美卡素对急性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区PPARγ的影响

冯 涛

河南南阳医专第一附属医院神经内科 南阳 473058

脑缺血再灌注对改善缺血半暗带区域脑组织的血液供应、神经元功能的恢复具有重要意义。但缺血再灌注过程中也产生大量神经毒性因子，引起明显的缺血再灌注损伤［1］。过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（PPARγ）在机体广泛分布，介导多种生物效应。现已研究表明PPARγ与糖代谢的调节、脑梗死及动脉粥样硬化有关，且动脉粥样硬化和高血糖都是脑梗死的独立危险因素。对PPARγ的研究，为脑梗死的防治提供了一个新方向［2］。美卡素（替米沙坦）是血管紧张素受体拮抗剂，在预防和治疗高血压、动脉粥样硬化性心血管疾病方面有重要作用，在常规剂量下能部分激活PPARγ，继而产生代谢调节作用和脑保护作用。

本实验采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注（MCAO）模型，观察大鼠急性脑缺血再灌注后海马CA1区PPARγ表达情况、神经行为学改变及美卡素干预后的变化，为美卡素应用于临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 郑州大学实验动物中心提供SD大鼠，德国Lecia显微照像系统采集图像，美卡素由德国勃林格殷格翰公司研制生产。PPARγ抗体由北京中杉生物工程公司提供。

1.1.1 动物分组：选取72只雄性SD大鼠，体质量（220±20）g，随机分为4组：A组（正常组）、B组（假手术组）、C组（模型组）、D组（干预组）。每组18例，每组又被分为24h、72h、7d时间点三个亚组，每个亚组6只。

1.1.2 MCAO模型制备：采用改良Zea Longa线栓法制备：10%水合氯醛腹腔注射麻醉（350mg／kg），分离左侧颈总动脉（CCA）、颈内动脉（ICA）、颈外动脉（ECA），在颈外动脉上剪一 “v”形小口，插入线栓，固定线栓至ECA，顺势插入线栓，缓慢向ICA入颅方向推进，约18～20mm有阻力时停止，将线和ECA一同结扎，缝合皮肤，2h后进行再灌注。

1.1.3 动物神经行为学评分：参照Zea Longa 5分制标准进行评分：0分，无神经行为改变；1分：前肢呈屈曲或者半屈曲状；2分：单肢出现运动障碍，可见画圈运动；3分：行走时可见向一侧倾斜或摔倒；4分：意识不清或死亡。选择1～3分动物进行实验观察。

1.1.4 动物处置：A组为正常大鼠；B组切开皮肤，分离左侧颈总动脉后缝合皮肤；C组制作大鼠 MCAO模型，在MCAO后2h给予0.9%氯化钠液2mL灌胃；D组在MCAO后2h给予美卡素［1.5mg／（kg·d）］灌胃。各时间点进行神经行为学评分后处死，灌注固定后取脑、固定、制作脑部冠状石蜡切片。免疫组化染色（SP法）测定CA1区PPARγ的表达变化。

2 结果

2.1 神经行为学评分 A、B组无明显神经行为学改变，C、D组神经行为学评分均明显增高，D组神经功能缺损较C组降低 （P＜0.05），结果见表1。

表1 4组大鼠神经行为学改变评分比较 （）

表1 4组大鼠神经行为学改变评分比较 （）

注：与C组相比，▲P＜0.05

组别24h 72h 7d A组000 B组 0 0 0 C组 2.48±0.51 2.46±0.58 1.97±0.67 D组 1.58±0.52▲ 1.48±0.53▲ 1.17±0.48▲

2.2 海马CA1区PPARγ的表达变化 4组大鼠海马CA1区PPARγ均有表达，A、B组PPARγ表达变化不明显（P＞0.05），C、D组PPARγ24h表达明显，72h明显下降，7d下降趋于平稳，D组PPARγ表达明显高于C组各时间点（P＜0.05），结果见表2。

表2 4组海马CA1区PPARγ表达变化比较 （）

表2 4组海马CA1区PPARγ表达变化比较 （）

注：与 A、B组相比，＃P＜0.05；与C组相比，※P＜0.05

A组136.27±8.08130.69±2.78142.08±4.05 B组 130.43±6.37140.39±2.45142.72±2.36 C组 103.45±6.44＃ 96.87±8.24＃ 110.14±8.73＃D组 120.11±4.35＃※114.13±6.07＃※128.93±8.47＃※

3 讨论

急性缺血性脑血管病是多种原因导致脑全部或局部血液循环障碍、组织缺血缺氧，出现局灶或全脑功能受损症状。脑梗死灶在缺血缺氧几分钟后就形成，如果没有血液的再灌注及良好的侧枝循环的建立，梗死灶逐渐向缺血半暗带区（Ischemic Penumbra，IP）扩展，最终与IP完全融合。脑缺血后早期恢复血流的再灌注显得十分重要。过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（PPARγ）是基因转录中传递过氧化物酶体增长因子效应的一类细胞核受体，在调节血糖稳定，抑制炎症因子及抗动脉粥样硬化等有重要作用。脑缺血再灌注后，小胶质细胞的激活、诱导型一氧化氮的过度表达等诱导的免疫炎症反应是造成再灌注损伤的主要原因之一［3］。PPARγ激动剂可抑制JAK－STAT、NF－κB等炎症信号通路来抑制炎症介质的生产和释放，起到抑制炎症反应的作用，从而减轻脑缺血再灌注损伤。

现研究表明美卡素（替米沙坦）不但是ARB类药物，还是在常规治疗剂量下具有激动PPARγ的作用［4］。替米沙坦是选择性的PPARγ激动剂与吡格列酮等传统的PPARγ激动剂相比，替米沙坦克服了传统PPARγ激动剂可引起水钠潴留，增加体重等不良反应。对于合并高血压、糖尿病、心功能不全等的脑血管疾病，应用替米沙坦治疗具有有广阔的前景。本实验发现，应用美卡素干预大鼠急性脑缺血再灌注后，海马CA1区PPARγ表达明显增多，大鼠神经行为学评分降低，起到脑保护的作用，也为美卡素应用于临床治疗缺血性脑血管病提供理论依据。

［1］Pulsinelli WA，Jacewicz M，Levy DE，et al.Ischemic brain injury and the therapeutic window［J］.Ann NY Acad Sci，1997，835（19）：187－193.

［2］郭金涛，高甜，宋颖飞.PPARγ激动剂对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后IL－1β、IL－6和 TNF－α含量的影响［J］.中国实用神经病杂志，2008，11（2）：20－22.

［3］Wang JY，Shum AY，Chao C.Production of macrophagein flammatory protein－2following hypoxia／re oxygen nationinglial cells［J］.Glia，2000，32：155－164.

［4］Diep QN，El Mabrouk M，Cohn JS，et al.Structure，endothelial function，cell growth，and inflammation in blood Vessel of angiotensin II－infused rats：role of peroxisome proliferator activated receptor gamma［J］.Circulation，2002，105（19）：2296－2302.