青海省部分地区猪圆环病毒2型感染的血清学调查*

党成寿,李增魁

(1.青海省天峻县畜牧兽医站,青海天峻 817200;2.青海大学农牧学院动物医学系,青海西宁 810016)

青海省部分地区猪圆环病毒2型感染的血清学调查*

党成寿1,李增魁2

(1.青海省天峻县畜牧兽医站,青海天峻 817200;2.青海大学农牧学院动物医学系,青海西宁 810016)

应用猪圆环病毒2型抗体酶联免疫检测试剂盒,测定了青海省省内8个猪场的1 000个血清样本,对不同地区、不同年龄猪的进行了血清学调查。结果显示,青海省8个猪场均有猪圆环病毒2型(PCV-2)感染,全省猪的PCV-2感染的平均血清阳性率为25.9%,其中母猪、种公猪、生长育肥猪、保育猪及哺乳仔猪抗体阳性率分别35.3%、28.3%、26.2%、25.0%和14.9%;说明PCV-2在猪群中的感染非常普遍。

猪圆环病毒2型;血清学;酶联免疫吸附试

*通讯作者

猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒属的代表种,它是一种小而无囊膜、二十面体对称、共价闭合、环状、单股DNA病毒,病毒粒子直径平均为17 nm[1],是目前兽医学上发现的最小的动物病毒。A11an G M等[2]从断奶猪多系统衰弱综合征(Post-weaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)病例中分离到的PCV,称为猪圆环病毒2型(PCV-2)。目前在德国[3]、法国[4]、新西兰[5]、美国[6]、加拿大[7]、日本[8]等国家和地区已有从PMWS猪中检测到PCV-2的报道。我国学者证实在我国猪群中有PCV-2的存在[9-10]。这些资料说明PCV-2的感染在猪群中很普遍。

据Kim J等[11]认为PCV-2在5月份为发病高峰,猪群患病率为3%～50%,死亡率在8%～35%。而Pallares F J等[12]认为大部分PMWS病例发生于8周龄～18周龄,10周龄为发病高峰期。本病发展缓慢,一次发病可持续12月～18月之久,传播速度慢,易与其他疾病混淆。为了解青海省部分地区PCV-2的感染、流行分布情况,更好地预防和控制此病,我们于2009年3月～6月应用 ELISA 方法,对青海省部分地区的猪场猪血清进行了PCV-2抗体检测,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器设备 离心机、恒温箱、自动洗板机(DG3080)为南京华东电子集团医疗装备有限公司产品;安图斯酶标仪(Anthos2010)为上海森超贸易公司产品;微量移液器(Gilson)为北京伯乐生命科学发展有限公司产品。

1.1.2 试剂 PCV-2抗体酶联免疫检测试剂盒(PCV-2 Antibody ELISA kit),为武汉科前动物生物制品有限责任公司产品,生产批号为PC2009022801。

1.2 方法

1.2.1 调查方法 调查采用血清学检验和流行病学特点结合的方式进行。

1.2.2 被检血清 样品采自青海省互助、乐都、民和、大通和湟源等地区。通过前腔静脉或耳静脉采集了1 000份猪静脉血,经过血清分离后置于灭菌离心管中,4 000 r/min离心5 min,除去沉淀,保留上清,置于冰箱-20℃保存待用。

1.2.3 猪圆环病毒2型抗体ELISA检测

1.2.3.1 洗涤液的配制 浓缩的洗涤液在室温摇动使沉淀的盐溶解,然后用蒸馏水作20倍稀释。

1.2.3.2 样品的稀释 按1∶40的体积稀释待检血清,阳性和阴性对照1∶4稀释。

1.2.3.3 操作步骤 用稀释好的洗涤液洗板2次检测板(200μL/孔),每次静置2 min后倒掉,再在干净吸水纸上拍干;取稀释好的待检样品100 μL加入到检测板中;阴性对照和阳性对照各设2孔,每孔100 μL;轻轻振匀孔中样品置 37℃温育30 min;甩掉板孔中的溶液,用洗涤液洗板3次,200 μL/孔,每次静置3 min倒掉,再在干净吸水纸上拍干;每孔加羊抗猪酶标二抗100 μL,置37 ℃温育 30 min;洗涤5次(切记每次在干净吸水纸上拍干);每孔先加底物 A 液 50 μL 、再加底物 B 液 50 μL,混匀 ,室温(18℃～25℃)避光显色 10 min;每孔加终止液50 μL,10 min内测定结果。

1.2.3.4 结果判定 试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630值大于或等于1.0,阴性对照孔平均OD630值必须小于0.3;于波长630 nm处测酶标仪上各孔OD630值。样品OD630值大于0.42,判为阳性;样品OD630值在0.38～0.42之间,判为可疑;样品OD630值小于0.38,判为阴性。

