玉米须总黄酮醇提工艺研究

2011-04-25高艳辉贾艾玲董金香

长春中医药大学学报 2011年6期

梁冬，高艳辉，贾艾玲，董金香

(长春中医药大学,吉林长春 130117)

玉米须为禾本科玉蜀属植物玉米(Zea mays L.)的花柱和柱头，最早药用记载见于《滇南本草》。玉米须其性味甘、平、无毒。可用于治疗水肿、小便淋漓、肾炎、胆囊炎、糖尿病等[1]。玉米须中主要含有皂苷、黄酮、生物碱、多糖等成分[2]。现代药理研究[3]证明，玉米须中黄酮类成分为有效成分之一。黄酮类化合物种类多，性质差异较大，本实验对玉米须总黄酮的醇提工艺方法进行了实验研究，为玉米须的开发利用研究提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 药材来源玉米须为禾本科玉蜀属植物玉米的花柱，采自吉林省长岭县，经鉴定，符合中国药典1977年版规定。

1.2 仪器 TU-1810PC型分光度计；电子天平(d=0.000 01 g)；芦丁对照品(中国药品生物制品鉴定所，批号100080-200707)；试剂、试药均为分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 药材吸醇量的测定称取玉米须粉末100 g,加醇2 500 mL，浸泡12 h，平行3次，测得100 g玉米须的平均吸醇量为400 mL。

1.3.2 提取工艺技术条件的研究醇回流提取工艺中影响总黄酮提取效率的因素主要为醇浓度、提取时间、提取次数和料液比。故采用四因素三水平正交试验，筛选最佳提取工艺。见表1。

表1 醇提工艺四因素三水平正交试验表

以玉米须总黄酮含量为考察指标，采用分光光度法测定。

2 实验结果

2.1 正交实验结果称取供试品约0.15 g，精密称定，加70%乙醇50 mL，精密称重,超声处理30 min，冷却至室温，70%乙醇补足失重。精密量取供试品续滤液0.5 mL，加入三氯化铝试液5 mL,用乙醇定容至10 mL。显色15 min[4],以相应试剂为空白，测定275 nm下吸光度。结果分析见表2，方差分析见表3。

方差分析表明:A(乙醇浓度)、C(提取次数)为显著因子，B、D为不显著因子。因素B和C对提取量影响很小，因此最优组合为A3B2C3D1，即：加入15倍量70%乙醇，回流3次,每次1.5 h。

2.2 玉米须总黄酮的含量测定

2.2.1 对照品溶液及供试品溶液的制备空白溶液制备:精密量取乙醇0.5 mL置10 mL容量瓶中，加三氯化铝试液5 mL，用乙醇定容至刻度，显色15 min，作为空白液。对照品溶液:取芦丁对照约1 mg，加适量甲醇溶解，即得。供试品溶液：取提取物粉末(过60目筛)约0.15 g,精密称定，按2.1项方法制备共试品溶液。

表2 正交试验设计及结果分析

表3 方差分析表

2.2.2 对照品和供试品吸收光谱精密量取对照品溶液按2.1项显色，测定200～600 nm范围内吸收波长，结果在溶液在275 nm有最大吸收波长，供试品溶液在276 nm有最大吸收波长，二者吸收波长基本一致。因此确定275 nm为测定波长。

2.3 线性关系考察

2.3.1 对照品溶液制备取芦丁约5 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度，摇匀即得(0.101 4 mg/mL)。

2.3.2 标准曲线绘制精密量取芦丁对照品溶液(0.101 4 mg/mL)0.5、0.75、1、1.25、1.5 mL，分别置10 mL量瓶中，按2.1项显色。同法制备空白液。照分光光度法(中国药典2010年版一部，附录V A),在275 nm波长处测定吸收度，结果芦丁对照品回归方程为:Y=0.046 2X-0.000 7,r=0.999 9。总黄酮含量在5.07～15.21 μg/mL范围内线性关系良好。

2.3.3 精密度实验精密量取芦丁对照品溶液(0.101 4 mg/mL)1 mL～10 mL量瓶中，按2.1项下测定吸光度，平行处理3次测定，结果RSD为0.49%，表明仪器的精密度良好。

2.3.4 稳定性实验精密量取芦丁对照品溶液(0.101 4 mg/mL)1 mL,按2.1项下方法测定0、5、10、15、20 min时吸光度；精密量取供试品溶液1 mL，按3.3.2项下方法测定0、5、10、15、20 min吸光度，结果对照品的RSD为0.191%，供试品的RSD为0.468%。二者吸光度RSD均符合要求，稳定性良好。

2.3.5 重现性实验精密量取正交试验1号供试品溶液1 mL～10 mL量瓶中按2.1项下测定吸光度，结果供试品中总黄酮平均含量为94.862 9 mg，RSD为1.22%，重现性良好。

2.3.6 加样回收率取已知含量(95.325 mg/g)玉米须供试品6分，每分1 g，精密称定，并加入适量芦丁对照品，按2.1项下供试品溶液制备方法，依法独立操作，按2.1项下测定吸光度，计算回收率，结果平均回收率为100.42%，RSD为1.83%，说明方法准确性较好，可行。

2.4 最佳工艺验证试验称取玉米须药材500 g,按最佳提取工艺，即加入15倍量70%乙醇，回流3次，每次1.5 h，合并滤液，浓缩干燥，称重。平行4次试验。

称取试品约0.2 g,精密称定，至溶液具塞锥形瓶中,按2.1项下制备供试品溶液。精密量取续滤液1 mL，按2.1项下测定吸光度。平行处理4次，结果玉米须提取物中，总黄酮含量可达到1.341 g/100 g药材,说明该工艺稳定、科学合理,适用于玉米须总黄酮的提取。