胚蛋注射谷氨酰胺对肉仔鸡早期免疫器官的影响*

邓留坤,高 睿,沈文正

(杨凌职业技术学院,陕西杨陵712100)

谷氨酰胺(glutamine,Gln)是动物处于应激状态下的一种条件性必需氨基酸,在动物体内含量十分丰富,是机体免疫细胞代谢的重要能量来源[1]。研究表明,Gln对应激或疾病状态下动物机体免疫功能的维持和恢复有着重要作用[2]。当动物处于应激或病理状态时,血浆Gln含量较正常水平降低20%～30%[3]。Gln还可以促进免疫细胞产生细胞因子,对提高免疫反应有重要作用,体外试验表明,细胞培养液中添加适量Gln后,淋巴细胞增殖和转化效率显著提高,其他氨基酸的添加则无此效果[4]。目前,Gln对机体免疫机能的调节作用已经在肠外营养的病人以及实验动物中得到证实。有关胚蛋注射Gln对肉鸡免疫功能影响的试验研究尚未见报道。本试验通过向18日胚龄胚蛋中注射Gln,研究不同浓度Gln对肉仔鸡早期免疫器官发育的影响,旨在为应用Gln增强肉仔鸡早期免疫机能提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药品 谷氨酰胺由上海惠兴生化试剂公司生产。

1.1.2 试验用鸡胚 孵化18 d胚蛋,购自陕西杨陵五星村孵化场。

1.1.3 主要器具 超净工作台,灭菌打孔器,灭菌石蜡,孵化出雏箱,育雏笼等。

1.2 方法

1.2.1 鸡胚处理 试验选用已孵化18 d的肉仔鸡活胚蛋240枚,称重,编号后随机分为4个处理组,每个处理6个重复,每个重复10枚种蛋。经照蛋确定羊膜腔的位置,碘酒消毒,750 mL/L的酒精棉球脱碘。处理组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别向鸡胚羊膜腔内注射质量浓度为5、10 mL/L和15 mL/L的Gln营养液1 mL(营养液均用7.5 g/L生理盐水配制,配好后经孔径为0.22 μ m无菌滤器滤过除菌),处理组Ⅰ仅注射同等剂量7.5 g/L生理盐水作为对照。经注射好的胚蛋用灭菌石蜡密封蛋壳上的注射孔,再将胚蛋放回孵化出雏器内,在温度为36.9℃、相对湿度为68%的条件下孵化,自然出雏。

1.2.2 饲养管理 对出壳雏鸡按组进行编号,饲养在育雏笼内,雏鸡出齐后2 h同时开食,使用市售肉雏鸡全价配合饲料,自由采食和饮水,进行全天光照,舍内温度32℃～35℃,湿度控制在67%左右。

1.2.3 测定指标 第3天和第7天(以出壳后24 h为1 d),雏鸡经自由饮水,禁食12 h,于每个重复中随机选取1只肉仔鸡测定空腹体重,同时经心脏采血致死,迅速剖解分离出胸腺、脾脏和法氏囊并称重,并计算免疫器官指数。

免疫器官指数=(免疫器官质量/宰前活体质量)×100%

1.2.4 数据处理 采用SPSS 13.0统计软件包对试验结果进行ANOVA方差分析和Duncan‵s多重比较(P＜0.05为差异显著,P＜0.01为差异极显著),结果以平均值±标准差(_X±SD)表示。

2 结果

胚蛋注射Gln对肉仔鸡3日龄免疫器官指数的影响见表1。由表1中可以看出,胚蛋注射Gln对3日龄肉仔鸡的胸腺、脾脏和法氏囊重量及其器官指数与对照组相比均差异不显著(P＞0.05),除5 mL/L注射组胸腺重量及其指数较对照组略有降低外,其他各试验组较对照组的器官重量和器官指数均有一定程度的增长。

表1 胚蛋注射Gln对肉仔鸡3日龄免疫器官指标的影响Table 1 Effects of in ovofeeding of Gln on the immune organ indexes of 3 day s broilers

