乳腺癌组织中Ki67及血管内皮生长因子的表达

刘小青 李 玉 徐光辉 (连云港市第一人民医院肿瘤内科，江苏 连云港 222000)

乳腺癌是中国妇女近年来增长幅度最大的恶性肿瘤之一。Ki67是较为肯定的核增殖标志，其表达、变化可反映肿瘤的增殖活性〔1〕。血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤组织血管形成中发挥重要作用，与肿瘤生长、浸润和转移密切相关，本研究用SP免疫组化法检测乳腺癌组织及乳腺良性病变中Ki67及VEGF的表达，探讨其与临床因素之间的相关性及临床意义。

1 材料与方法

1.1 标本及主要试剂 所有49例标本均来自本院2007年5月至2008年9月住院拟手术的病人，入院前均无放化疗治疗史，并取得患者同意签署组织样本使用同意书。其中Ⅰ期13例，Ⅱ期24例，Ⅲ期12例，并设乳腺良性疾病对照20例。Ki67、VEGF一抗及SP试剂盒均购自Ⅰnvitrogen公司;

1.2 方法 石蜡切片常规脱蜡，高压煮沸2 min进行抗原热修复处理，3%H2O2孵育5 min以消除内源性过氧化物酶的活性，PBS冲洗 3 min/3次，加入一抗 Ki67、VEGF，4℃过夜，PBS冲洗3 min/3次加入二抗孵育1 h，PBS冲洗，加DAB显色，自来水充分冲洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片。阳性结果呈棕黄色或棕褐色颗粒，不同生物学指标在细胞中的着色部位不同，Ki67及VEGF阳性细胞分别为细胞核显色和细胞质显色，Ki67、VEGF切片随机观察5个中倍视野(×200)，每个视野计数200个细胞，将各视野中阳性细胞的平均百分比作为该切片的阳性细胞百分比。

1.3 统计学方法 采用SPSS12.0统计软件 χ2检验及Spearman相关分析进行数据分析。

2 结果

2.1 Ki67、VEGF在乳腺癌组织中阳性表达 见图1。

2.2 Ki67及VEGF在乳腺组织中的阳性表达情况 49例乳腺癌标本，Ki67阳性37例，VEGF阳性者34例，而在20例乳腺良性病变组织中Ki67及VEGF阳性分别为4例及2例，乳腺癌组织中Ki67、VEGF的表达率与乳腺良性病变组织比较差异显著(P＜0.01)。

图1 乳腺癌组织Ki67、VEGF表达(DAB，×100)

表1 Ki67、VEGF阳性表达与乳腺癌临床病理的关系

2.3 Ki67、VEGF的表达与乳腺癌临床病理的关系 见表1，Ki67的表达与乳腺癌的临床分期有关(P＜0.05)，与患者淋巴结转移状况无关(P＞0.05)，VEGF与临床分期及淋巴结转移状况均有关(P＜0.05)。

3 讨论

Ki67抗原最早在1983年由德国学者Gerdes等在霍奇金淋巴瘤源性细胞系中，使用鼠单克隆抗体抗核抗原的研究中发现，随后以Gerdes所在学校的名称Kiel Universily命名，Ki67是目前较为肯定的核增殖标记物，它在细胞周期的G1后期开始表达，S期和G2期表达增加，在M期达到高峰，有丝分裂结束后迅速降解，且不表达于DNA修复状态的细胞〔2〕。

目前在乳腺癌中关于Ki67探讨的焦点集中在该指标能否作为乳腺癌预测及预后判断的指标，既往的多个研究表明Ki67与多种肿瘤的发展、转移、及预后有关〔3～5〕。Klintman 等〔6〕在2010年研究报告表明Ki67是雌激素受体阳性及组织病理分级2级的淋巴结阴性乳腺癌患者的预后因素，并提出Ki67也许成为病理分级的补充指标。在本研究中，乳腺癌组织中Ki67的阳性率为75.5%，与其他学者的报道相近，Ki67在乳腺癌组织与乳腺良性病变组织中的表达差异显著，并且本研究还显示了Ki67的表达与肿瘤临床分期呈正相关，随着临床分期的增高，Ki67的阳性率明显增高，表明Ki67与乳腺癌的生长、浸润相关。本研究还显示了Ki67的表达与淋巴结转移状况无关，但因本研究样本例数较少，还需扩大样本量进一步探讨。

VEGF是血管生成的主要调控因子，特异性的作用于血管内皮细胞，促进细胞的有丝分裂，是近年来活跃于肿瘤研究中的热点，抗肿瘤血管生成的分子靶向药物在不少实体瘤的治疗中取得了较好的效果，这表明肿瘤中VEGF存在异常表达，本研究中乳腺癌组织中VEGF的阳性率为69.4%，VEGF的表达率与乳腺良性病变组织比较差异显著，VEGF与临床分期及淋巴结转移状况均有关。这符合恶性肿瘤发生、侵袭、转移的生物学规律。更有学者〔7〕报道了在乳腺癌中Ki67和VEGF的表达存在正相关关系。

1 Papantoniou VJ，Souvatzoglou MA，Valotassiou VJ，et al.Relationship of cell proliferation(Ki67)to99mTc-(v)DMSA uptake in breast cancer〔J〕.Breast Cancer Res，2004;6(2):56-62.

2 Beresford MJ，Wilson GD，Makris A.Measuring proliferation in breast cancer:practicalities and applications〔J〕.Breast Cancer Res，2006;8:216.

3 Mullerat J，Deroide F，Winslet MC，et al.Proliferation and p53 expression in anal cancer precursor lesions〔J〕.Anticancer Res，2003;23(3C):2995-9.

4 Liu M，Lawson G，Delos M，et al.Predictive value of the fraction of cancer cells immunolabeled for proliferating cell nuclear antigen or Ki67 in biopsies of head and neck carcinomas to identify lymph node metastasis:comparison with clinical and radiologic examinations〔J〕.Head Neck，2003;25(4):280-8.

5 Tut VM，Braithwaite kL，Angus B，et al.Cyclin D1 expression in transitional cell carcinoma of the bladder:correlation with p53，waf1，pRb and Ki67〔J〕.Br JCancer，2001;84(2):270-5.

6 Klintman M，Bendahl PO，Grabau D，et al.The prognostic value of Ki67 is dependent on estrogen receptor status and histological grade in premenopausal patients with node-negative breast cancer〔J〕.Mod Pathol，2010;23(2):251-9.

7 Nakopoulou L，Stefanaki K，Panayotopoulou E，et al.Expression of the vascular endothelial growth factor receptor-2/Flk-1 in breast carcinomas:correlation with proliferation〔J〕.Hum Pathol，2002;33(11):1061-3.