NF-κB、Ki-67和E-cad在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌的表达及相关分析

施佳音,夏钰弘

(南京医科大学附属无锡市人民医院,江苏无锡 214023)

皮肤鳞状细胞癌(SCC)和基底细胞癌(BCC)为皮肤科常见肿瘤。本研究应用免疫组化EnVision二步法检测NF-κB、Ki-67和E-cad在正常皮肤组织、皮肤SCC和BCC的表达,并进行差异比较和相关性分析,以探讨此三者的相关性及其与皮肤SCC和BCC恶性程度之间的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 石蜡包埋标本来源于我院病理科1990～2005年存档标本,其病理诊断标准参照世界卫生组织肿瘤诊断标准。其中BCC 30例(男 17例、女 13例,平均年龄 59.6岁,发生于面部 19例、躯干1l例)、SCC 50例(男32例、女18例,平均年龄61.7岁,发生于面部33例、躯干 17例)及正常皮肤标本20例(分别来自头、面、躯干)。皮肤SCC标本根据Broders法判断分级：其中Ⅰ级26例,Ⅱ～Ⅲ级24例。

1.2 方法 兔抗人NF-κB/p50多克隆抗体,克隆号RAB-0531,即用型;兔抗人Ki-67单抗隆抗体,克隆号MIB-1,即用型;鼠抗人E-cad单抗隆抗体,克隆号MAB-0247;购自福州迈新生物技术开发有限公司。免疫组织化学采用EnVision法,切片经常规二甲苯脱蜡梯度乙醇水化。一抗孵育前切片经0.01 mol/L柠檬酸缓冲液(pH 6.0)煮沸抗原修复。操作步骤按产品说明书进行。二氨基联苯胺显色。选用已知阳性的肺癌组织为阳性对照,以PBS液代替一抗作为空白对照。

1.3 结果判断 NF-κB主要在细胞质着色,蛋白染色阳性信号均呈棕黄色颗粒。Ki-67染色信号定位于细胞核,胞核出现深棕色为阳性标记。E-cad阳性判断以细胞质、细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性,无着色为阴性。根据显色强度和阳性细胞数两项指标判断阳性等级。按显色强度分为无色、黄色、棕黄色和棕色,分别计分为 0、1、2、3分,按阳性细胞占同类细胞的比例分为：0、＜1/3、1/3～2/3、＞2/3,分别计分为 0、1、2、3分。然后根据两项乘积计分判断其结果。两者定性积分表达≤3分为阴性表达,4～5分为弱阳性(+),6～7分为阳性(++),8～9分为强阳性(+++)。每张切片随机选择5个视野在100倍视野下计数,取其平均值以避免随意性。

1.4 统计学方法 采用SPSS11.0统计软件进行分析,数据以率表示,比较采用 χ2检验。相关性分析用Spearman相关。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NF-κB在各种组织中的表达 NF-κB在1例正常皮肤中弱阳性表达,阳性率为 5%(1/20)。在BCC和SCC的阳性率分别为60%(18/30)、92.0% (46/50),(χ2=12.0,P＜0.05),表现为肿瘤细胞核出现棕黄色颗粒。在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级的总阳性率分别为92.3%(24/26)、91.7%(22/24)(P＞0.05),但在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级中的强阳性(++～+++)率分别为30.8%(8/26)、83.3%(20/24),两者比较有统计学差异(χ2=13.9,P＜0.01)。

2.2 Ki-67在各种组织中的表达 Ki-67在1例正常皮肤中弱阳性表达,阳性率为10.0%(2/20)。在BCC和SCC的阳性率分别为66.7%(20/30)、94.0% (47/50),两者比较有统计学差异(χ2=8.383,P＜0.05),表现为肿瘤细胞核出现棕黄色颗粒。在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级的总阳性率分别为 92.3%(24/26)、95.8%(23/24),两者比较无统计学差异(χ2=0.000, P＞0.05),但在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级中的强阳性率分别为34.6%(9/26)、91.7%(22/24),两者比较有统计学差异(χ2=17.241,P＜0.01)。