胚蛋注射Gln对肉仔鸡7日龄免疫器官指数的影响见表2。各试验组肉仔鸡的胸腺重量与对照组相比均有提高的趋势,但均无统计学差异(P＞0.05),Ⅲ、Ⅳ组胸腺指数显著高于对照组,分别提高了22.67%和19.56%(P＜0.05);Ⅱ组脾脏重量较对照组显著提高25.00%(P＜0.05),Ⅲ组较对照组显著提高31.25%(P＜0.05),Ⅱ、Ⅲ组的脾脏指数均显著高于对照组,分别提高了24.53%和32.08%(P＜0.05),Ⅳ组的脾脏重量及指数均比对照组有所提高,但均未达到统计学差异(P＞0.05);各试验组法氏囊重量及指数与对照组相比有提高的趋势,但差异均不显著(P＞0.05)。

表2 胚蛋注射Gln对肉仔鸡7日龄免疫器官指标的影响Table 2 Effects of in ovo feeding of Gln on the immune organ indexes in 7 day s broilers

3 讨论

胸腺、脾脏和法氏囊是禽类免疫细胞成长、发育分化及发育成熟的主要场所,其生长发育状况与机体的免疫功能密切相关。胸腺是机体的中枢免疫器官,主要与T细胞成熟有关,这些细胞可转移到脾、盲肠、扁桃体及其他淋巴组织中,在特定的区域定居、繁殖,并参与细胞的免疫活动[5]。脾脏是位于血液循环通路上的外周免疫器官,是动物机体滤过血液和对血源性抗原物质产生免疫应答的重要场所。脾脏的过滤功能不但可以清除衰老死亡的红细胞,还能清除血流中的大部分抗原,参与细胞免疫应答,如果切除脾脏,机体产生抗体的能力会显著降低[6-7]。法氏囊是禽类特有的中枢免疫器官,是抗体细胞成长和分化的部位[8]。来自骨髓的淋巴干细胞经血液循环流经法氏囊后,在受囊激素作用下,被诱导分化为干细胞,再进一步分化为前B淋巴细胞,然后分裂增殖为B淋巴细胞,离开法氏囊后迁移至外周淋巴组织,参与体液免疫。胸腺、脾脏和法氏囊的发育状态及机能强弱,直接决定禽类全身免疫水平的高低[9]。

免疫器官称重法是研究机体免疫状况的方法之一。在正常生理情况下,免疫器官细胞的生长发育、分裂增殖导致了免疫器官重量的增加[10]。一般认为免疫器官重量的降低为免疫抑制所致,免疫器官重量增加则为免疫增强的表现,指数的提高表示该器官的发育速度加快[11]。

黄冠庆[12]在日粮中添加Gln明显提高了21日龄肉仔鸡法氏囊和脾脏的重量及法氏囊指数。周联高等[13]在日粮中添加Gln加快了肉仔鸡胸腺和脾脏发育,并延缓法氏囊的退化。刘艳芳等[14]通过试验证明饲料中添加不同剂量的Gln显著提高了14日龄肉鸡的胸腺和脾脏指数。张敏等[15]在肉仔鸡饲粮中添加Gln具有改善免疫功能的作用。

本试验通过向胚蛋孵化后期羊膜腔内注入不同剂量的Gln表明,其在一定程度上提高了肉仔鸡胸腺、脾脏和法氏囊的重量及指数。在添加剂量方面,Ⅲ组对免疫器官及其指数的促进作用较其他试验组明显。在免疫器官方面,脾脏和胸腺的增重和指数增长较法氏囊明显,这可能与法氏囊在胚胎发育中出现较早,所以添加Gln对发育没有显著影响有关。Gln对免疫器官生长促进作用的产生可能是其为肉仔鸡提供了丰富的前体物质,有利于免疫器官的形成与发育的结果,也有研究者认为,谷氨酰胺刺激了淋巴细胞的增殖,使免疫器官的质量通过淋巴细胞的数量增加而增加。

本研究显示,胚蛋注射Gln可以促进肉仔鸡早期胸腺、脾脏和法氏囊的生长发育。其中,以Ⅲ组的胸腺、脾脏重量增加和指数增长效果明显。

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