液质联用技术用于沉香中非法掺入含松香酸类物质的检测

张妤琳， 曹 玲， 谭 力， 周 谧

(1.江苏省食品药品检验所，江苏 南京 210008;2.江苏省南通市药品检验所，江苏南通， 226006)

沉香为蒙医和中医常用的贵重药材，始载于 《名医别录》，列为木部上品，具有行气止痛、温中止呕、纳气平喘的功效。沉香临床上常用于胸腹胀闷疼痛，胃寒呕吐呃逆，肾虚气逆喘急，现代医学认为有镇静，镇痛，平喘，抑制结核菌的生长等作用［1-3］。其来源为瑞香科植物沉香Aquilaria agallochaRoxb，白木香A.sinensis(Lour)Gilg含有树脂的木材，前者为进口沉香，后者为国产沉香［4-6］。

由于沉香所用部位是树的心材，生长年限长，资源有限，不能满足需求，故市场上常有造假事件发生［7］。近来，在检验中发现有多批沉香的浸出物量高，符合现行标准规定，但香气明显不同，经反复实验及考证，怀疑这些沉香中添加了含松香酸类的物质，来增大其浸出物量［8-9］。松香酸为松香的主要成分，松香为松科植物马尾松或其同属植物树干中取得的油树脂，经蒸馏除去挥发油后的遗留物。松香中主要成分为酸性物(树脂酸)和中性物，其中树脂酸约占85%～95%，而松香酸是其树脂酸的主要成分［10］。本试验采用液质联用技术，利用相对分子质量和碎片信息，能快速，简便，准确的对沉香中是否添加了含松香酸类的物质进行检测。

1 实验部分

1.1 仪器与装置

Agilent 1100 Series LC/MSD Trap高效液相色谱质谱联用仪(美国Agilent公司)，含在线脱气机、双高压梯度泵、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器;离子肼质谱配有电喷雾离子(ESI)源。

1.2 材料和试剂

沉香正品药材来自中国药品生物制品检定所标本馆，经中检所标本馆张继馆长鉴定;松香药材由徐州彭祖中药饮片厂提供;松香酸对照品来自德国SIGMA公司(纯度约为75%);4批不同产地的沉香伪品药材由南通市药品检验所提供(其中编号Ⅲ来自广东，编号Ⅳ来自安徽，编号Ⅴ来自徐州，编号Ⅵ来自启东)。

乙腈:色谱纯，Tedia公司，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

1.3 实验条件

1.3.1 色谱与质谱条件 色谱柱:Agilent zorbax SB-C18(5 μm，4.6 mm × 250 mm);流动相为乙腈-0.1%甲酸溶液(75 ∶25);体积流量 1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量10 μL。检测器:紫外二极管阵列和质谱串联，紫外检测波长241 nm。质谱参数:ESI离子源，正离子方式检测，质量扫描范围m/z50～500，雾化器压力35.0 psi，干燥气(N2)体积流量8.0 L/min，干燥气温度325℃，喷雾电压4 000 V，裂解电压1.0 V，分流比5 ∶1。

1.3.2 对照品溶液的制备 取松香酸对照品10 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

1.3.3 对照药材溶液的制备 取松香对照药材12 mg，置100 mL量瓶中，加乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

1.3.4 供试品溶液的制备 取沉香正品及伪品药材细粉0.3 g，加入乙醇25 mL，超声处理15 min，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得沉香正品药材溶液及伪品药材溶液。

取沉香正品药材细粉0.3 g以及松香酸对照品2.5 mg，加入乙醇 25 mL，超声处理 15 min，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得沉香正品药材加样松香酸对照品溶液。

2 结果与讨论

2.1 松香酸对照品的LC/MS分析

对照品溶液的总离子流图(TIC)见图1。松香酸的保留时间为18.1 min，根据其分子质量对图谱进行提取离子，结果在其提取离子流图(EIC)中，保留时间与TIC中一致。