2 结果

2.1 不同猪场猪血清PCV-2抗体检测结果

应用ELISA方法对青海省部分地区某8个猪场不同年龄猪的1 000份血清样品进行了猪圆环病毒2型的抗体检测,共检出阳性血清259份,总阳性率为25.9%(表1)。

表1 青海省部分地区不同猪场猪血清PCV-2抗体检测结果Table 1 T he seral antibody test results of PCV-2 at different swine farms in Qinghai

2.2 不同猪群感染PCV-2的情况

母猪抗体阳性血103份,抗体阳性率为35.3%;种公猪抗体阳性血清13份,抗体阳性率为28.3%;生长育肥猪抗体阳性血清 44份,抗体阳性率为26.2%;保育猪抗体阳性血清71份,抗体阳性率为25.0%;哺乳仔猪抗体阳性血清30份,抗体阳性率为 14.9%(表 2)。

2.3 临床症状和病理变化

对20例PCV-2阳性病例的临床症状观察,消瘦、被毛粗乱、发泄、苍白和黄疸是主要临床表现。在病猪群中有时亦见有包括咳嗽、发热、胃溃疡、中枢神经障碍、进行性呼吸困难等临床特征。有些初生仔猪断奶后出现皮肤表面有紫色的小丘疹、淋巴结肿大,有些保育猪出现过耳、四肢、脐部呈蓝紫色症状,死亡率和淘汰率均较高。剖检病猪发现肺部水肿呈橡皮样,表面黄褐色并有斑点,严重者可见肺泡出血;有些病例脾脏肿大,切面呈肉状,个别病例脾脏边缘有暗红色坏死灶;有些病猪出现颌下、肠系膜及纵膈淋巴结肿大,切面呈红白相间的大理石样花纹状;心、肝、肺、肾、肠出现肉芽肿性病变。

表2 不同猪群血清PCV-2抗体检测结果Table 1 The antibody test results of PCV-2 from different swine groups

3 讨论

通过对青海部分地区1 000只猪血清PCV-2血清学检测结果显示,阳性血清259份,阳性率为25.9%;不同猪群中母猪群的阳性率高达35.3%,而哺乳仔猪的阳性率较低,阳性率为14.9%;猪只随饲养时间的延长,PCV-2的感染机率增大,而使猪血清中的抗体阳性率随年龄的增长而升高,这与胡慧等[13]报道的河南地区PCV-2调查的数据相一致,而与周继勇等[10]报道的浙江地区PCV-2感染情况调查相反,所以本病的传播是否与垂直传播有关,尚需进一步证实。

本次对猪血清样品PCV-2抗体的血清学调查是随机抽样进行的,包括青海省5个地区的8个猪场中不同生长阶段的猪血清样本,具有一定的代表性。从检测结果看所有被检测猪场均存在不同程度的PCV-2感染,说明PCV-2的感染是相当普遍的。

肺泡巨噬细胞是PCV-2感染的主要靶细胞,其在感染初期机体清除病毒和启动特异性免疫应答过程中承担着重要作用,因此PCV-2感染对猪肺泡巨噬细胞活力、吞噬及细胞因子表达等免疫功能的有一定的影响。巨噬细胞除可以吞噬和杀灭多种病原微生物、处理凋亡损伤的细胞外,还可以对细胞内的抗原进行加工、处理和递呈,进而启动特异性免疫应答。本次调查中据猪场工作人员反馈,经血清学检测结果看,母猪的CSFV和FMDV抗体合格率均很高,而保育猪和肥育猪的抗体合格率都很低,普遍在50%以下。这与大部分母猪是经产母猪,已经过多次疫苗免疫接种有关,仔猪由于猪场存在不同程度的PCV-2的感染,造成母源抗体提供的保护不足,使得CSFV和FMDV疫苗免疫接种效果不佳[14-15]。

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Serological Investigation on Porcine Circovirus 2 in Qinghai Province

DANG Cheng-shou1,LI Zeng-kui2

(1.Animal Husbandry and Veterinary Staion of T ianj un,Tianjun,Qinghai,817200,China;
2.College of Agriculture and Animal Science,Qinghai University,Xining,Qinghai,810016,China)

In order to understand the prevalence of porcine circovirus 2(PCV-2)in Qinghai province,1 000 serum samples from 8 pig farms in Qinghai province were examined for antibody against PCV-2 by enzymelinked immunosorbent assay kit(ELISA).The results showed that PCV-2 were detected in all 8 pig farms,259 positive samples were detected,with the 25.9%positive rate.The positive rates of sow,boar,finishing pig,nursery pig and suckling pig were 35.3%,28.3%,26.2%,25.0%and 14.9%,respectively.The results indicated that PCV-2 prevalence was relatively severe in pig herds in Qinghai.

Porcine circovirus 2;serology;ELISA

S852.659.2

B

1007-5038(2011)09-0129-03

2011-05-06

党成寿(1973-),男,青海湟中县人,兽医师,主要从事动物疾病防控。