穿通支原体感染对成人原发性IgA肾病患者外周血T细胞亚群的影响

史艳玲 许菲菲 章建娜

穿通支原体(Mycoplasma penetrans，Mpe)是近年来新发现的致病性支原体，因在HIV感染及AIDS的发病进程中起辅助作用，被称为艾滋病相关支原体［1，2］。在其他疾病如抗磷脂抗体综合征、非淋菌性尿道炎、肿瘤等患者的血液和/(或)分泌物中也逐渐检到Mpe。IgA肾病是目前国内外最常见的慢性肾小球肾炎，在中国、日本、新加坡等亚太地区，约占原发性肾小球疾病的45% ～50%。在发病20年后，约20%～30%的IgA肾病缓慢进展至慢性肾功能不全，并最终发展为终末期肾病［3］。因此，探讨IgA肾病的发病及进展因素有重要意义。有研究发现IgA肾病患者血液和尿液中Mpe感染率明显增高［4］。本研究采用流式细胞术，检测IgA肾病患者外周血 CD4+、CD8+、CD3+细胞的水平，比较 IgA肾病患者Mpe感染组和非Mpe感染组各细胞的水平，探讨Mpe感染对IgA肾病患者T细胞亚群的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究分两组IgA肾病组、正常对照组，IgA肾病组根据有无Mpe感染又分为Mpe感染组19例和非Mpe感染组83例(除外同时有其他支原体感染16例)。IgA肾病组:选取2009年1月至2010年6月期间，在温州医学院附属第一医院肾内科经肾活检确诊的原发性IgA肾病患者，共118例，年龄＞18岁，除外继发性疾病所致IgA肾病;选取同期在本院体检者86例为正常对照组(除外支原体感染)。两组患者还需满足以下标准:①近7 d内未应用抗菌药。②近1年内未接受免疫抑制治疗;或接受免疫抑制治疗，但疗程不足1个月。

1.2 血液标本的留取和处理 取研究对象清晨空腹静脉血2 ml，肝素抗凝，采用流式细胞术测定 CD3+、CD4+、CD8+细胞，试剂盒为BD MultitestTMIMK Kit，购自美国BD公司。流式细胞仪为FACSCalibur，购于BD公司。流式细胞术由本院医学科学研究所检测。用促凝管采集清晨空腹静脉血4 ml，4000rpm离心15 min，分离血清2 ml，12000rpm 离心15 min，弃上清，沉淀用于提取支原体DNA。

1.3 Mpe及支原体检测

1.3.1 Mpe培养 采用改良SP-4培养基培养，0.2 ml的菌株接种于1.8 ml培养基中，37℃ 5%CO2孵箱培养。支原体培养成功后，抽取2 ml菌液用于支原体DNA提取，采用全式金基因组提取试剂盒进行DNA提取，具体操作按说明书进行。

1.3.2 支原体检测 用支原体种属通用的16s rRNA基因扩增支原体Genus片段，阳性提示支原体感染，阳性标本应用Mpe P35脂蛋白基因扩增Mpe目的片段(引物序列见表1)，操作按PCR试剂盒(TOYOBO公司)说明书进行。Southern blot法进一步证实Mpe感染。

2 结果

2.1 一般临床资料 IgA肾病组:118例患者，男64例，女54例，男女比:1.2∶1，平均年龄(40.84±6.35)岁。正常对照组:86例，男45例，女41例，男女比:1.05∶1，平均年龄为(40.65±6.98)岁。两组之间比较:性别和年龄差异无统计学意义(P＞0.05)。

2.2 穿通支原体检测结果与试验分组 正常对照组，86例Genus和Mpe P35均阴性。IgA肾病组:35例Genus阳性(阳性率29.6%)，19例Mpe P35阳性(阳性率16%)。

根据Genus和Mpe P35检测结果，将IgA肾病组分为Mpe感染组和非Mpe感染组，Mpe感染组纳入Mpe P35阳性19例。非Mpe感染组纳入Mpe和Genus均阴性83例。

2.3 IgA肾病患者T细胞亚群的变化 IgA肾病组患者外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞比例较正常对照组明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)，而CD4+/CD8+比值较正常对照组明显减低，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 支原体PCR检测引物

表2 IgA肾病患者T细胞亚群的变化

2.4 Mpe感染对IgA肾病患者T细胞亚群的影响 Mpe感染组和非Mpe感染组患者外周血中CD3+、CD4+和CD8+T细胞水平较正常对照组高，差异有统计学意义(P＜0.05)，而CD4+/CD8+比值较正常对照组减低，差异有统计学意义(P＜0.05)。与非Mpe感染组相比Mpe感染组患者外周血CD3+、CD4+细胞水平及CD4+/CD8+比值减低，差异有统计学意义(P＜0.05)，两组间CD8+细胞水平比较差异有统计学意义(P＞0.05)。见表3。