图1 松香酸对照品TIC和EIC图Fig.1 The TIC and EIC chromatogram of abietic acid

记录其一级和二级质谱图(见图2)。

2.2 松香药材的LC/MS分析

其总离子流(TIC)以及提取离子流(EIC)，在保留时间18.1 min出现相对分子质量为303.2的色谱峰，其一级、二级质谱均与松香酸对照品一致。

2.3 沉香正品药材的LC/MS分析

其相对总离子流图(TIC)以及提取离子流图(EIC)如下(见图3)，在保留时间18.1 min未出现分子质量为303.2的色谱峰。

2.4 沉香伪品药材的LC/MS分析

图2 松香酸对照品的一级和二级质谱图Fig.2 The LC/MS and LC/MS/MS chromatogram of abietic acid

图3 沉香正品药材的TIC和EIC图Fig.3 The TIC and EIC chromatogram of agalloch

其总离子流图(TIC)以及提取离子流图(EIC)见图4，在保留时间18.1 min均出现相对分子质量为303.2的色谱峰，其一级、二级质谱(图5)与松香酸对照品一致。

图4 沉香伪品药材的TIC和EIC图Fig.4 The TIC and EIC chromatogram of counterfeit agalloch

2.5 沉香正品药材加样松香酸对照品的LC/MS分析

其总离子流(TIC)以及提取离子流(EIC)，在保留时间18.1 min出现分子质量为303.2的色谱峰，其一级、二级质谱均与松香酸对照品一致。

2.6 质谱数据

松香酸对照品、松香药材、沉香正品、4批伪品药材以及沉香正品药材加样松香酸对照品的质谱数据见表1。

从上表中可见，松香药材、4批沉香伪品药材以及沉香正品药材加样松香酸对照品在保留时间18.1 min处均有一级、二级质谱图与松香酸一致的色谱峰，而沉香正品药材未出现该色谱峰，可以判断4批沉香伪品药材中均添加了含有松香酸类的物质。

2.7 质谱数据解析

见表2。

3 讨论

液质联用技术将液相色谱的高分离效能与质谱对结构解析的强大功能结合起来，近年来随着各种离子化技术的不断出现，液质联用技术已广泛应用于医药领域，在中药及中成药非法添加方面亦起着重要的作用。目前，国内对沉香药材真伪鉴别方法的研究报道较多［11-12］，主要集中在性状、理化、导数光谱、薄层色谱方面［13］，而液质联用技术的运用未见报道，将其与传统方法相结合，有利于我们控制药材质量，规范市场，保障人民群众合理用药。

表2 松香酸的MS和MS2数据归属Tab.2 The data adscription for MS/MS of abietic acid

本试验利用液质联用技术对沉香药材中是否添加松香酸类物质进行了检测，其方法较为简便快速，结果判定较为可靠。目前从文献报道中可见，松香酸主要存在于松香中，为其主要成分，但要确认添加的是否为松香类物质，还需辅以药材性状鉴别及显微鉴别等手段。

［1］冷玉杰，刘 兵.沉香的鉴别及药理作用［J］.辽宁中医药大学学报，2007，15(3):103.

［2］郭桂明.名贵中药材沉香的资源现状与真伪鉴别［J］.北京中医，2006，25(5):293-294.

［3］周 萍.沉香的真伪鉴别［J］.实用中医药杂志，2004，20(12):725.

［4］张成柱.沉香鉴别方法的探讨［J］.中国民族医药杂志，2003，4(2):23.

［5］童 娅，刘 浩.沉香与一种沉香伪品的鉴别研究［J］.时珍国医国药，2006，17(12):2552 2553.

［6］张军伟，白 明.沉香及其伪品的鉴别［J］.河南中医，2004，24(1):58.

［7］卫爱黎，赵 霞.一种伪品沉香的鉴别［J］.中国民族民间医药杂志，2006，82:284-287.

［8］吴 萌，饶伟文.一种市售掺伪沉香的鉴别［J］.现代中药研究与实践，2010，24(5):32-34.

［9］梅学伟，刘金成，纪 玲.中药沉香品种鉴定及探讨鉴别方法［J］.科技创新导报，2009，6(1):228.

［10］李富贤，米彩峰，石会丽.RP-HPLC测定清毒素胶囊中松香酸的含量［J］.中国中药杂志，2008，33(9):1086-1087.

［11］吕浩然，陈代贤，郭月秋.沉香真伪质量的考查［J］.中国实用医药，2007，2(32):127-128.

［12］高晓霞，田佳佳，章卫民，等.一种用松香掺伪的沉香药材鉴别研究［J］.广东药学院学报，2009，25(6):573-578.

［13］刘军民，徐鸿华.国产沉香研究进展［J］.中药材，2005，28(7):627-632.