鸡新城疫不同弱毒株毒力及免疫原性研究

肖长赏，凌红丽，韩宏超，马凤燕，王 雷，曾群平

（1.青岛宝依特生物制药有限公司，山东 青岛 266114；2.黑龙江省动物卫生监督所，黑龙江 哈尔滨 150069）

自1926年在爪哇发现新城疫以来[1-3]，Alexander[4]认为出现三次大规模流行，给养禽业带来了巨大的损失。目前多数国家采用弱毒疫苗和灭活疫苗[5]免疫预防作为防制新城疫的主要措施。随着养殖水平和疫病防制技术的提高以及普及疫苗免疫接种，我国也少见有典型性新城疫暴发，代之以非典型性、温和性新城疫[6-7]。由于疫苗的种类、免疫途径、鸡群的健康状况等因素，免疫鸡群常出现应激等不良反应，不仅降低饲料报酬，诱发侵害呼吸道的疾病，而且增加死淘率和药物费用。因此疫苗免疫的同时，加强饲养管理，保持鸡群健康，可减轻应激，有效降低疾病的发生。选择合适首免疫苗和日龄，亦可减轻不良反应。传统新城疫弱毒疫苗有Ⅱ系（Hitchner B1株）、Ⅲ系（F株）、Ⅳ系（La Sota株、Clone30株和N79株）等，虽然没有致病力，但仍有残留毒力，可致发轻微呼吸道症状等应激反应。如新城疫Ⅳ系喷雾免疫时，应激较强，免疫鸡群2～4天可能出现甩头、流泪、打喷嚏、呼噜等，有时出现精神不振、采食减少等现象。多年来，我公司密切关注市场，紧密结合国内养禽业生产需要，研究新城疫不同弱毒株的毒力、免疫原性及免疫攻毒保护试验，为生产提供借鉴。

1 材料和方法

1.1 鸡新城疫弱毒B株、Queensland V4株、Ulster 2C 株、Hitchner B1株、F株、VG/GA株、La Sota株、Clone30株、N79株由青岛宝依特生物制药有限公司实验室提供。

1.2 SPF种蛋购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司，10日龄SPF鸡胚及30日龄SPF鸡青岛宝依特生物制药有限公司动物房提供。

1.3 1%鸡红细胞悬液由青岛宝依特生物制药有限公司实验室配制。

1.4 病毒繁殖 取NDV B等9株分别接种10日龄SPF鸡胚10枚，36～37℃孵育96 h，收获胚液并检测HA效价及EID50。

1.5 毒力试验

1.5.1 对鸡胚的毒力 按文献方法[8]将NDV B等9株新鲜胚毒分别用灭菌生理盐水作100倍稀释，尿囊腔内接种10日龄SPF鸡胚10个，每胚0.1 mL，置36～37℃继续孵育观察120 h，记录鸡胚死亡情况。

1.5.2 对1日龄雏鸡脑内致病指数（ICPI） 按文献方法[8]取NDV B等9株新鲜胚毒分别脑内接种1日龄SPF雏鸡，测定其1日龄脑内致病指数。

1.5.3 对鸡胚最小致死量的平均死亡时间（MDT/MLD）按文献方法[8]取NDV B等9株新鲜胚毒分别接种10日龄SPF鸡胚，测定NDV B等9株的鸡胚最小致死量平均死亡时间。

1.5.4 对6周龄鸡的静脉致病指数（IVPI） 按文献方法[8]取NDV B等9株的新鲜胚毒分别静脉接种6周龄SPF雏鸡，测定其的静脉致病指数。

1.6 免疫原性 将NDV B等9株胚毒分别稀释成病毒含量为 100 EID50、500 EID50、1000EID50，滴鼻 /点眼免疫30日龄SPF鸡，每只0.03 mL，免疫10日后分别翅翼内侧肌肉注射攻击新城疫强毒北京株1 mL（含 CVCC AV1611 株 105.0ELD50），饲养观察 10日，记录鸡只发病死亡情况。

2 结果

2.1 病毒繁殖 不同新城疫弱毒株均可在SPF鸡胚中很好的增殖，病毒含量均大于108.38EID50/0.1 mL，HA效价均在9log2以上（表1）。

表1 不同新城疫弱毒株增殖结果

2.2 对鸡胚的毒力 NDV B株、V4株、Ulster 2C株对鸡胚的毒力较低，基本不致死鸡胚，120h活胚明显萎缩48～120h；Hitchner B1株及F株致死的鸡胚有明显充血、出血病痕，120h活胚明显萎缩；La Sota株、Clone30株、N79株及VG/GA株120h内鸡胚全部死亡，鸡胚有明显充血、出血病痕（表2）。