表3 穿通支原体感染对IgA肾病患者T细胞亚群的影响

3 讨论

目前已知Mpe可增强HIV的致病性，加速艾滋病进程。同时研究发现Mpe也参与了如肿瘤的形成、转移等多种疾病过程［5，6］。研究发现IgA肾病患者血液和尿液中Mpe检出明显高于正常人群，提示Mpe感染可能参与了IgA肾病的发病。Mpe感染是通过何种机制参与IgA肾病的过程，尚不明确。

本研究采用流式细胞术，检测 IgA肾病患者外周血CD4+、CD8+、CD3+细胞的水平，并比较Mpe感染组和非 Mpe感染组各细胞的水平，探讨Mpe感染对IgA肾病患者T细胞亚群的影响，结果发现IgA肾病患者与正常对照组相比，CD3+、CD4+和CD8+细胞水平明显升高，CD4+/CD8+比例减低，Mpe感染后，IgA肾病患者外周血中CD3+、CD4+细胞升高程度有所缓解，CD4+/CD8+比值进一步降低。

目前认为IgA肾病是一种免疫复合物病，已知Th细胞亚群失调参与了IgA肾病的发病。主要表现为Th2功能亢进及其细胞因子(IL24与IL25)生成增多、Th1细胞因子(IFN2 g与IL22)相对不足使IgA分泌IgA增加，且致IgA糖基化异常，从而参与了IgA肾病的发生发展［7］。本研究发现IgA肾病组患者外周血中CD4+、CD8+、CD3+细胞的水平较正常对照明显升高，提示IgA肾病不但存在Th细胞亚群失调，还存在者其他淋巴细胞亚群失调。沈颖等也采用流式细胞术检测了IgA肾病患者外周血中CD3+、CD4+和CD8+的表达，发现与正常人相比，CD3无明显变化，CD4明显降低，CD8升高，CD4+/CD8+比值显著减小［8］。虽然 CD3+和 CD4+细胞比例与我们的结果不一致，但是CD4/CD8比值与我们的研究结果一致。因此，CD4+和CD8+细胞亚群失调参与了IgA肾病的病程。

本研究发现Mpe感染组较非感染Mpe组CD3+和CD4+细胞比例的升高有所缓解，Mpe感染后IgA肾病这种T细胞亚群失调反而有轻微改善。本研究结果恰好可以解释我们原来的研究发现的:Mpe感染组较非Mpe感染组IgA肾病患者临床表现轻，多表现为发作性肉眼血尿，且病理严重程度分级较轻。目前无Mpe感染机体后机体T细胞亚群的改变的研究，但有研究观察到其他支原体感染如肺炎支原体后T细胞亚群失调，且多表现为CD3+和CD4+细胞比例减低，支持了本研究结果。

Mpe和其他致病性支原体类似，具有特殊的尖端结构，能吸附并穿入细胞，在细胞内增殖、形成空泡，导致细胞死亡。Mpe可黏附和入侵RBC、CD4+T细胞和巨噬细胞，活化NF-κB，促进 TNF-α、IL-1、IL-6 等炎症因子释放，诱导巨噬细胞凋亡。这可能部分解释本研究中Mpe感染的IgA肾病患者外周血中CD4+细胞水平减低。

［1］ Lo SC，Hayes MM，Wang RY，et al.Newly discovered mycoplasma isolated from patients nfected with HIV. Lancet，1991，338(8780):1415-1418.

［2］ 曹玉璞，叶元康.支原体与支原体病.第1版.人民卫生出版社，2000:151-162.

［3］ Monterim RC，Moum IC，Launay P，et al.Pathogenic sign ificance of IgA receptor interaction s in ISA receptor intemctlons in IgA nephrop athy.Trends Mol Med，2002，8(10):464-468.

［4］ 温秀姝，周丽萍，王赛芳，等.IgA肾病患者血液、尿液及咽拭子标本中穿通支原体的分离检出.中国微生态学杂志，2008，20(2):174-177.

［5］ Zhang B，Shih JW，Wear DJ，et al.High-level expression of H-ras and c-myc oncogenes in mycoplasma-mediated malignant cell transformation.Proc Soc Exp Biol Med，1997，214(4):359-366.

［6］ 朱丰村，周丽萍.穿通支原体感染对肿瘤浸润及转移的影响.检验医学，2010，25(2):113-117.

［7］ Chintalacharuvu SR，Nagy NU，Sigmund N，et al.T cell cytokines determine the severity of experimental IgA nephropathy by regulating IgA glycosylation.Clin Exp Immunol，2001，126，326-333.

［8］ 沈颖，李丰良，张金黎，等.IgA肾病患者外周血T细胞亚群及Fas/Fasl的表达.中国中西医结合肾病杂志，2009，10(10):917-918.