2.3 E-cad在各种组织中的表达 E-cad在正常皮肤阳性率为80%(16/20)。在BCC和SCC的阳性率分别为60%(18/30)、30%(15/50),两者比较有统计学差异(χ2=6.963,P＜0.05),阳性表达主要以胞膜为主.部分伴胞质阳性,强度深浅不等。在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级的强阳性率分别为34.6%(9/26)、25%(6/24),两者比较有统计学差异(χ2=4.120,P＜0.05)。

2.4 相关性分析 皮肤BCC和SCC组织中NF-κB和Ki-67的阳性细胞表达呈正相关(r=0.31,P＜0.05),NF-κB和E-cad的表达呈负相关(r=-0.25,P＜0.05)。

3 讨论

在细胞分化、增殖及正常平衡的维持中,基因对凋亡的控制起关键作用。NF-κB是普遍存在于细胞质中的一种快反应转录因子,是由P50和P65(Rel-A)两个亚单位构成的异源二聚体。以往的研究主要集中在 NF-κB在免疫反应和炎症反应中的作用[1]。最近研究发现,NF-κB在肿瘤的发生、发展中也起重要作用,它可调控细胞的增殖、分化、凋亡及恶性转化[2]。本研究结果显示,NF-κB在皮肤BCC和SCC的阳性表达率显著高于正常对照组,且在皮肤SCC的阳性表达率显著高于BCC。在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级中的 NF-κB的总阳性率比较差异无统计学意义,但其强阳性率比较差异有统计学意义。说明NF-κB通过对凋亡基因的控制,参与调控肿瘤细胞的侵袭性生长,随着肿瘤分化程度的降低,NF-κB的表达有明显增高趋势。提示NF-κB有助于鉴别肿瘤良恶性及其生长行为方式。

Gerdes等在1983年提出Ki-67是人类所有增殖细胞核中普遍存在的标志性抗原。Ki-67蛋白已用于临床肿瘤的辅助诊断,并与肿瘤的恶性度、转移及预后有关。本研究中,Ki-67的表达与年龄、性别、组织类型均无显著相关性,但在皮肤BCC和SCC的阳性表达率显著高于正常皮肤,且在皮肤SCC的阳性表达率显著高于BCC。虽然在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级中的总阳性率表达比较差异无统计学意义,但在SCCⅠ级和Ⅱ～Ⅲ级中的强阳性率的进一步比较中差异有统计学意义。说明 Ki-67参与了肿瘤细胞的异常增殖过程,与恶性程度有关,Ki-67的高表达与组织的分化程度有关,能较准确地反映出肿瘤组织的增殖活性,有助于判断肿瘤组织的生物学行为。

许多研究表明在肿瘤的浸润和转移过程中有E-cad丢失,主要机制是E-cad丢失导致细胞间黏附性降低致细胞脱落,细胞间的接触抑制减弱致细胞过度增殖[3],E-cad对维持组织结构形态起重要作用。本组中E-cad在BCC的表达水平较高,因为BCC不具有转移性。也有学者提出E-cad主要起到抑制肿瘤转移的作用[4]。本组中E-cad在正常皮肤中呈阳性表达,但在肿瘤组织中的表达下降,尤以SCC下降明显;其中在SCCⅡ～Ⅲ级中的表达较SCCⅠ级下降明显。表明其表达与肿瘤细胞的恶性程度有关,与魏志平等[5]的报道一致。

本研究证实了随着肿瘤细胞分化程度的降低, NF-κB、Ki-67的表达有增高趋势,E-cad的表达有下降趋势。提示BCC和SCC侵袭性生长与NF-κB、Ki-67的表达增高有关,SCC易发生转移的特性与E-cad的低表达有关。由此可见,NF-κB、Ki-67和E-cad的表达与皮肤SCC和BCC的恶性程度、生物学行为密切相关。NF-κB信号转导通路可能通过对凋亡基因的控制来对Ki-67、E-cad进行调节,进而控制肿瘤。

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