芍药苷在白芍单煎剂和桂枝汤中含量变化的研究

王 瑞 ，展晓日 ，王 皎 ，曾昭武

（1.山西中医学院中药系，山西 太原 030024； 2.杭州师范大学生物医药与健康中心，浙江 杭州 310012）

桂枝汤是由桂枝、白芍、甘草、生姜、大枣五味药物组成的复方，是解肌发汗、调和营卫的第一方，具有《伤寒杂病论》群方之冠的美称。白芍为毛茛科植物芍药的干燥根，其主要有效成分芍药苷具有镇静、解痉、抗炎、抗应激性溃疡病、扩张冠状血管等多种药理作用［1-2］。本研究将芍药苷作为含量测定的指标成分，通过高效液相色谱法测定白芍药材及桂枝汤中芍药苷的含量变化，探讨桂枝汤配伍的合理性。

1 实验材料

CAMAG TLCSCANNER-3薄层扫描仪（瑞士CAMAG公司），硅胶G（青岛海洋化工厂分厂），METTLER TOLEDO十万分之一电子分析天平，HANGPING-FA 2104万分之一电子分析天平。芍药苷对照品（批号：0715-200211，纯度>98%，中国药品生物制品检定所购买）。桂枝、白芍、甘草均购自北京同仁堂药店，大枣、生姜为市售。其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［3］与检测方法

硅胶G薄层板，展开剂为氯仿-乙酸乙酯-甲醇-浓氨试液（8∶1∶4∶1），显色剂为 5% 香草醛硫酸溶液，晾干，加热显色。检测波长为575 nm，参比波长700 nm；柱温：室温。

2.2 供试品溶液的制备［4］

2.2.1 桂枝汤供试品溶液的制备 根据处方分别称取桂枝、白芍、生姜各9 g，炙甘草6 g，大枣12枚（去核），精密称定，加入10倍量的水350 mL，浸渍1 h，煎煮30 min，过滤；残渣加入8倍量的水280 mL再煎煮20 min，过滤，合并两次滤液，水浴挥发至小体积，用蒸馏水定容至100 mL。精密吸取桂枝汤20 mL，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，弃去乙醚液，水溶液用水饱和的正丁醇萃取4次，每次20 mL；合并萃取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇蒸干，残渣用甲醇定容至5 mL，作为桂枝汤供试品溶液。

2.2.2 白芍供试品溶液的制备 精密称定白芍9 g，加水350 mL，浸渍1 h，煎煮30 min，过滤；残渣加水280 mL再煎煮20 min，过滤，合并两次滤液，水浴挥发至小体积，用蒸馏水定容至100 mL。精密吸取水煎液20 mL，用水饱和的正丁醇萃取4次，每次20 mL，合并萃取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20 mL，弃去水液，正丁醇蒸干，残渣用甲醇定容至5 mL，作为白芍供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取芍药苷对照品适量，用甲醇溶解并配成每毫升含1.93 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.4 阴性供试品溶液的制备

称取除白芍外的其他药材，按“2.2.1”项下桂枝汤供试品溶液的方法制备阴性样品溶液。

2.5 线性关系考察

用毛细管分别吸取对照品溶液 1 μL、2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL 点于同一硅胶 G 板上，照薄层色谱法（附录 VIB）试验［5］，按上述白芍薄层层析条件展开，取出，晾干，显色后，加热至斑点清晰，立即用玻璃板覆盖并封边，扫描。以芍药苷点样量X（μg）为横坐标，斑点面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=1 402.7X+1 076.8，r=0.999 8，结果表明，芍药苷在1.93 μg～19.3 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度实验

取同一份白芍供试品溶液，在同一块薄层板上点6个点，均点样4 μL，展开，取出，晾干，显色后扫描测定后，加热至斑点清晰，立即用玻璃板覆盖并封边，扫描芍药苷斑点。峰面积的RSD=2.2%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验

按处方称取桂枝9 g，白芍9 g，炙甘草6 g，生姜 9 g，大枣 12枚（去核），精密称定，按“2.2.1”项下方法制备桂枝汤供试品溶液，放置0 h，3 h，6 h，9 h，12 h，24 h后，按上述色谱条件进行TLC分析，每次点样4 μL，测定峰面积，计算得白芍中芍药苷含量为 1.24 mg/g，1.24 mg/g，1.33 mg/g，1.23 mg/g，1.29 mg/g，1.27 mg/g，RSD=3.0%，表明样品溶液在24 h内稳定。

