HPLC法测定头孢泊肟酯分散片中有关物质的含量

俞 平（南京市溧水县人民医院，溧水县 211200）

头孢泊肟酯（Cefpodoxime Proxetil）为第3代广谱半合成口服头孢菌素，为头孢泊肟的前体药物。头孢泊肟酯本身无抗菌活性，在肠壁被非特异性的酯酶水解成头孢泊肟而发挥抗菌活性。头孢泊肟有广谱而强大的抗菌作用，组织分布广泛，具有治疗量小、每日给药频数少的优点[1]。分散片是能迅速崩解的一种速释剂型，主要用于溶解性差的药物。头孢泊肟酯极易溶于甲醇或乙腈，易溶于乙醇，几乎不溶于水[2]。笔者采用高效液相色谱（HPLC）法对自制的头孢泊肟酯分散片进行了有关物质检测，并进行方法学研究。

1 仪器与试药

LC-10A高效液相色谱仪、SPD-10A紫外检测器（日本岛津公司）；N2010色谱工作站（浙江大学智能信息研究所）；UV-2450紫外-可见分光光度计（日本岛津公司）。

头孢泊肟酯对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130517-200401）；头孢泊肟酯分散片（自制，规格：每片含头孢泊肟0.1 g，批号：101010、101011、101012）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：ODS（C18）柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：水-甲醇（55∶45）；检测波长：240 nm；流速：2.0 mL·min－1；进样量：20 μL；柱温25℃。头孢泊肟酯同分异构体A、B间分离度应≥4.0，头孢泊肟酯异构体B理论板数应≥5 000。在此条件下头孢泊肟酯与有关杂质实现基线分离。色谱见图1。

2.2 溶液的制备

图1 高效液相色谱图A.空白溶液；B.对照品溶液；C.样品溶液Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank solution；B.control solution；C.sample solution

2.2.1 供试品溶液的制备 取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢泊肟酯100 mg），置于100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中含头孢泊肟酯1 mg的溶液，摇匀，过滤，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称定头孢泊肟酯对照品约100 mg，置于100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每1 mL中含头孢泊肟酯1 mg的溶液，摇匀，过滤，作为对照品溶液。

2.2.3 对照溶液的制备 精密量取供试品溶液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照溶液。

2.3 辅料干扰试验

根据处方比例及生产工艺制备空白片，取空白片20片，精密称定，研细，精密称取0.5 g，置于100 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，得空白对照溶液。取样品20片，精密称定，研细，精密称取0.5 g，按照“2.2.1”项下方法制备供试品溶液。按照“2.1”项下方法分别测定空白对照、供试品溶液。结果，混合辅料溶液在该色谱条件下无吸收，故辅料不干扰本品有关物质的检测。

2.4 空白溶剂试验

取流动相20 μL注入液相色谱仪，按照“2.1”项下方法测定。结果，溶剂在该色谱条件下无吸收，故空白溶剂不干扰本品的有关物质检测。

2.5 破坏试验

2.5.1 强碱破坏试验 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加入0.5 N氢氧化钠溶液10 mL，于室温条件下破坏2 h，再用0.5 N盐酸调节溶液pH至中性，再加流动相稀释至刻度，滤过，取续滤液按照“2.1”项下方法测定。结果，主要降解产物的保留时间为10 min和15.2～16.4 min，各降解产物与头孢泊肟酯A（11.5 min）、头孢泊肟酯B（14.4 min）及头孢泊肟酯A和B中间的Δ3-异构体（12.4 min）有较好的分离效果。

2.5.2 强酸破坏试验 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加入0.5 N盐酸溶液10 mL，于室温条件下破坏2 h，再用0.5 N氢氧化钠调节溶液pH至中性，再加流动相稀释至刻度，滤过，取续滤液按照“2.1”项下方法测定。结果，主要降解产物的保留时间为0～6 min及10 min，头孢泊肟酯A、头孢泊肟酯B及头孢泊肟酯A和B中间的Δ3-异构体基本完全破坏。

2.5.3 强光照射破坏试验 取本品10片，裸片放置在光照强度为（4 500±500）lx的条件下破坏48 h，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液按照“2.1”项下方法测定。结果，主要降解产物的保留时间为10 min和15.2～16.4 min，各降解产物与头孢泊肟酯A（11.5 min）、头孢泊肟酯B（14.4 min）及头孢泊肟酯A和B中间的Δ3-异构体（12.4 min）有较好的分离效果。

