疾病分期的关系

Y i n等报告，内异症Ⅰ期患者腹腔液中MCP-1浓度显著高于对照组，但对照组与Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期患者之间无显著性差异[6]，Khaleque等报道，Ⅰ，Ⅱ期患者腹腔液中MCP-1浓度显著高于非患者[7]，均提示MCP-1与疾病早期形成有关。

本研究显示（表2），内异症患者腹腔液中MCP-1水平在疾病的早期、晚期均显著高于对照组，虽然增高的幅度不同，但是仍然提示在内异症疾病过程中，腹腔液中MCP-1水平增高并不仅仅出现于早期，而是在疾病的全过程都持续增高，提示MCP-1可能参与内异症的发生。

Y i n等报告，Ⅰ期患者MCP-1浓度高于Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ期，但是内异症各期之间无显著性差异[6]；Khaleque等报道，Ⅰ，Ⅱ期患者腹腔液中MCP-1浓度显著高于Ⅲ，Ⅳ期患者[7]；李红等观察到早期病例MCP-1浓度显著高于晚期病例[8]；Pizzo等则指出从Ⅰ期、Ⅱ期到Ⅲ期，内异症患者腹腔液中MCP-1浓度逐渐增加[9]。可见，腹腔液中MCP-1浓度与内异症的疾病分期有没有关系、有怎样的关系，不同的研究者有各自不同的看法。

本研究显示（表2），内异症早期患者腹腔液中MCP-1浓度显著高于晚期。即在内异症发病的初始阶段，腹腔液中MCP-1增高的幅度更加显著，此时异位内膜细胞的黏附、植入、异位病灶周围血管化均处于关键时期。提示，MCP-1可能主要参与内异症的早期形成，有利于异位内膜的黏附、植入、生长、侵袭，可能与内异症的发生、发展有关。

3.3 MC P-1与月经期别的关系

Y i n等认为，腹腔液中MCP-1浓度，在各组患者中，均与所处月经期别无关[6]；Khaleque却指出，在对照及各组患者中，分泌期腹腔液中MCP-1浓度均高于增殖期[7]。

本研究显示（表3），内异症组和对照组、增殖期与分泌期，腹腔液中MCP-1水平均无显著差异，支持Y i n等的观点。内异症是一种雌激素依赖性疾病，但本研究的证据提示，内异症组和对照组，月经期别均与腹腔液中MCP-1水平无显著相关。

4 结论

MCP-1可能参与内异症的发病，并与内异症的发生、发展有关。内异症组和对照组，月经期别均与腹腔液中MCP-1水平无显著相关。

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[8]李红，王永来，王冬梅，等.子宫内膜异位症患者腹腔液及异位内膜组织中单核细胞趋化蛋白－1水平与疾病发生关系的研究.中国实用妇科与产科杂志，2005，21（1）:47-48.

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