运动和尼尔雌醇联合应用对去卵巢大鼠骨矿盐含量的影响

宋 冰 张兆强

(湛江师范学院基础教育学院，广东 湛江 524037)

体内雌激素水平下降是女性绝经后骨质疏松发生和发展的主要原因之一，用雌激素替代疗法可有效阻止或延缓骨丢失，但其副作用仍为医师和患者忧虑。运动作为一种副作用少而有效的防治骨质疏松措施而逐渐被人们所重视。本文用去卵巢方法建立大鼠的骨质疏松模型，研究运动和半量尼尔雌醇(CCE3)联合应用对去卵巢大鼠骨矿盐含量的影响，为骨质疏松防治措施的研究和降低雌激素的用量以减轻其副作用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 药物及设备 CCE3片剂(上海华联制药厂生产)，2 mg/片。AE-240型电子分析天平(Mettler-Toledo仪器有限公司);SX 2-4-10型箱式电阻炉;YD-1型大鼠专用跑台(广东医学院研制)。

1.2 实验动物 4月龄SD雌性大鼠40只，体重(310.79±11.38)g，由广东医学院实验动物中心提供，用广东省卫生厅南海实验动物中心生产的标准固体饲料饲养，自由摄食、饮水。各组大鼠照明、通风、温度、湿度等饲养环境条件相同。40只雌性SD大鼠随机分成5组:正常对照组，假去卵巢组，去卵巢组，去卵巢+CCE3组，去卵巢+CCE3+运动组。每组8只。去卵巢+CCE3组大鼠和去卵巢+CCE3+运动组大鼠给予CCE3灌胃:根据 CCE3在临床上的常用量 50 mg·w－1·50 kg－1，大鼠为 1 mg·w－1·kg－1，本实验用半量，即 0.5 mg·w－1·kg－1。用CCE3片剂研成粉末状，加蒸馏水配成85 mg/L的溶液，按6 ml/kg(0.5 mg/kg)灌胃，于去卵巢手术后第 2天开始，1次/w，持续11 w。CCE3溶液于每次灌胃前配制，即配即灌。

1.3 去卵巢动物模型的建立 去卵巢组、去卵巢+CCE3组和去卵巢+CCE3+运动组大鼠用10 g/L戊巴比妥钠溶液腹腔麻醉(3.0 ml/kg)，无菌条件下，经腹部正中线切口，切除双侧卵巢。切下的卵巢经组织学鉴定确认。假去卵巢组大鼠的手术过程及操作与去卵巢组、去卵巢+CCE3组和去卵巢+CCE3+运动组相同，但不切除卵巢，只切除腹腔内一小块脂肪组织，经组织学鉴定确认。

1.4 动物运动训练 去卵巢+CCE3+运动组大鼠于术后第7天开始，置于YD-1型大鼠专用跑台〔1〕进行运动训练，每周5 d，每日连续匀速跑45 min，16 m/min，跑道倾角0°，持续10 w。

1.5 标本收集及测定 实验后第11周末动脉放血处死动物，取左股骨，剥净软组织后置烤箱中于110℃温度下烤48 h至恒重，于1/100 000分析天平上称骨干重，称干重后将其炭化，后在箱式电阻炉中700℃ 6 h使其灰化，用1/100 000分析天平称灰重。主要观察指标:各组大鼠体重、左股骨干重、左股骨干重/体重、左股骨灰重、左股骨灰重/体重、左股骨灰重占左股骨干重百分比。

1.6 统计学处理 应用SPSS15.0统计软件处理数据，数据以x±s表示，多个均数间比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 去卵巢对大鼠骨矿盐含量的影响 去卵巢组大鼠与假手术组大鼠比较，其骨干重、骨干重/体重、骨灰重、骨灰重/体重、骨灰重占骨干重百分比等指标均明显减少(P＜0.01)。假去卵巢组大鼠与正常对照组大鼠比较，各项指标的差异均无统计学意义(P＞0.05)。说明手术本身对大鼠骨矿盐代谢无显著影响，去卵巢组大鼠与假去卵巢组大鼠各项指标的差异是由于切除卵巢所引起的。见表1。

2.2 CCE3对去卵巢大鼠骨矿盐含量的影响 去卵巢大鼠给予半量CCE3灌胃后，与去卵巢组比较，其骨干重的差异无统计学意义(P＞0.05)。骨干重/体重、骨灰重、骨灰重/体重、骨灰重占骨干重百分比等指标均较去卵巢组增加(P＜0.05或P＜0.01)。但上述各指标仍低于假去卵巢组，差异有统计学意义(P＜0.01)。见表1。

2.3 运动对CCE3抗去卵巢大鼠骨矿盐丢失的影响 去卵巢+CCE3(半量)+运动组大鼠的骨干重、骨干重/体重、骨灰重、骨灰重/体重、骨灰重占骨干重百分比等指标均高于去卵巢组，差异有统计学意义(P＜0.01)。而且与去卵巢+CCE3(半量)组大鼠比较，除骨灰重占骨干重百分比的差异无统计学意义外(P＞0.05)。其余指标均升高，差异有统计学意义(P＜0.01)。说明运动与半量CCE3联合应用后，抗去卵巢大鼠骨矿盐丢失的效应明显优于单纯使用半量CCE3。另外，与假去卵巢组比较，去卵巢+CCE3(半量)+运动组大鼠的骨干重、骨干重/体重、骨灰重、骨灰重/体重、骨灰重占骨干重百分比等指标的差异均无统计学意义(P＞0.05)，说明运动与半量CCE3联合应用后，去卵巢大鼠丢失的骨矿盐基本上得到了恢复。见表1。

