葛根清肠颗粒质量控制方法研究

刘海容

(河北省中医院药剂科，河北 石家庄 050011)

葛根清肠颗粒是由葛根、诃子、生地榆、黄连、秦皮等中药制成的颗粒剂，具有和胃理肠、清热化湿、行热消胀、止泻定痛之功效，用于治疗胃肠湿热、气机郁滞所致的泄泻。为有效控制产品质量，笔者以薄层色谱法进行定性鉴别，用高效液相色谱法对葛根中葛根素进行了含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

LC-10ATVP型高效液相色谱仪，SPD-10AVP型紫外检测器(日本岛津)。葛根素对照品(批号为0752-200209)，没食子酸对照品(批号为0831-9501)，中国药品生物制品检定所提供;葛根清肠颗粒以及无葛根或无诃子的阴性对照品(河北省中医院提供，批号为20100326);乙腈为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别(薄层色谱法)

葛根:取葛根素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。取葛根清肠颗粒1 g，加乙酸乙酯30 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯使溶解，作为供试品溶液。再取无葛根的阴性对照品同法制成阴性对照品溶液。取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G板上，以三氯甲烷-甲醇-水(14∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏15 min，置紫外灯下(365 nm)检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，而阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图 1 A)。

诃子:取没食子酸对照品2 mg，加适量甲醇使溶解，制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。取葛根清肠颗粒1 g，加无水乙醇30 mL，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。再取无诃子的阴性对照品同法制成阴性对照品溶液。取上述3种溶液各2 μL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸(3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇液，日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图1 B)。

图1 薄层色谱图

2.2 葛根素含量测定(高效液相色谱法)

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Kromasil-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:乙腈-0.1%磷酸溶液(12∶88);检测波长:250 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:室温;进样量:10 μL。在此条件下，葛根素与样品中其他组分色谱峰可基线分离，理论板数以葛根素峰计应不低于4 000。

2.2.2 溶液制备

取葛根清肠颗粒适量，研细，取细粉约0.2 g，精密称定，加甲醇20 mL，加热回流提取30 min，冷却，滤过，置25 mL容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。另取不含葛根素的阴性对照品，同法制成阴性对照品溶液。精密称取葛根素对照品适量，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为100 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

空白干扰试验:按照拟订的色谱条件，分别对2.2.2项下3种溶液进样测定，记录色谱图。结果见图2。可见，阴性对照品溶液中的组分不干扰供试品溶液中葛根素的测定。

线性关系考察:精密称取质量浓度为100 μg/mL的对照品溶液 1，2，3，4，5，6 mL，分别置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，制成待测溶液，各精密吸取10μL，按上述条件测定，以峰面积(A)对进样量(X)进行线性回归，回归方程为 A=50 482.87X-14.6，r=0.999 7(n=5)。结果表明，葛根素进样量在0.2～2.0μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

图2 高效液相色谱图

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液10 μL，重复进样5次，依法测定。结果峰面积的 RSD为1.38%(n=5)，表明仪器精密度较好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，分别于制备后0，2，4，6，8 h时各进样1次。结果峰面积的 RSD=1.30%(n=5)，表明供试品溶液至少在8 h内稳定。

重现性试验:取同一批样品5份，按供试品溶液制备方法处理后依法进样测定，计算含量。结果平均含量的 RSD=1.40%(n=5)，表明方法重复性好。

加样回收试验:取已知葛根素含量的样品(批号为20100328)各约1.0 g，精密称定，分别加入对照品溶液，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 葛根素加样回收试验结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

依法制备3批样品的供试品溶液，吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定峰面积，按外标法计算。结果批号为20100122，20100210，20100326的样品中，葛根素含量分别为 1.357，1.360，1.361 mg/g，平均 1.359 mg/g。

3 讨论

对诃子进行薄层色谱鉴别时，应注意点样量不宜过大，且质量浓度不宜过高;经比较，采用聚酰胺薄膜比硅胶薄层板分离效果好，色谱斑点清晰。在葛根薄层色谱鉴别中，按2005年版《中国药典(一部)》葛根项下的提取方法[1]，结果葛根斑点不明显，提取率差;而用文中方法提取，所显葛根斑点清晰，提取效果理想。提取制剂中葛根素的方法，文献多有报道[2-4]。本试验选择加热回流法，并将不同溶剂、不同时间作为影响因素进行考察，结果甲醇加热回流30 min的提取方法最理想。总之，所建立的质量控制方法，可用于葛根清肠颗粒的质量控制，且简便快捷、准确可靠。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:263.

[2]贾向群，黎金平，沙 莹.高效液相色谱法测定根痛平中葛根素的含量[J].中国药业，2005，14(8):42.

[3]孙法丽，乌 毅，王春香.高效液相色谱法测定葛瓜降糖胶囊中葛根素含量[J].中国药业，2007，16(20):33-34.

[4]杨冬梅，杨世友.高效液相色谱法测定复方葛酮颗粒中葛根素含量[J].中国药业，2010，19(5):19-20.