血塞通泡腾片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定

何三民，余志怡，戴德雄

(1.浙江省金华市中心医院，浙江 金华 321000;2.浙江维康药业有限公司，浙江 丽水 323000)

血塞通泡腾片为三七总皂苷加辅料制成的泡腾片，具有活血祛瘀、通脉活络之功效，用于脑路瘀阻、中风偏瘫、心脉瘀阻、胸痹心痛，脑血管病后遗症、冠心病心绞痛属上述证候者，临床效果显著。三七叶总皂苷中含人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1，原颗粒剂采用紫外分光光度法测定人参总皂苷[1]，测定方法的准确性差。为了有效控制该产品的质量，笔者参考相关文献建立了高效液相色谱法[2-4]，用于测定血塞通泡腾片中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量，方法简便、准确、重复性好，可作为该制剂的质量控制方法。

1 仪器与试药

Agilent 1100型液相色谱仪，浙江大学N 2000色谱工作站;岛津UV-1240型紫外分光光度计;Sartorius BP 211D型电子天平;JL-180 DTH型超声波清洗器。人参皂苷Rb1对照品(批号为110704-200420)、人参皂苷Rg1对照品(批号为110703-200726)，三七皂苷R1对照品(批号为110745-200415)，供含量测定用，由中国生物药品制品检定所提供;血塞通泡腾片(批号分别为20081101，20081201，20081203，20090602，20090702，20090703，浙江维康药业有限公司);乙腈为色谱纯(美国Fisher试剂公司)，水为双蒸水(自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromteck C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈 -水溶液，梯度洗脱(表1);流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;检测波长:203 nm;进样量:10 μL。

表1 流动相梯度洗脱表

2.2 溶液制备

精密称取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品适量，用甲醇溶解并制成每1 mL分别含0.40 mg人参皂苷Rb1、0.40 mg人参皂苷Rg1和0.10mg三七皂苷R1的对照品溶液。取本品10片，研细，称取0.25 g，精密称定，精密加入甲醇25 mL，精密称定，超声提取30 min，取出放冷，称定质量，补充甲醇至原重，摇匀，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。按处方比例取一定量的辅料，按成品工艺法进行制备，得缺三七总皂苷的空白制剂，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性考察:按拟订的色谱条件，分别对供试品溶液、对照品溶液和阴性对照品溶液进行分析。结果阴性对照无干扰。

线性关系考察:精密称取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品适量，用甲醇溶解并制成每1 mL分别含0.396 mg人参皂苷 Rb1、0.404 mg人参皂苷 Rg1和0.104 mg三七皂苷 R1的对照品溶液，分别精密吸取溶液 4，8，12，16，20 μL，按拟订的色谱条件测定峰面积，以进样量(X)对峰面积(Y)进行线性回归。人参皂苷 Rb1的回归方程为 Y=133 059.4 X+5 176.9，r=0.999 7(n=5)，表明其进样量在 1.584～7.920 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系;人参皂苷Rg1回归方程为 Y=178 710.8X-13 382，r=0.999 7(n=5)，表明其进样量在1.616～8.080 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，三七皂苷 R1的回归方程为 Y=15 780.6 X+5 067.7，r=0.999 0(n=5)，表明其进样量在0.416～2.080 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样6次。结果人参皂苷 Rg1峰面积的 RSD为1.62%(n=6)，人参皂苷 Rb1峰面积的RSD为1.63%(n=6)，三七皂苷R1峰面积的 RSD为1.48%(n=6)，表明方法精密度良好。

重复性试验:取样品(批号为20081101)共5份，精密称定，依法制备供试品溶液并测定含量。结果三七总皂苷含量平均值为83.22 mg/g，RSD为0.58%(n=5)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20081101)溶液，于室温下放置 0，12，24，36，72 h 后，按拟订的色谱条件测定。结果人参皂苷Rg1峰面积的 RSD为1.27%(n=5)，人参皂苷Rb1峰面积的 RSD为1.30%(n=5)，三七皂苷 R1峰面积的 RSD为1.77%(n=5)，表明供试品溶液在72 h内稳定。

加样回收试验:精密称取已知含量的样品(批号为20081101，人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的含量分别为38.733，58.083，10.504 mg/g)0.125 g共6份，分别精密加入0.922 g/L的人参皂苷Rg1对照品溶液4，5，6 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量，计算回收率，结果见表2。由于本试验采用了梯度洗脱，故在加样回收试验时选定具代表性的人参皂苷Rg1为指标，结果表明方法加样回收试验符合要求。

表2 人参皂苷Rg1加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取6批样品，依法制备供试品溶液，按拟订的色谱条件测定含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果(mg/片)

3 讨论

取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1和三七皂苷R1对照品溶液，于200～400 nm波长范围内进行紫外扫描。结果在203 nm波长处有最大吸收，故测定波长确定为203 nm。使用Aichrom C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)可基本达到基线分离，但分析时间较长;而Kromateck C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)能在较短时间内完成分析，基线未能达到分离。综合考虑分析时间、峰形对称度及美观度等因素，选用 Kromateck C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)为分析用色谱柱。

本试验对超声处理和回流提取进行了比较，结果显示两者对三七总皂总含量的提取效率基本一致，参考药典及文献报道，确定提取方法为超声处理。对提取时间(15，30，45 min)进行了考察，结果超声30 min时有最大提取率，而时间的延长并不能增大三七总皂苷的提取率，证明超声30 min已基本提取完全。同时，对提取溶剂甲醇、乙醇进行筛选，结果甲醇提取效率均高于其他浓度乙醇溶液，因此选甲醇作为提取溶剂。

[1]WS3-B-1475-93，中华人民共和国卫生部颁药品标准中药成方制剂(第十二册)[S].

[2]王隶书，李 阳，程东岩.HPLC法测定通栓冻干粉针中人参皂苷Rb3的含量[J].中国实验方剂学研究，2005，11(6):11-12.

[3]王隶书，程东岩，董方言.三七叶的HPLC指纹图谱的研究[J].中成药，2003，25(2):89-90.

[4]代 龙.HPLC法测定血塞通分散片中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Rb1的含量[J]. 齐鲁药事，2009，28(6):333-334.