高效液相色谱法测定岩黄连药材中3种生物碱

毛春芹， 谢 辉， 池玉梅， 陆兔林， 王 静， 胡 芳， 李争艳

(南京中医药大学药学院，江苏南京 210046)

高效液相色谱法测定岩黄连药材中3种生物碱

毛春芹， 谢 辉， 池玉梅， 陆兔林*， 王 静， 胡 芳， 李争艳

(南京中医药大学药学院，江苏南京 210046)

目的 建立岩黄连药材中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的测定方法，为完善药材质量评价提供参考依据。方法 色谱柱为Agilent XDB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为乙腈 －0.01 mol/L磷酸二氢钾水溶液 (21∶79)，柱温30℃，检测波长347 nm，体积流量1.0 mL/min。结果 脱氢卡维丁的线性范围为15.015～90.09 μg/mL(r=0.999 7)，平均回收率为99.01%(RSD=2.97%);盐酸巴马汀的线性范围为14.97 ～89.82 μg/mL(r=0.999 9)，平均回收率为 100.48%(RSD=2.73%);盐酸小檗碱的线性范围为 3.55 ～28.40 μg/mL(r=0.999 7)，平均回收率为 99.67%(RSD=2.54%)。结论 本方法准确、可靠、重现性好，可用于岩黄连药材的质量控制。

高效液相色谱法;脱氢卡维丁;盐酸巴马汀;盐酸小檗碱;岩黄连药材

岩黄连为罂粟科植物石生黄堇Corydalis saxicolaBunting的全草，是黔、桂高寒山区珍贵的中草药材［1］。本品味苦、性凉，具有清热解毒、利湿、止痛止血之功效［2］，主治肝炎、口舌糜烂、火眼、目豁、痢疾、腹泻、腹痛、痔疮出血等［3］。岩黄连中主要有效成分是以脱氢卡维丁为代表的生物碱类化合物［4］，而这类化合物具有潜在的抗HBV活性［5］和肝保护活性［6］。有文献［7-8］报道使用高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁，但未见采用高效液相色谱法同时测定3种生物碱的文献报道。本实验建立高效液相色谱法定量测定岩黄连药材中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱，该法简便、准确、重复性好及回收率高，可为该药材三种生物碱分别定量测定提供可靠实验方法。该法亦适用于岩黄连药材质量控制。

1 仪器与试剂

Agillent 1100高效液相色谱仪，包括四元泵、自动进样器、柱温箱、真空脱气机，紫外检测器。岩黄连药材(批号:20070302、20070305、20070309)。脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所)。乙腈为色谱纯(TEDIA)，水为重蒸水，其他试剂皆为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［9-12］Agilent XDB C18色谱柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 －0.01 mol/L磷酸二氢钾水溶液 (21∶79);柱温30℃;检测波长347 nm;体积流量 1.0 mL/min;进样量 10 μL;采样时间50min。在上述色谱条件下的对照品、供试品色谱分离结果见图1。各组分按保留时间先后出峰顺序为脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱，3种生物碱得到良好分离。以盐酸小檗碱计算理论塔板数为4 000。

图1 供试品(A)和对照品(B)色谱图

2.2 对照品溶液的制备 取脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含脱氢卡维丁1.001 mg、盐酸巴马汀0.998 mg和盐酸小檗碱0.710 mg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取岩黄连药材粉碎，过20目筛，取粉末约0.2 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入甲醇40 mL，超声提取60 min，放冷，用甲醇定容，摇匀，过微孔滤膜(0.45 μm)，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 分别精密吸取上述对照品溶液，用甲醇配制成混合对照品溶液。其中，脱氢卡维丁浓度为 15.015、30.03、45.045、60.06、75.075、90.09 μg/mL、盐酸巴马汀浓度为 14.97、29.94、44.91、59.88、74.85、89.82 μg/mL、盐酸小檗碱浓度为3.55、7.1、10.65、14.2、21.3、28.40 μg/mL，分别吸取不同浓度对照品溶液10 μL，进行分析测定。以对照品峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归。得回归方程分别如下脱氢卡维丁:Y=32 155.27X－25.79，r=0.999 7，线性范围 15.02～90.09 μg/mL。盐酸巴马汀:Y=36 735.09X+0.29，r=0.999 9，线性范围:14.97 ～89.82 μg/mL。盐酸小檗碱:Y=37 722.87X－0.647 1，r=0.999 7线性范围:3.55 ～28.4 μg/mL。

2.5 精密度试验 精密吸取脱氢卡维丁90.09 μg/mL、盐酸巴马汀 89.82 μg/mL、盐酸小檗碱28.40 μg/mL的混合对照品溶液 10 μL，按上述色谱条件，连续进样6次，以3种组分峰面积分别计算，结果表明脱氢卡维丁峰面积的RSD为2.53%，盐酸巴马汀峰面积的RSD为0.42%，盐酸小檗碱峰面积的RSD为0.24%。表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取岩黄连药材(批号:20070302)按上述供试品溶液的制备方法平行制备6份，并按上述色谱条件测定，测得脱氢卡维丁平均质量分数为0.98%，RSD为2.35%;盐酸巴马汀平均质量分数为0.50%，RSD为2.02%;盐酸小檗碱平均质量分数为0.16%，RSD为2.03%;结果表明，在同一条件下，6次测得样品脱氢卡维丁等成分质量分数一致，本方法重复性好。