2.8 重复性实验

按桂枝汤处方量称取6份，精密称定，照“2.2.1”项下方法制备。称取白芍药材6份，每份9 g，精密称定，照“2.2.2”项下方法制备。分别精密吸取上述溶液4 μL，依法测定，测得桂枝汤样品溶液中芍药苷含量分别为 1.24 mg/g，1.30 mg/g，1.27 mg/g，1.32 mg/g，1.23 mg/g，1.28 mg/g，RSD=2.7%。白芍供试液中芍药苷含量分别为 0.95 mg/g，0.97 mg/g，0.92 mg/g，0.95 mg/g，0.98 mg/g，0.91 mg/g，RSD=2.9%。

2.9 加样回收率实验

取芍药苷对照品适量，溶于甲醇中，制成浓度为10 mg/g芍药苷对照品溶液。称取白芍药材6份，每份4.5 g，精密称定，均加入上述对照品溶液0.3 mL，按照“2.2.2”项下方法制备，得白芍药材加样回收率供试品溶液。按桂枝汤处方量（白芍减半）称取6份，精密称定，均加入上述对照品溶液0.4 mL，照“2.2.1”项下方法制备，得桂枝汤加样回收率供试品溶液。吸取上述供试品溶液4 μL，对照品溶液4 μL和6 μL，交叉点于同一硅胶G薄层板上，按上述薄层扫描条件测定，得白芍药材中芍药苷加样回收率分别为99.8%，92.2%，93.1%，98.4%，96.3%，94.2%，RSD=3.2%；桂枝汤中芍药苷的平均加样回收率分别为 93.4%，96.2%，98.5%，96.8%，93.6%，99.4%，RSD=2.6%。

2.10 阴性干扰实验

移取白芍药材溶液、桂枝汤样品溶液、阴性样品溶液和芍药苷对照品溶液各4 μL，交叉点于同一硅胶G薄层板上，按照“2.1”项下薄层色谱条件展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸试液，加热至斑点显色清晰。白芍药材溶液和桂枝汤样品溶液在与对照品相同的位置显示相同颜色的斑点，阴性样品溶液在与对照品相同的位置没有斑点，不干扰样品的测定。

2.11 样品含量的测定

用毛细管吸取白芍供试品溶液4 μL，桂枝汤样品溶液 4 μL，对照品溶液 4 μL 与 6 μL，分别交叉点于同一硅胶G薄层板上，按上述层析、扫描条件，用外标两点法测定供试品中芍药苷含量。白芍药材中芍药苷的含量分别为 0.95 mg/g，0.93 mg/g，0.98 mg/g，0.91 mg/g，0.89 mg/g，0.94 mg/g，平均含量为 0.93 mg/g。桂枝汤中芍药苷的含量分别为1.24 mg/g，1.30 mg/g，1.27 mg/g，1.32 mg/g，1.23 mg/g，1.28 mg/g，平均含量为1.27 mg/g。桂枝汤中芍药苷的含量显著大于白芍煎液中芍药苷的含量（n=6，P<0.01），故桂枝汤配伍后对白芍中有效成分芍药苷具有助溶作用，配伍有助于药物有效成分的溶出。

3 讨论

芍药苷的提取方法有有机溶剂加热回流提取［6］、超声提取［7-9］和微波提取［10］等，这些方法能有效地提取芍药苷，但文中的样品均为水煎液，先用乙醚除去脂溶性杂质，然后用水饱和正丁醇萃取，最后用正丁醇饱和水除去水溶性杂质，这样可去除较多杂质干扰。回收率实验表明，该法对芍药苷的提取效率较高，选择性较强，重复性较好，可满足分析要求。

白芍在中国有悠久的用药历史和坚实的临床基础，常在方剂中配伍使用，几乎不作为单方应用。因此，文中考察了白芍配伍前、后芍药苷煎出量的变化，结果表明，复方配伍的桂枝汤中芍药苷的煎出量较白芍药材单煎液明显升高，从一个侧面说明了复方配伍理论的合理性。

通过采用薄层扫描法测定白芍药材和桂枝汤中芍药苷的含量，分析芍药苷在白芍单煎剂和桂枝汤中的含量变化，得出配伍后桂枝汤中芍药苷的含量较白芍单煎液中芍药苷的含量高，因此配伍有助于有效成分芍药苷的溶出。

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