多功能显微诊断仪在淋球菌筛检中的应用

付登俊,沈艳群

多功能显微诊断仪(multifunction m icroscopy diagnosis Instrument,MDI)是近年来自国内外引进的一种屏幕线性放大40～20 000倍的高清晰度显微镜,主要用于末梢血检查的健康评估,由于其不仅具有放大倍数高,分辨率可达 0.3μm,且具有暗视野及相差两大性能。所以,我们将其拓宽至淋病奈瑟氏菌(neisseringonorrhoeae,NG)的筛检方面,通过与诊断标准方法(培养)对比研究及大量的临床实践,获得了一些经验与实验数据,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源 采集52例四川省皮肤性病防治研究所可疑淋病患者的尿道分泌物、精液、前列腺液、阴道分泌物作为检测标本。其中男 46例,女 6例,年龄 18～55岁。

1.2 检测方法 NG培养基：改良TM琼脂培养基含万古霉素(0.3μg/m l)粘菌素(7.5μg/m l)制霉菌素(12.5μg/ml)及三甲氧苄二氨嘧啶。仪器：MDI产地：美国。(1)标准诊断方法：淋球菌培养,将无菌采集到的标本,立即接种于改良 NG培养基中,放入 36℃、5%CO2培养箱孵育 48 h,按常规方法鉴定。(2)NG MDI活体检测法：将无菌采集到的标本直接滴加玻片上(若用棉拭子取样,则滴加 2滴生理盐水于玻片、将棉拭子中的样本洗脱于盐水中),加盖玻片后分别用暗视野,相差活体查找NG。在相差显微镜下,NG判定标准为：卵圆形或圆形、成双排列,两菌之间呈肾形紧密排列;菌体中央呈实心状。NG暗视野镜下特征：卵圆形或圆形呈微弱折光,菌体中央有紫红色颗粒。

1.3 统计学方法 采用医学统计软件：State软件包做χ2检验。

2 结果

NG培养结果与 MDI活体观察结果比较：52例标本中,2者均阳性为 16对,2者均阴性为 27对,MDI检测阳性而培养阴性者为 7例,MDI检测阴性而培养阳性者为 2例。见表 1。

表1 MDI检测结果(例)

运用临床诊断性试验评价方法[1],对四格表数据进行运算,MDI活体检测敏感性为88%,特异性为80.1%,采用医学统计软件包计算 χ2值,其 χ2=19.57484,χ2＞7.88(P＜0.005),故MDI活体检测与NG培养具有非常明显的关联性。

3 讨论

淋病奈瑟氏菌是性传播疾病的主要病原[2],病原学检查长期以来采用革兰氏染色与NG培养的方法。前者由于粒细胞内葡萄球菌、衰老菌均可染成革兰阴性而造成假阳性。后者由于 NG十分脆弱,离体后很快死亡并且容易造成假阴性。国外Aeeou-1cc等采用连接酶链反应(ligase chain reaction assay,LCR)[3],对 562例性病患者小便与生殖道分泌物同时测定沙眼衣原体与NG,结果发现：用LCR检测小便中NG的敏感性、特异性分别为93.5%和99.8%;检测生殖道分泌物分别为96.8%和100%。研究认为,采用LCR方法同时测定沙眼衣原体于 NG是敏感和特异的,且生殖道取样较小,使取样效果更佳[4]。

NG与其它葡萄球菌在MDI镜下区别：在相差镜下,白色葡萄球菌、腐生葡萄球菌、金黄色葡萄球菌均呈正圆形菌体、中央薄、边缘厚 ,明暗对比十分显著。暗视野下呈强折光、纯亮白色,与NG形态有显著差异。

实验显示：MDI发现有NG的样本中,均伴随着白细胞的出现,急性期,白细胞大量出现,成团成堆,慢性期,稀疏可见。若无白细胞,又出现有极少数形态学上类似 NG的细菌,一定要慎重出报告。通过对比研究：MDI活体检查与NG培养有非常明显的关联性。但亦有假阳性和假阴性。值得进一步深入研究。

淋病患者用药后再进行检查可导致MDI检测阳性而NG培养阴性,这种情况需停药 7～10 d重新检查。然而取材不同,量太少则可导致MDI阴性而NG培养阳性;所以,若患者有典型临床症状,样本中又有大量白细胞出现,则宜再次取样检查,以免漏检。若重复检查均为阴性,则有可能为沙眼衣原体和解脲支原体引进的非淋菌性尿道炎。PCR技术由于对细菌标本的要求不高,死菌,活菌,标本量少的情况均能检测出病原菌,所以日益受到人们的重视[5-6]。

目前,NG检测中,无论是革兰染色,DNA探针或培养法,均存在局限性,所以开发MDI高放大倍数,结合暗视野,相差的两大功能,快速筛查NG,同时建立淋球菌培养的标准化,即建立标准的培养系统—立即接种培养基预温,采用双培养基,一支加抑制杂菌的抗生素,另一支不加抗生素,必然会提高NG检出的特异性与敏感度。

[1] 王家良.临床医学科研设计指南[Μ].成都：四川科学技术出版社,1985：42.

[2] 张 轶,倪语星.三中检测淋病奈瑟氏菌方法的比较[J].上海医学检验杂志,1996,11(4)：200.

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