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高效液相色谱法测定妇乐微丸中芍药苷含量

2011-06-02吴建明戴德雄诸葛周

中国药业 2011年11期
关键词:微丸牡丹皮芍药

林 海,吴建明,戴德雄,诸葛周

(1.浙江省临海市第一人民医院药剂科,浙江 台州 317000;2.浙江维康药业有限公司,浙江 丽水 323000)

妇乐冲剂由忍冬藤、大血藤、甘草、大青叶、蒲公英、牡丹皮等10味中药组方,具有清热凉血、消肿止痛的功效,可用于治疗盆腔炎、附件炎、子宫内膜炎等引起的带下、腹痛等妇科疾病。原质量标准检验项目简单[1],无法有效控制其内在质量。笔者将原冲剂改成微丸,并采用高效液相色谱法对处方中牡丹皮和赤芍所含芍药苷进行含量控制,为妇乐微丸的质量控制提供了快速、简便、准确的测定方法。

1 仪器与试药

岛津液相色谱仪,LC Solution色谱工作站;Sartorius BP 211D型电子天平;USC-502型超声波清洗器;TU-11901型紫外分光光度计。妇乐微丸(浙江维康药业有限公司试制,仅供本试验用,批号分别为 20090401,20090402,20090403,20090404,20090405);芍药苷对照品(批号为110736-200526,供含量测定用,中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Zorbax SB-C18柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86);流速:1 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:35 ℃;进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

芍药苷对照品易溶于甲醇中,故选用甲醇直接溶解,制成每1 mL含0.079 6 mg的溶液,即得对照品溶液。取本品装量差异检查项下的内容物,研细,取1 g,精密称定,置塞锥形瓶中,精密加入甲醇25 mL,称定质量,超声处理(功率250 W,频率25 kHz)30 min,放冷,再称定质量,用甲醇补足减失的质量,摇匀,滤过,精密吸取滤液10 mL,置中性氧化铝柱(12 mm×200 mm,中性氧化铝3g)上,以甲醇-乙酸乙酯(1∶1)50 mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇定容于10 mL容量瓶中,以微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得供试品溶液。按工艺制备缺赤芍和牡丹皮的双阴性微丸1.0 g,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

系统适用性试验:分别取对照品溶液、阴性对照品溶液和供试品溶液,过滤进样。色谱图见图1。可见,色谱基线平稳,辅料、杂质对测定无干扰。

线性关系考察:精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成不同质量浓度的对照品溶液,摇匀,分别精密进样0.019 9,0.039 8,0.079 6,0.159 2,0.238 8,0.398 0 μg,按拟订的色谱条件进行分析,测定峰面积,以峰面积为纵坐标、对照品进样量为横坐标绘制标准曲线,拟合得回归方程 Y=8×106X-4 204.6,r=0.999 7(n=6)。结果表明芍药苷进样量在0.019 9~0.398 0 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液 (0.079 6 g/L)10 μL,重复进样测定峰面积。结果峰面积的 RSD为0.99%(n=5),表明仪器精密度良好。

重复性试验:取批号为20090401的样品1 g,共5份,精密称定,依法制备供试品溶液并测定。结果平均含量为2.15 mg/g,RSD=1.72%(n=5),方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液,分别于 0,2,4,8,12 h 时进样测定。结果样品中芍药苷峰面积的 RSD为0.47%(n=5),表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验:精密称取样品(批号为20090401,含量平均值为2.15 mg/g)适量,各6份,分别精密加入芍药苷对照品溶液,按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量,计算回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取5批样品依法制备供试品溶液,按拟订的色谱条件测定,以外标法计算样品中芍药苷的含量。结果批号为20090401,20090402,20090403,20090404,20090405的样品中,每袋分别含芍药苷8.60,8.84,8.98,8.94,8.80 mg。

3 讨论[2-4]

曾查阅参考文献,选用乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)、甲醇-0.5%磷酸二氢钾溶液(35∶65)为流动相,流速1.0 mL/min,以Kromasil C18柱(150 mm ×4.6 mm,5 μm)为分析柱,柱温 35℃。结果以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相可达到满意的分离效果,芍药苷峰已达基线分离,峰形对称;缺赤芍和牡丹皮的阴性对照品对测定无干扰。

曾采用Kromasil C18柱和Zorbax SB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相,二者均达到满意的分离效果,芍药苷峰与相邻峰分离度大于1.5,理论板数以芍药苷峰计算均大于3 500。

对样品提取时间、提取方法进行了比较,结果超声处理与加热回流提取相比,两者含量相当,故选用超声处理作为提取方法;还对提取时间(15,30,60 min)进行了考察,结果超声处理30 min时芍药苷基本被提取完全,故选择提取时间为30 min。

[1]WS3-B-1541-93,中华人民共和国卫生部颁药品标准中药成方制剂(第八册)[S].

[2]杨 松,靳宝峰,孙 玫,等.反相高校液相色谱法测定固本益肠片中芍药苷的含量[J].中成药,2001,23(11):794-795.

[4]郭五保,张秀芝,姚 华,等.HPLC法测定血府逐淤软胶囊中芍药苷与甘草酸的含量[J].西北药学杂志,2003,18(2):54-55.

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