中药菟丝子盐制工艺研究*

郜新莲，刘艳芳，张振凌

菟丝子为旋花科植物菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子，味甘、温，归肝、肾、脾经，具有滋补肝肾、固精缩尿、安胎、明目、止泻的作用。菟丝子既是一种恶性寄生植物，又是一种名贵的药用植物，临床用于阳痿遗精、尿有余沥、遗尿尿频、腰膝酸软、目晕耳鸣、肾虚胎漏、胎动不安、脾肾虚泻及外治白癜风。由于菟丝子质地坚硬，又较细小，煎出效果差，且不易粉碎，故无论临床配方入煎剂还是成药制剂生产，多以盐制和酒制炮制后较为常见［1］。目前对菟丝子的研究多集中于菟丝子药材的化学成分和药理研究方面［2］，而对炮制工艺的研究和炮制机理的探讨及系统研究则相对较少。本实验室以不同炮制因素对菟丝子化学成分进行比较研究说明，盐制炮制能提高菟丝子槲皮素含量，但不同炮制因素对其含量也有一定程度的影响，故有必要进行工艺条件的研究。本文采用正交试验，以槲皮素含量为指标，考察烘制温度、烘制时间、闷润时间不同水平，优选菟丝子盐制炮制工艺。

1 仪器与材料

1.1 仪器

烧杯、量筒(100mL)、托盘、RAYST30XXAP激光测温仪(北京雷泰光电技术有限公司)，GHG-9076A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，FR-高精度电子厨房秤(佛山市顺德区拓普域电子有限公司)，SHIMADZU LC-2010T高效液相色谱仪，Mettler AE240型十万分之一电子天平(瑞士)，TDL-40B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)，KQ-500DV型数控超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)，HH-S型恒温水浴锅(北京中兴有限公司)，Sartorius BS210S型万分之一电子天平(北京 SARTORIUS 有限公司，max210g，d 0.1mg)，蒸发皿、索氏回流提取器、移液管、冷凝管等(天津玻璃仪器厂)。

1.2 材料

1.2.1 药材 菟丝子药材采购于河南药材市场，经鉴定为旋花科植物菟丝子 Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子。

1.2.2 食用盐 河南省盐业总公司(批号20090124)，5倍量水溶解、备用。

1.3 试剂

槲皮素对照品，中国药品生物制品检定所(批号100081-200406);色谱纯甲醇，天津市四友精密化学品有限公司(批号090210)，甲醇，天津市永大化学试剂开发中心(批号20080115，分析纯)。双蒸水、磷酸，天津市北方天医化学试剂厂(批号050304)。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计

2.1.1 正交试验设计 表1显示，由于菟丝子质地坚硬，食盐用量不宜太多，故不再考虑。仅以烘制温度、烘制时间、闷润时间为因素，每个因素各取3个水平，选用L9(34)正交试验表进行正交试验设计。

表1 菟丝子盐制工艺因素水平表

2.1.2 正交试验样品的炮制 称取菟丝子饮片各50g，分别加入质量分数为2%的盐水，拌匀、闷润，将闷润好的饮片均匀平铺至瓷盘内，放入烘箱以不同的烘制温度，烘制不同时间，取出放凉、粉碎、过40目筛，即得。

2.2 槲皮素含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Synergi 4u Hydro-Rp 80A(4.6×250mm)，流动相:甲醇-0.4%磷酸水(45∶55)，流速:1mL/min，柱温:35℃，检测波长:360nm。

2.2.2 供试品溶液的制备 称取药材粉末0.5g，精密称定置100ml具塞锥形瓶中，加入80%甲醇50ml称定重量，超声提取20min取出静置，补足重量、过滤，用移液管精密移取10ml续滤液，放至蒸发皿中挥尽溶剂，加80%甲醇定容至2ml容量瓶中，摇匀即得。

2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品 2.33mg，加 80%甲醇溶液溶解，定容于100ml容量瓶中摇匀，配成浓度为0.0233mg/ml的槲皮素对照品溶液。