2.7 稳定性试验 取重复性试验的1号样品每隔2 h测定1次，共测定6次。结果脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的RSD分别为0.76%、1.22%、2.29%。表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.8 加样回收率试验 分别精密称取已知质量分数的岩黄连药材粉末(批号:20070302)0.1 g，共9份，置50 mL量瓶中，分别加入等同于样品中脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱量 80%、100%、120%的对照品，按上述供试品溶液的制备方法制备样品，测定。结果见表1～3。样品的加样回收率试验结果良好。

2.9 样品测定 取本品3批样品，按2.3项下所述方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件进样，结果见表4。

3批药材的测定结果表明，脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱此3个生物碱的质量分数总和分别为 1.73%、1.69%、1.78%。

3 讨论

在文献报道中，关于岩黄连药材的测定的指标只有脱氢卡维丁，但在实验中发现岩黄连药材中除含有脱氢卡维丁外，还有几种已知的化学成分［13］，并且中国药品生物制品检定所有提供，如盐酸巴马汀、盐酸小檗碱，另发现在同一液相条件下，可将脱氢卡维丁、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱共同作为质量控制的指标。对岩黄连总碱胶囊中三指标进行全面控制，可准确反映岩黄连总碱胶囊的质量。研究结果表明，本方法操作简便、准确、可行，符合相关技术要求。

表1 脱氢卡维丁加样回收率试验结果

表2 盐酸巴马汀加样回收率试验结果

表3 盐酸小檗碱加样回收率试验结果

表4 样品测定结果

［1］韦记青，蒋水元，蒋运生，等.药用植物岩黄连研究概述［J］.广西科学院学报，2006，22(2):108-111.

［2］中国科学院广西植物研究所.广西植物志［M］.南宁:广西科学技术出版社，1993:410.

［3］孙宁玲，陆国才，袁伯俊，等.岩黄连研究进展［J］.中药新药与临床药理，2006，17(1):78-80.

［4］毛宇昂，梁永红.岩黄连的研究综述［J］.时珍国医国药，2006，17(4):630-631.

［5］王 健，张士军，巫世红，等.岩黄连提取物体内抗乙型肝炎病毒作用研究［J］.中国药业，2009，18(11):7-9.

［6］周劲光.岩黄连总碱对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用研究［J］.中国当代医药，2010，17(27):29-30.

［7］陆 益，黄其春，黎远冬，等.HPLC法测定岩黄连中不同部位脱氢卡维丁的含量［J］.广西医科大学学报，2010，27(1):18-20.

［8］宋仲民，刘清飞，罗国安.HPLC法测定岩黄连片中3个主要有效成分的含量［J］.药物分析杂志，2007，27(6):809-812.

［9］黄 玮，陆兔林，王巧晗，等.野生与人工栽培岩黄连药材的比较［J］.中草药，2008，39(5):770-771.

［10］王巧晗，陆兔林，毛春芹，等.高效液相色谱法测定岩黄连药材中脱氢卡维丁的含量［J］.中国药师，2008，11(4):434-435.

［11］金佩芬，缪华蓉，钱亚萍.HPLC测定戊己丸中盐酸小檗碱和盐酸巴马汀的含量［J］.中成药2001，23(1):24-25.

［12］高 靥，王冬梅，栾 爽.HPLC法同时测定芩连片中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量［J］.沈阳药科大学学报，2008，25(6):480-483.

［13］王奇志，梁敬钰，原 悦.岩黄连化学成分［J］.中国天然药物，2007，5(1):31-34.

Quantitative determination of alkaloids inCorydalis saxicolaBunting by HPLC

MAO Chun-qin， XIE Hui， CHI Yu-mei， LU Tu-lin*， WANG Jing， HU Fang， LI Zheng-yan

(Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210046，China)

AIMTo establish an HPLC method for simultaneously determining dehydrocavidine，palmatine hydrochloride and berberine hydrochloride inCorydalis saxicolaBunting.METHODSAn Agilent XDB C18column(150 mm ×4.6 mm，5 μm)was used ，the acetonitrile－0.01 mol/L potassium dihydrogen phosphate solution(21∶79)as mobile phase，the column temperature was at 30℃，the detection wavelength was set at 347 nm，the flow rate was 1.0 mL/min.RESULTSThe liner range of dehydrocavidine was 15.015 － 90.09 μg/mL(r=0.999 7)and the average recovery was 99.01%(RSD=2.97%).The liner range of palmatine hydrochloride was 14.97 －89.82 μg/mL(r=0.999 9)and the average recovery rate was 100.48%(RSD=2.73%).The liner range of berberine hydrochloride was 3.55 － 28.40 μg/mL(r=0.999 7)and the average recovery rate was 99.67%(RSD=2.54%).CONCLUSIONThe method is accurate，sensitive and reliable，and can be used to the quality control ofCorydalis saxicolaBunting.

HPLC;dehydrocavidine;palmatinehydrochloride;berberinehydrochloride;Corydalis saxicolaBunting

R284.1

A

1001-1528(2011)08-1368-03

2010-11-12

毛春芹(1963—)，女，高级实验师，从事中药质量标准研究。E-mail:mcq63@163.com

*通信作者:陆兔林，男，教授，博士，硕士生导师。E-mail:lutuling2005@126.com