环氧合酶-2与子宫内膜异位症血管形成相关性研究

冯晓娜，杜佳秋

（佳木斯大学附属第一医院妇产科，黑龙江 佳木斯 154002）

子宫内膜异位症（endometriosis，EMs）是育龄妇女的常见病，其所表现的痛经和不孕严重威胁着广大育龄女性的身心健康。虽然内异症是一种良性妇科疾病，但它的某些生物学行为却与恶性肿瘤类似，特别是其组织侵袭和血管生成能力，但其病因及发病机制尚未完全阐明，主导理论是1927年Sampson提出的经血逆流的子宫内膜种植学说。但是大量的研究已证实：经血逆流是一种育龄女性经期常见的生理现象，发生率高达70%～90%，而只有10%～15%的患者发生内异症，提示经血逆流只是诱因，而阐明异位内膜黏附、侵袭和血管形成等机制才是认识内异症发生、发展的关键。环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）是催化膜磷脂花生四烯酸转化为前列腺素类物质的限速酶，这些代谢产物在炎症、肿瘤、免疫、过敏等病理过程中起着重要作用。炎症过程中前列腺素的产生主要由COX-2来催化合成，而炎性前列腺素则被认为是促血管生成原。一些研究认为，COX-2参与子宫内膜异位症的血管形成，与EMs密切相关。血管形成在EMs的发病中具有重要作用，其中，血管内皮生长因子（vascularendothelial growth factor，VEGF）作为特异性的内皮细胞有丝分裂素，是最为关键的血管形成因子，它可以刺激血管内皮细胞生长和体内新生血管形成，通过自分泌与旁分泌的方式调控异位病灶的种植与发展。随经血逆流入腹腔的子宫内膜附着在腹膜和其他部位时，异位内膜本身及其周围组织新血供的建立和维持是子宫内膜异位种植成活和EMs发生的基本条件。已有研究表明，COX-2和VEGF在包括乳腺癌、消化道肿瘤、泌尿生殖系统肿瘤、脑肿瘤以及肺癌在内的多种肿瘤中明显增高，并与其生物学行为相关，但与子宫内膜异位症的关系报道较少。为此，医院采用免疫组织化学方法检测COX-2和VEGF在EMs组织中的表达，探讨COX-2和VEG F之间的相互关系，以及COX-2对EMs组织血管形成的影响，为子宫内膜异位症的病因及靶向治疗提供一条新的线索。

1 资料与方法

1.1 一般资料

（1）异位内膜组：选择佳木斯大学附属第一医院2011年1月—2011年6月入院EMs患者32例，年龄27～45（平均36.7）岁。术后病理检查证实为子宫内膜异位，并且异位病灶组织内可见完整的腺体和间质。同时选用在位及异位内膜标本32份，其中增生期14例，分泌期18例。

（2）正常对照组:因子宫肌瘤行子宫切除术后取子宫内膜的患者共33例（病理检查显著增生期内膜18例，分泌期内膜15例），年龄40～56（平均49.8）岁。后病理证实为正常子宫内膜组织。

两组年龄分布、内膜分期无明显差异（P>0.05）。所有纳入实验的患者无内分泌疾病及其他内外科疾病，术前6个月内均未接受过非甾体类激素药物治疗、放置宫内节育器及放、化疗，子宫内膜无病理改变。内膜分期及病理结论由病理科医师判断及复核。

1.2 结果判断

用定位定性法，低倍镜下观察切片5个视野，取其平均值为每张切片的观察结果，根据染色强度与范围作出每张切片分级。结果评定方法：COX-2、VEG F阳性效应产物为棕黄色颗粒，分布于胞浆。以细胞浆着色程度（浅、中、深）及计数100个细胞中的阳性细胞数来判定。组织学评定：阴性（-）：细胞无着色，记分为0分；弱阳性（+）：细胞轻度着色染成淡黄色，阳性细胞数<25%，记分为1分；阳性（++）：细胞着色染成黄色，阳性细胞数25%～50%，记分为2分；强阳性（+++）：细胞明显着色，呈棕黄色，阳性细胞数>50%，记分为3分。其中，阴性、弱阳性、阳性和强阳性，分别表示不表达、弱表达、中度表达和强表达。结果判断在双盲下进行，每张切片有两位病理医师分别计数。

1.3 统计学处理

免疫组化测定结果应用SPSS for windows 11.0统计分析软件进X2检验和spearman等级相关分析，P<0.05为差异有显著性。

2 结果

2.1 子宫内膜异位症患者异位与在位内膜及对照组正常子宫内膜COX-2的表达

无论在位与异位内膜，COX-2的染色主要定位于腺体细胞的胞质，间质细胞染色差异较大，不计入阳性计数。32例异位内膜中，有26例COX-2表达为阳性；32例在位内膜中，有20例COX-2表达为阳性；33例对照组正常子宫内膜中，有18例COX-2表达为阳性。见表1。

表1 COX-2在E Ms组织及对照组织中的表达

注：异位内膜与在位内膜相比*P<0.01，差异有显著性。异位内膜与正常内膜相比**P<0.01，差异有显著性。在位内膜与正常内膜相比***P>0.05，差异无显著性。

COX-2在对照组正常子宫内膜、EMs患者在位内膜、异位内膜组织中的表达阳性率分别为54.5%、62.5%、81.25%，呈现逐渐升高，差异具有显著意义（P<0.01）。异位内膜组与在位内膜组COX-2表达差异具有显著意义（P<0.01）；异位内膜组与正常内膜组COX-2表达差异具有显著意义（P<0.01）；在位内膜组与正常内膜组COX-2表达差异无显著意义（P>0.05）。