2.3 对1日龄雏鸡脑内致病指数（ICPI）结果显示B株、V4株和Ulster 2C株的ICPI为0；Hitchner B1株和 F株的 ICPI为 0.213～0.238；LaSota株、Clone30 株、N79株、VG/GA株的 ICPI为0.3～0.4（表 2）。

2.4 对鸡胚最小致死量的平均死亡时间（MDT/MLD）结果显示B株、V4株和Ulster 2C株的MDT大于150h；Hitchner B1株、F 株、La Sota株、Clone30株、N79株和VG/GA株的MDT小于120h（表2）。

2.5 对6周龄鸡的静脉致病指数（IVPI） 结果显示不同新城疫弱毒株IVPI均为0（表2）。

表2 新城疫弱毒不同毒株毒力试验结果

2.6 免疫原性 结果显示新城疫不同弱毒株不同免疫剂量的攻毒保护不同，其中NDV B株、La Sota株、Clone30株、N79株、Ulster 2C株和VG/GA株免疫剂量为1000 EID50的试验组攻毒鸡10/15以上保护；NDV B株免疫原性较好，全部保护；NDV F株免疫原性最弱，仅6/15保护（表3）。

表3 鸡新城不同弱毒株免疫原性试验结果

3 讨论

3.1 不同新城疫弱毒株均较好适应鸡胚培养，增殖滴度较高。因鸡胚来源充足，培养条件和设备简单，选择合适日龄的鸡胚用于新城疫病毒增殖可为新城疫抗原生产提供可靠保证。

3.2 新城疫弱毒毒力较弱，有的毒株则完全没有毒力，作为疫苗毒株对鸡只均安全。但不同弱毒株毒力略有差异，其中NDV B株、V4株和Ulster 2C株适合用于低日龄雏鸡首免，而 NDV La Sota株、Clone30株和N79株7日龄以内的雏鸡喷雾免疫时，免疫鸡群2～4天可能出现甩头、流泪、打喷嚏、呼噜等应激反应，尤其是NDV Lasota株不建议用于10日龄以内鸡群的免疫。因此，新城疫首免时应根据雏鸡日龄选择合适疫苗进行免疫。

3.3 新城疫不同弱毒株免疫攻毒试验结果表明，NDV B株免疫原性最好，免疫500EID50鸡只11/15抵抗北京株强毒攻击，1000EID50免疫鸡只可以全部抵抗北京株强毒攻击。Bebsink等[9]获得的无毒新城疫毒株免疫雏鸡产生高的抗体滴度一致。本试验中NDV V4株免疫原性与Foster等[10]、姜新等[11]和江杰元等[12]报道不一致，可能是免疫剂量不一致，也可能NDV V4株的原因，苏承宗等[13]免疫鸡产生杭体较晚，在免疫后1.5～2个月才能达到高峰。

[1]Kraneveld F C.A.Poultry Disease in the Dutch East Indies[J].Ned Indisch Bladen voor Diergeneesk，1926，38：448-450.

[2]Doyle T M.A hitherto unrecorded disease of fowls due to filter-passing virus[J].J Comp Pathol Therap，1927，40：144-169.

[3]Doyle T M.Newcastle disease of fowls[J].J Comp Pathol Therap，1935，48（1）：1-20.

[4]Alexander D J.Historical Aspects[M]//D J Alexander.Newcastle disease.Massachusetts（USA）：Kluwer Academic，1988：1-10.

[5]Saif Y M.禽病学[M].苏敬良，高福，索勋，译.10 版.北京：中国农业出版社，1999：691-726.

[6]梁华丽，顾亚仙，徐辉，等.非典型鸡新城疫的病因研究初报（一）[J].中国兽医杂志，2001（4）：:3-5.

[7]阎慎飞，常明进，郑玉良，等.鸡非典型性新城疫的发生及其防制[G]//中国畜牧兽医学会2006学术年会（下册）.北京：中国畜牧兽医学会，2006.

[8]农业部中华人民共和国.兽用生物制品规程[M].北京：化学工业出版社，2000.

[9]Bensink Z，Spradbrow P.Newcastle disease virus strain I2-a prospective thermostable vaccine for use in developing countries[J].Vet.Microbiol.1999，68（1/2）：131-139.

[10]Foster H A，Chitukuro H R，Tuppa E，et al.Thermostable Newcastle Disease Vaccines in Tanzania [J].Vet.Microbiol.1999，68（1/2）：127-130.

[11]姜新，郑新轲.鸡新城疫V-4株病毒某些特性的研究[J].辽宁畜牧兽医，1998（6）：1-2.

[12]江杰元，何孔旺，何家惠，等.鸡新城疫病毒自然弱毒株（V4）及其耐热变种（HR）免疫原性测定[J].江苏农业科学，1992（1）：55-56.

[13]苏承宗，李科.鸡新城疫V4疫苗免疫试验[J].中国畜禽传染病，1998（3）：178.