2.5.4 高温破坏试验 取本品10片，裸片放置在105℃烘箱中破坏48 h，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液按照“2.1”项下方法测定。结果，主要降解产物的保留时间为10 min和15.2～16.4 min，各降解产物与头孢泊肟酯A（11.5 min）、头孢泊肟酯B（14.4 min）及头孢泊肟酯A和B中间的Δ3-异构体（12.4 min）有较好的分离效果。

2.5.5 过氧化氢破坏试验 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于头孢泊肟酯50 mg），置于50 mL容量瓶中，加入30%过氧化氢10 mL，于室温条件下破坏2 h，加流动相溶解并稀释至刻度，滤过，取续滤液按照“2.1”项下方法测定。结果，主要降解产物的保留时间为0～6、10和15.2～16.4 min，各降解产物与头孢泊肟酯A（11.5 min）、头孢泊肟酯B（14.4 min）及头孢泊肟酯A和B中间的Δ3-异构体（12.4 min）有较好的分离效果。

2.6 最小检出量

取头孢泊肟酯对照品溶液，加流动相振摇使溶解并制成一定浓度的溶液，并逐级稀释，取20 μL注入液相色谱仪，根据信噪比（S/N＝3），头孢泊肟酯A的最小检测限为1.6 ng，头孢泊肟酯B的最小检测限为1.2 ng。

2.7 重复性试验

精密称取批号为101010的头孢泊肟酯分散片6份，研细，精密称定每份0.50 g（约含头孢泊肟酯100 mg），置于100 mL容量瓶中，按照“2.2”项下方法制备供试品溶液和对照品溶液，按照“2.1”项下方法进行有关物质测定。结果，有关物质的平均含量为3.03%，RSD＝0.3%；Δ3-异构体为3.12%，RSD＝0.4%，表明该方法重复性良好。

2.8 精密度试验

取头孢泊肟酯对照品适量，按“2.2.1”项下方法制备对照品溶液，按“2.1”项的方法连续6次进样测定，记录色谱图。结果，RSD＝0.51%，表明该方法精密度较高。

2.9 头孢泊肟酯分散片有关物质测定

通过方法学研究试验，表明上述有关物质的测定方法可行。取自制的3批头孢泊肟酯分散片，分别制备供试品溶液和自身对照溶液，进行3批样品的有关物质的检测。结果，有关物质分别为3.07%、2.92%、3.1%；Δ3-异构体分别为3.24%、3.08%、3.04%，表明试验结果均符合规定。

3 讨论

3.1 测定波长的选择

取头孢泊肟酯对照品适量，精密称取10 mg，置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在200～400 nm波长处扫描。结果，头孢泊肟酯溶液在240 nm处有最大吸收，故选择240 nm作为检测波长。

3.2 流动相的选择

参照2010年版《中国药典》（二部）中头孢泊肟酯质量标准中有关物质项下的色谱方法，分别对水-甲醇[2]及0.01 mol·L－1的醋酸溶液-乙腈[3]流动相系统进行筛选，在不同流动相条件及比例下，分别取供试品溶液进样，记录色谱图。试验结果表明，在0.01 mol·L－1的醋酸溶液-乙腈系统条件下，主峰峰形较差；水-甲醇系统，在水与甲醇比例为55∶45时，主峰峰形好，保留时间合适，头孢泊肟酯A和B间分离度＞4.0，头孢泊肟酯异构体B＞5 000。故确定水-甲醇（55：45）作为流动相。

3.3 破坏性试验

破坏性试验是在人为设定的特殊条件下，使药物降解，来验证方法的可行性，分析药物可能的降解途径和降解产物。破坏性试验的条件通常有：酸——0.1～1 mol·L－1盐酸或硫酸溶液；碱——0.1～1 mol·L－1的氢氧化钠溶液；氧化——适当浓度的过氧化氢溶液；高温——通常温度高于加速试验温度；强光——可采用4 500 lx强光照射。具体条件需结合药物的特点，使药物有一定量的降解。本试验采用了适宜的破坏方法，在这些条件下，头孢泊肟酯均有一定的降解，且降解产物与主成分峰均有较好的分离效果。

综上所述，通过多次试验确定头孢泊肟酯分散片有关物质检查的方法和条件，在此条件下辅料及溶剂对头孢泊肟酯的有关物质测定无干扰，有关物质和降解产物与主成分峰分离效果良好；并对该方法进行方法学考察，表明该法简便、快速、准确，可用于头孢泊肟酯质量控制。

[1] 邵长周，瞿介明，何礼贤.第3代头孢菌素——头孢泊肟酯[J].中国新药与临床杂志，2004，23（11）：746.

[2] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：198-200.

[3] 日本药局方编辑委员会编.日本药局方[S].15 XV.2005：461-462.