2.2 COX-2的表达与月经周期的关系

在EMs中的异位内膜组织不随月经周期而发生变化，大部分为增生期改变，推测其机制可能是月经周期的激素调控机制可能无法影响COX-2的表达，但其具体机制还需要其他相关试验的进一步证明。33例正常子宫内膜，增生期18例中有9例COX-2表达为阳性，分泌期15例中有9例COX-2表达为阳性。32例EMs在位内膜，增生期14例中有8例COX-2表达为阳性，分泌期18例中有12例COX-2表达为阳性。见表2。

正常子宫内膜中COX-2的表达，分泌期阳性率60%，增生期阳性率50%，两者比较差异具有显著意义（P<0.01），EMs在位内膜中的COX-2的表达，分泌期阳性率66.67%，增生期阳性率

表2 COX-2的表达与月经周期的关系

2.3 子宫内膜异位症患者异位与在位内膜及对照组正常子宫内膜VEG F的表达

无论在位与异位内膜，VEG F染色主要定位于腺体细胞的胞质，同时也分散存在于周围间质细胞及血管内皮细胞的胞浆中，但是为弱着色，不计入阳性计数。32例异位内膜中，有30例VEG F表达为阳性；32例在位内膜中，有19例VEG F表达为阳性；33例对照组正常子宫内膜中，有17例VEG F表达为阳性。见表3。

表3 VEG F在E Ms组织及对照组织中的表达

VEG F在对照组正常子宫内膜、EMs患者在位内膜、异位内膜组织中的表达阳性率分别为51.51%、59.38%、93.75%，呈现逐渐升高，差异具有显著意义（P<0.01）。异位内膜组与在位内膜组VEG F表达差异具有显著意义（P<0.01）；异位内膜组与正常内膜组VEG F表达差异具有显著意义（P<0.01）；在位内膜组与正常内膜组VEG F表达差异无显著意义（P>0.05）。

2.4 VEG F的表达与月经周期的关系

33例正常子宫内膜，增生期18例中有9例VEG F表达为阳性，分泌期15例中有8例VEG F表达为阳性。32例EMs在位内膜，增生期14例中有6例VEG F表达为阳性，分泌期18例中有13例VEG F表达为阳性，见表4。

正常子宫内膜中VEG F的表达，分泌期阳性率53.33%，增生期阳性率50%，两者比较差异具有显著意义（P<0.01），EMs在位内膜中的VEG F表达，分泌期阳性率72.22%，增生期阳性率42.86%，两者比较差异具有显著意义（P<0.05），EMs在位分泌期内膜的VEG F的表达高于正常分泌期内膜，差异具有显著意义（p<0.05）。

表4 VEG F的表达与月经周期的关系

2.5 COX-2与VEG F在子宫内膜异位症中表达的关系

COX-2表达阳性的EMs异位内膜组织中，VEG F的阳性表达率为100%（26/26）；COX-2表达阴性的EMs异位内膜组织中，VEG F的阳性表达率为66.67%（4/6），等级相关分析表明，两者的表达有相关性（r=0.78，P<0.01），见表 5。

表5 COX-2与VEG F在E Ms组织中的表达等级相关分析

3 本的收集和处理：腹腔镜手术常规置镜后讨论

COX-2被认为是一种快速反应基因，在大多数正常组织中活性很低，较少表达，但在细胞受到各种刺激，如炎性介质、生长因子、细胞因子、促癌剂等的诱导下迅速合成，参与炎症过程和肿瘤的细胞增殖与分化过程。本实验中，COX-2在EMs组织中的阳性表达率明显高于正常对照组，提示COX-2可能对EMs的发生发展有重要作用，与Ota等实验结果相符，Ota等认为，异位的子宫内膜COX-2的过度表达及活性异常导致前列腺素合成异常，可能是EMs表现为炎症及慢性疼痛的主要原因，并促进了其病理生理过程。

VEG F是一种高度特异性的血管内皮细胞有丝分裂原，与以血管过度生成为特点的病理过程密切相关。本实验研究发现，VEGF染色主要定位于腺体细胞的胞质，同时也分散存在于周围间质细胞及血管内皮细胞的胞浆中。其在正常内膜中的阳性表达率为51.51%，其中分泌期与增殖期相比P<0.05，差异有显著意义，与Smith等研究结果相符。EMs患者在位内膜和对照组正常内膜的VEG F在分泌期腺上皮的染色强度明显升高，提示在分泌期内膜种植更易于成功。内异症组在位内膜VEG F表达增强，说明这种血管生成活性增强的子宫内膜返流入腹腔后，可能比正常子宫内膜更容易刺激周围腹膜形成新的血管，从而使患病的可能性增加。VEG F的高表达使病灶部位有着更为丰富的血管生成，这位异位内膜的种植和存活提供了物质条件，而另一方面，异位内膜的生长可以表达更多的VEG F，又进一步促进血管增生，形成了一种恶性循环。

Mestre等报道，COX-2可使肿瘤中的VEG F表达上调，抑制COX-2则可抑制VEG F的表达。其机制为一些细胞因子诱导COX-2表达上调后可能通过增高的PG上调了VEG F的表达，VEGF又通过旁分泌或自分泌的形式作用于子宫内膜细胞，刺激血管生成。通过本文研究，可以为子宫内膜异位症的治疗提供一条新思路。