表1 运动和尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨矿盐含量的影响(x ± s，n=8)

3 讨论

去卵巢大鼠模型是一种高转换型骨质疏松模型，已被公认为“金标准”模型。本研究观察到，去卵巢使大鼠骨干重、骨干重/体重、骨灰重、骨灰重/体重、骨灰重占骨干重百分比等指标均明显减少，说明切除双侧卵巢后，大鼠骨矿盐含量显著降低，骨量明显丢失，这与女性绝经后骨质疏松的表现极为相似，说明造模是成功的。

雌激素替代疗法已成为临床上治疗骨质疏松症的有效措施之一，但基于雌激素对心血管系统及乳腺、子宫的毒副作用，在临床使用中具有一定的局限性。CCE3作为一种长效雌激素，在体内释放缓慢，具有长效、强效和口服方便等优点。CCE3能对抗去卵巢大鼠骨矿盐的丢失〔2〕，增加围绝经期妇女的骨密度〔3〕，使绝经后骨质疏松患者的骨密度增加，骨丢失减少〔4〕。CCE3通过促进大鼠骨组织中Ⅰ型胶原蛋白的合成、抑制其水解吸收，从而提高大鼠骨密度、改善骨质量〔5〕。CCE3可抑制大鼠破骨细胞的形成和分化，抑制破骨细胞的骨吸收活性，促进破骨细胞凋亡〔6〕。CCE3的副作用虽然较少和较轻，但临床研究表明，有10.9%的患者使用后出现阴道出血，9.09%的患者出现乳房胀痛或触痛〔7〕。因此，如何将雌激素替代疗法的副作用控制在最小范围，是临床上使用雌激素时必须考虑的问题。

运动能增加老年骨质疏松患者腰椎和髋部的骨量，促进骨形成和抑制骨吸收〔8〕。运动训练可对抗由于去卵巢所致的大鼠骨矿盐丢失〔9〕，骨元素 Ca、S、Mg、Zn、Co、Mn 的减少得到改善〔10〕，腰椎骨密度增加〔11〕，提高骨的生物力学性能〔12〕。

本研究说明运动与半量CCE3联合应用后，去卵巢大鼠丢失的骨矿盐得到了恢复，并且基本恢复到对照组水平。可见，运动对CCE3抗去卵巢大鼠骨矿盐丢失的效应有加强作用。临床上用CCE3治疗骨质疏松症时，可考虑联合应用适量运动，既能保证临床疗效，又能降低其用量，以减轻其副作用。

1 冯有辉，张兆强，刘锡仪，等.YD-1型大鼠跑台的设计与应用〔J〕.广东医学院学报，2002;20(2):163.

2 张兆强，刘浩宇，刘锡仪.尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨矿盐代谢的影响〔J〕.中国临床康复，2004;8(2):282-3.

3 齐绍霞.小剂量雌激素预防围绝经期骨质疏松症的临床观察〔J〕.中国骨质疏松杂志，2008;14(7):517-8.

4 廖二元，邓小戈，周智广，等.尼尔雌醇加孕激素治疗绝经后骨质疏松症的研究〔J〕.中华内分泌代谢杂志，2002;18(2):95-8.

5 朱志刚，郭向阳，张秀珍.尼尔雌醇对去卵巢大鼠骨组织中I型胶原代谢及组织蛋白酶K表达的影响〔J〕.中原医刊，2006;33(24):30-2.

6 杨晓莉，王文君，李大金，等.更年春方对破骨细胞的分化与凋亡及骨吸收活性的影响〔J〕.上海中医药杂志，2008;42(5):71-4.

7 李 兰，周 倜，邵晋康，等.绝经期骨质疏松雌激素替代治疗的临床研究〔J〕.中国骨质疏松杂志，2000;6(2):48-51.

8 朱欢丽，刘晓晴，夏 秦.运动对老年骨质疏松症患者骨量和骨代谢影响的研究〔J〕.中国妇幼保健，2007;22(9):1251-2.

9 张兆强，刘浩宁，刘锡仪.运动对大鼠骨矿盐含量的影响〔J〕.中国临床康复，2005;9(43):136-7.

10 张兆强，刘浩宇，刘锡仪.运动对去卵巢大鼠骨元素代谢的影响〔J〕.广东微量元素科学，2002;9(11):29-32.

11 黄泽锋，常 祺.去势大鼠腰椎骨密度及血清生化指标改变及运动训练的干预〔J〕.中国组织工程研究与临床康复，2007;11(23):4520-2.

12 章晓霜，许豪文，赵卫东.不同强度运动和雌激素联合作用对去卵巢大鼠骨骼生物力学性能的影响〔J〕.中国运动医学杂志，2006;25(2):187-91.