2.2.4 线性关系考察 表2图1显示，取槲皮素对照品溶液，在上述色谱条件下，分别精密吸取1、5、10、15、20、25、35μL 进样，测定峰面积。以槲皮素含量x(μg)为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线计算回归方程为 y=3958949x－51803，r=0.9999。结果表明，槲皮素在0.0233～0.8152μg范围内线性关系良好。

表2 槲皮素线性范围试验

图1 槲皮素标准曲线图

2.2.5 精密度试验 表3显示，精密吸取同一供试品溶液10μl，连续进样 6次，依法操作测定 6次，RSD=0.75%。结果表明，精密度良好。

表3 精密度试验

2.2.6 稳定性试验 表4显示，精密吸取同一供试品溶液 10μl，每隔 2h测定其峰面积，RSD为1.32%。结果表明，样品溶液在0～24h内稳定性良好。

表4 稳定性试验

2.2.7 重复性试验 表5显示，取同一批样品，按供试品溶液的制备方法平行制备6份，精密吸取上述供试品溶液10μl，分别注入液相色谱仪，RSD为1.36%。结果表明，重复性良好。

表5 重复性试验

2.2.8 加样回收率试验 表6显示，取同一供试品粉末(过40目筛)约0.25g共6份，精密称定，分别置于锥形瓶中，加入0.1310mg/ml槲皮素对照品溶液1ml，其余按照供试品溶液制备项下同法操作，得各供试品溶液。分别精密吸取各加样回收供试品溶液10μl，注入液相色谱仪测定含量，得平均回收率为98.96%，RSD=1.05%。

表6 加样回收率试验结果

2.3 菟丝子盐制工艺正交设计试验结果

表7、8显示，因素 A、B、C即烘制温度，烘制时间和闷润时间均无显著影响。结合直观分析表，确定菟丝子盐制的炮制工艺是A2B3C1，即闷润1h后在160℃烘箱中烘制60min。

表7 菟丝子盐制工艺正交设计与结果表

表8 方差分析结果

2.4 菟丝子盐制优选炮制工艺验证试验

表9显示，取菟丝子约50g，按优选出的炮制工艺炮制。取盐制品粉末1.5g分3份，平行操作，制备样品溶液进行高效液相检测。结果表明，菟丝子盐制优选炮制工艺具有可行性与准确性。

表9 优选盐制炮制工艺验证试验

3 讨论

3.1 菟丝子在临床上用于阳痿遗精、尿有余沥、遗尿尿频、腰膝酸软、目晕耳鸣、肾虚胎漏、胎动不安、脾肾虚泻等，因而菟丝子盐制是引药入肾。菟丝子生品中槲皮素含量较低，炮制后含量升高，并具有保肝、保肾，对心血管系统具有增加冠脉流量、扩冠、降压及强心、壮阳、调节内分泌、抗衰老，提高人体免疫力、抗氧化和抗突变等作用，是菟丝子中有效成分之一［3］，因此以槲皮素含量为指标，采用正交试验的方法，优选并确定菟丝子盐制的工艺条件，有一定的依据。本研究所选因素水平是在大量预试验的基础上进行的，证明炮制已达到最大限度保留有效成分的作用，且验证试验也进一步证明了这一点，说明该炮制工艺是合理的。

3.2 菟丝子为寄生植物，文献报道其活性成分不仅与品种有关，还与寄主的品种有关，进一步研究和明确菟丝子中有效成分的含量和种类，对于菟丝子炮制规范化研究具有重要的意义。

［1］ 江苏新医学院.中药大辞典［M］.(下卷)，上海:上海科学技术出版社，1986:2007.

［2］ 叶 敏，阎玉凝，乔 梁，等.中药菟丝子的化学成分研究［J］.中国中药杂志，2002，7(2):115-116.

［3］ 郭 澄，王雅君，张剑萍.菟丝子的化学成分和药理活性研究［J］.时珍国医国药，2005，16(10):1035.