系统聚类分析在红花质量评价中的应用

2011-06-07超刘峰马存德马久太王西芳王小平

世界中医药 2011年2期

关键词：试品锥形瓶灰分

赵超刘峰马存德马久太王西芳王小平

（1陕西步长制药有限公司，陕西省西安市高新路50号南洋国际19层，710075；2陕西中药学院）

中药研究

系统聚类分析在红花质量评价中的应用

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（1陕西步长制药有限公司，陕西省西安市高新路50号南洋国际19层，710075；2陕西中药学院）

聚类分析；红花

红花为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花。夏季花由黄变红时采摘，阴干或晒干。本品性温，味辛，具有活血通经、散瘀止痛之功效，用于闭经、痛经、跌打损伤、疮疡肿痛等［1］。目前，对红花的研究资料较多，但缺乏对其质量的综合评价方法。为科学评价红花质量及合理利用红花资源，我们对12个产地的红花进行了分析，采用2005年版药典红花标准中检查、浸出物、含量测定项下的方法对12批样品进行分析，并以它们的含量作为化学特征变量，采用SPSS17.0统计软件，在方法上采用欧氏距离测量，每两样本间用Average linkage法连结。对12批红花样品进行了系统聚类分析，为红花质量综合评价方法的建立和实现中药质量标准化作了有意义的探索。

1 仪器及试药

1.1 仪器 Agilent 1200LC型高效液相色谱仪；VWD检测器；TG328A型电光分析天平（上海精密仪器厂）；USC-302型超声波清洗器（上海精密仪器厂）；UV-2100紫外-可见分光光度计（成都科析电子商务有限公司）；SX2-5-12马弗炉；CS101-2A银河电热干燥箱（中国重庆银河试验仪器有限公司）等。

1.2 试剂甲醇、丙酮、盐酸、磷酸等试剂为分析纯；流动相所用甲醇、乙腈均为色谱纯，水为纯净水；羟基红花黄色素A（111637-200704）、山柰素对照品（110861-200606）均由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 样品所采集的样品见表1。

2 方法

2.1 烘干法测水分［1］取供试品粉末3g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过10mm，精密称定，打开瓶盖在105℃干燥5h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，冷确30min，精密称定，再在上述温度干燥1h，移置干燥器中，冷确30min，精密称定，至恒重，由减失的重量计算样品中的含水量（%）。

2.2 总灰分测定［1］取供试品粉末4g，精密称定，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量，缓慢炽热，至完全碳化时，逐渐升高温度至500℃～600℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣重量，计算样品中总灰分的含量（%）。

表1 样品编号

2.3 酸不溶性灰分的测定［1］取2.2项下的灰分，在坩埚中加入稀盐酸10mL，置水浴上加热10min，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至滤液不显氯化物反用为止，滤渣连同滤纸置同一坩埚中干燥，炽灼至恒重，根据残渣重量，计算样品中酸不溶性灰分的含量（%）。

2.4 吸光度［1］取本品，置硅胶干燥器中干燥14h，研细成粉，取0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加80%丙酮溶液50mL，连接冷凝管，置50℃水浴上温浸90min，放冷，用3号垂熔融玻璃漏斗滤过，收集滤液于100mL量瓶中，用80%丙酮溶液25mL分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80%丙酮溶液至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录ⅤA），在518nm的波长处测定吸光度。

2.5 浸出物测定［1］水冷浸法：取供试品粉末4g，精密称定，置250mL锥形瓶中，精密加水100mL，密塞，冷浸，前6h时时振摇，再静置18h，用干燥滤器迅速滤过，精密量取续滤液20mL，置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称重，根据残渣重量，计算样品中浸出物的含量（%）。

2.6 含量测定［1］1）羟基红花黄色素A：取供试品粉末（过3号筛）约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入25%甲醇50mL，称定重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用25%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液照2005年版药典附录ⅥD及红花含量测定项下的相关条件进行羟基红花黄色素A的含量测定。2）山柰素：取供试品粉末（过3号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液15mL，置平底烧瓶中，加盐酸溶液（15→37）5mL，摇匀，置水浴中加热水解30min，冷却后转移至25mL的量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液照2005年版药典附录ⅥD及红花含量测定项下的相关条件进行山柰素的含量测定。

3 结果与分析

测定结果见表2。

表2 测定结果

总灰分、酸不溶性灰分、吸光度、水溶性浸出物、羟基红花黄色素A、山柰素含量可以从不同角度反映红花的质量，本文采用SPSS17.0统计软件，以上述指标作为一般变量，综合评判红花样品间差异，从而对其进行合理分类。

本实验用SPSS17.0统计软件中的系统聚类分析程序对12批红花样品进行聚类分组。在方法上采用欧氏距离测量，每两样本间用Average linkage法连结。对12批红花样品进行聚类分组。结果见图1。

由图1可见，12批红花样品最终可聚成2大类：其中样品1为一类，该类样品的总灰分、酸不溶性灰分均不符合药典标准，为不合格药材。样品2-12聚为一类，该类样品各项指标均符合药典标准，为合格药材。聚类结果与药典方法鉴定结果完全一致。样品2 -12可被分为2类，说明产地对红花质量的综合评价影响不大，而起主要作用的是产地环境、采收时间、储存条件等因素，提示红花的质量除了与其产地有关外，还与产地环境、采收时间、储存条件等因素有关。