华蟾素髂内动脉注入治疗4-氨基双联苯诱发大鼠膀胱肿瘤的效果观察

李雪梅

(荆楚理工学院医学院，湖北 荆门 448000)

研究表明［1］，华蟾素具有低毒、高效和抗癌谱广等优点，对环磷酰胺(CTX)所致的白细胞减少有防治作用，可提高机体免疫力和放化疗疗效，减轻化疗药物的毒性反应。膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的肿瘤，化疗是治疗和预防肿瘤复发的重要手段之一，由于目前所用的化疗药物都有一定的毒性，故寻找一种有效、安全治疗膀胱肿瘤的药物具有重要意义。体外实验证明［2，3］，华蟾素具有抗膀胱癌细胞增殖的作用。2010年3月～2011年3月，我们对用4-氨基双联苯成功诱发膀胱肿瘤的大鼠模型，经髂内动脉注入华蟾素，观察其对大鼠膀胱肿瘤的治疗效果。

1 材料与方法

1.1 主要实验材料及动物分组 致癌剂4-氨基双联苯(武汉福德医药化工有限公司)，华蟾素注射液(安徽金蟾生化股份有限公司)。80只SD雌性大鼠(河北医科大学实验动物中心提供)，6～7周龄，重350～400 g。80只大鼠随机分为正常组(正常对照，30只)和诱癌组(50只)。后者分为A、B组，各25只。

1.2 膀胱肿瘤模型建立及用药方法 诱癌组采用4-氨基双联苯膀胱灌注法［4，5］建立膀胱肿瘤大鼠模型，其中A组不注入任何药物，为病理对照;B组经皮穿刺髂内动脉注入华蟾素0.8 ml/次、每2周1次，总量 3.2 ml/只。

1.3 标本采集及观察指标 于末次灌注后第6周处死各组动物，使其膀胱处于扩张状态，完整切除，观察其大体变化，在病变明显处5点取材，光镜观察。另随机选取各组5只大鼠的由髂内动脉供血的其他脏器如直肠和肾组织，进行组织学检查。

2 结果

2.1 各组膀胱大体观察 正常组大鼠膀胱黏膜呈光滑、有光泽的正常状态。诱癌组中的A组膀胱壁可见结节状肿物者5只，米粒样乳头状者7只，菜花状肿物者13只;B组中膀胱黏膜光滑如正常者5只，黏膜局部可见散在白色斑块并有点状出血者8只，黏膜增厚伴有局部隆起者14只。

2.2 各组膀胱镜下检查结果 正常组膀胱黏膜上皮由2～3层移行上皮细胞组成，细胞大小一致，扁平，核圆形、浅染，壁层排列正常。诱癌组中，A组膀胱黏膜表面瘤变、不光滑，坏死或有钙盐沉着，多乳头粗短融合，癌细胞黏膜下浸润，基质变性、出血、坏死;B组黏膜上皮细胞脱落、坏死，肌层和浆膜充血、水肿、坏死，并有急、慢性炎性细胞浸润，癌细胞坏死。

2.3 两组直肠、肾脏组织学检查结果 两组直肠和肾组织均无坏死，呈正常组织状态。

3 讨论

虽然手术是目前治疗膀胱肿瘤最有效的办法，但需与化疗配合才能预防肿瘤的复发。目前应用的化疗药物均有较严重的毒性作用，尤其是对机体免疫功能的损害，限制了这些药物的临床应用。

祖国医学认为华蟾蜍干蟾及华蟾蜍精具有超强抗癌活性、超强抑制癌细胞生长的作用，可增强放化疗效果，减轻放化疗不良反应。华蟾素主要抗癌成分为蟾素内酯素［6］。实验证明［7］华蟾素对癌细胞DNA和RNA合成有显著抑制作用，从而抑制癌细胞生长和增殖，且有提高机体免疫功能的作用［8］。华蟾素的抗膀胱肿瘤的作用机制可能有以下几点［9，10］:①能抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞分化凋亡，抑制血管内皮细胞生长;②显著增强大鼠单核吞噬细胞的吞噬功能以及体液免疫功能，有效增强继发性免疫功能低下小鼠的细胞免疫功能;③具有免疫调节作用。

因采用4-氨基双联苯诱导法建立膀胱肿瘤动物模型的方法简单、致癌剂用量少、造模时间短［5］，故本实验采用该方法建立大鼠模型。本实验结果显示，正常组膀胱黏膜正常，诱癌组中A组可见膀胱肿瘤，B组膀胱未见肿瘤生长，膀胱黏膜上皮细胞脱落、坏死，肌层和浆膜充血、水肿、坏死，并有炎性细胞浸润，癌细胞坏死。可见华蟾素可导致膀胱肿瘤细胞缺血、缺氧及坏死。因此我们认为，华蟾素髂内动脉灌注对4-氨基双联苯诱发的大鼠膀胱肿瘤有明显的治疗作用。另外本实验发现，髂内动脉供血的其他脏器如直肠和肾组织学检查均无坏死现象，呈正常状态，说明华蟾素髂内动脉灌注对膀胱以外的正常组织影响极小［11］。

［1］赵兴梅，陈晓明，杨祖贻，等.华蟾素注射液对人IL-2水平及LAK细胞活性的影响［J］.中药药理与临床，1999，15(6):33-35.

［2］苏劲.华蟾素对原位膀胱癌大鼠的影响［J］.第四军医大学学报，2009，30(12):1099-1102.

［3］吕静，王健，任成德.华蟾素诱导人膀胱癌细胞株T24凋亡研究［J］.中国现代医药杂志，2010，12(1):1-5.

［4］刘红耀，刘春，米振国，等.MNU诱导的大白鼠膀胱肿瘤动物模型［J］.肿瘤防治研究，2000，27(4):241-244.

［5］胡宏波，罗春丽.膀胱肿瘤动物模型研究进展［J］.国外医学:临床生物化学与检验学分册，2004，25(5):426-428.

［6］王锋，张薇，董红兵.蟾酥的药理研究及其临床应用概况［J］.国医论坛，2003，18(5):50-52.

［7］左小东，崔永安.华蟾素抗肿瘤作用的临床研究进展［J］.临床肿瘤学杂志，2003，8(3):232-235.

［8］王郦，吴军，李敏，等.华蟾毒精抑制Hela细胞增殖作用机制的探讨［J］.中华肿瘤杂志，2005，27(12):717-720.

［9］王双双，李柏，翟笑枫，等.华蟾素注射液抗肿瘤应用及其机制研究进展［J］.山东中医药大学学报，2008，32(5):436-438.

［10］程文宁，肖家全.华蟾素抗肿瘤作用及其机制研究进展［J］.医学综述，2009，15(8):1193-1194.

［11］冯坤，周怀君，胡娅莉，等.华蟾素对子宫内膜癌Ishikawa细胞株裸鼠皮下移植瘤生长及RRM2基因表达的影响［J］.中国中西医结合杂志，2010，30(11):1183-1185.