猪喘气病的诊断与防治

梁 明 张友基 古从伟 罗丕仁

（1.广元市元坝区香溪乡畜牧兽医站，广元 628025；2.广元市元坝区元坝镇畜牧兽医站，广元 628021；3.广元市元坝区畜牧食品局，广元 628021；4.广元市元坝区王家镇畜牧兽医站，广元 628026）

猪喘气病又称地方性流行性肺炎，是猪的一种慢性呼吸道传染病，主要症状为咳嗽和气喘，病变特征是融合性支气管肺炎，常发生于肺脏前腹侧。本病病原为猪肺炎支原体，是由Mare和Switzer在l965年首先从患病猪的肺组织中分离出来的。此病广泛存在于世界各地，发病率一般在50%～80%。在国内猪场的阳性率在30～50%。患猪长期生长发育不良，增重下降9%，饲料利用率降低13.8%。猪喘气病一般很难彻底治愈，渐渐成为顽固性疾病而令人头疼，并且难以净化。因此如何有效预防和控制猪喘气病成为当今养猪业面临的一项重要课题。

1 病原体

猪肺炎支原体缺乏细胞壁而不同于细菌，能在无细胞培养基生长繁殖，并含有RNA和DNA而有别于病毒。支原体以二分裂方式繁殖，基本形态为圆形、丝状形，后者易形成分枝状菌丝，因而得名支原体。其大小介于病毒和细菌之间，最小直径125～250nm，可通过滤器。基因组小，只有5×108道尔顿，是最小的能自我复制的原核生物。因无细胞壁，故是多形态微生物，有环状，球状，点状，杆状和两极状。电子显微镜下以类圆形、圆形颗粒多见，菌体含有核糖体，外有3层膜样结构。

本菌生长条件要求较严格，不易培养。体外培养时需富含血清、酵母浸液、核酸等成分的培养基才能生长，最常用的是 Friis在1975年报道的培养基。

猪肺炎支原体对自然环境抵抗力不强，圈舍、用具上的支原体，一般在3 d左右失活，病料悬液中支原体在15～20℃，放置36 h，即丧失致病力。猪肺炎支原体对青霉素和磺胺类药物不敏感，但对壮观霉素、土霉素和卡那霉素敏感。常用的化学消毒剂均能达到消毒目的。

2 症状和病理变化

在单纯感染肺炎支原体时，主要以咳嗽与气喘为主要临床症状，体温无多大变化，随着病的发展咳嗽次数逐渐增多，发生呼吸困难，表现为明显的腹式呼吸，急促而有力；严重者张口喘气，像拉风箱，有喘鸣音，此时精神萎顿食欲减少或废绝，身体日渐消瘦，皮毛粗乱，生长发育不良，病程可持续数月。有少数病猪发病初期体温稍有升高，病程较短，约1周左右，常因衰竭和窒息而死亡，死亡率较高。

猪支原体肺炎的病理变化主要在肺，有不同程度的水肿和气肿，2肺的尖叶和心叶呈对称性、融合性支气管肺炎病变。常发生于尖叶、心叶、中间叶下垂部和膈叶前部下缘，出现淡红色或浅紫色呈“虾肉样”病变，肺门和纵膈淋巴结明显肿大、质硬、灰白色切面。其他内脏一般无明显变化。在诊断本病时应注意继发其他他猪呼吸道疾病如猪肺疫、猪流感和猪蓝耳病等引起的病理变化，如高温、犬坐式呼吸、皮肤发红等。

3 诊断方法

3.1 临床诊断

猪肺炎支原体的主要临床症状为咳嗽和气喘，病变的特征是肺的尖叶、心叶、中间叶和膈叶前缘呈肉样或虾肉样实变，肺门淋巴结肿大。与其他病原共同感染后有发热、食欲废绝、呼吸困难等症状。

3.2 细菌学培养

对临床感染肺炎支原体的肺组织进行体外培养被认为是监测的金标准，但是这种病原分离需要特定的Friis培养基。Sorensen等对支原体培养法、免疫荧光检测、ELISA检测以及PCR检测方法进行比较，结果发现细菌培养方法是最敏感的检测方法，然而进行支原体培养比较费时费力，从临床样品中分离到支原体需要4～8周。

3.3 血清学检测

血清学检测用于监测猪群的猪支原体肺炎抗体状况，用已知特异性猪肺炎支原体抗原检测动物血清中特异性抗体，通过对血清中抗体效价的变化或特异性抗体的有无，判定病原体感染情况或者免疫效果。血清学检测虽然简单方便，但仍有缺点，主要是难以区分疫苗抗体与感染抗体。

3.4 间接血凝试验（IHA）

间接血凝试验具有一定的特异性和敏感性，是常用诊断方法之一。但由于血清中含有特异吸附因子易溶血，制备的红细胞存在个体差异不易标准化，试验不易操作使得IHA在临床应用中受到一定的限制。Dowdle等用IHA检测猪肺炎支原体抗体，感染猪的血清能使绵羊红细胞自然溶血。Lam等用猪红细胞代替绵羊红细胞，虽然在试验中不易发生溶血现象，但是其效价比用绵羊红细胞低。

3.5 补体结合试验（CFT）

补体结合试验是检测猪血清中猪肺炎支原体抗体的有效试验之一，包括微管补体结合试验和微量修正补体结合试验。补体结合试验在试验接种猪和自然感染猪中，CFT阳性率与猪肺部病变有较好的相关性，但仍存在着很高的假阳性和假阴性。Lloyd等研究认为，假阴性是由于循环抗原的影响，而假阳性是由于感染了其他支原体出现交叉反应。此外，CFT不能确定4～9周龄猪是否感染猪肺炎支原体。CFT在敏感性和特异性方面存在一定的局限性，但如果综合运用临床诊断和病理显微检查，CFT仍是确定肺炎支原体感染状况的有效手段之一。

3.6 酶联免疫吸附试验（ELISA）

ELISA通过检测血清样品，即可以检测抗原也可以检测抗体，其结果反映动物的感染情况和抗体水平。与IHA和CFT相比，ELISA具有更高的敏感性和特异性，Armstrong和Bereiter用ELISA在保存1年的血清样品中检测到了猪肺炎支原体抗体。Bruggmann等首次报道了以SDS提取物作抗原，用间接ELISA检测猪肺炎支原体抗体的敏感性较高。Futo克隆了Mh22表面抗原（p46）基因，在大肠埃希菌中表达，用提纯的重组p46蛋白作抗原，用于ELISA诊断，结果发现与其他猪支原体无交叉反应。Potier等建立了一种用猪肺炎支原体特有的40 ku膜蛋白作抗原的单克隆抗体阻断ELISA，用此方法检测接种猪鼻支原体和絮状支原体的SPF猪和感染肺炎支原体猪的血清，发现肺炎支原体与絮状支原体和猪鼻支原体无交叉反应。ELISA检测方法简单、价格便宜。目前已有商品化的ELISA检测试剂盒，包括间接ELISA、双夹心ELISA、竞争ELISA和斑点ELISA等类型。

3.7 分子检测技术

3.7.1 原位杂交技术（ISH） 原位杂交技术用于检测福尔马林固定、石蜡包埋的肺组织中的猪肺炎支原体 DNA。这种检测技术主要是利用肺炎支原体特定的基因进行地高辛标记为探针进行检测。荧光核酸探针也可用来标记l6 S rRNA进行检测猪肺炎支原体。这种检测技术的缺点是只能检测死亡后的临床样品，并且检测费时，因此不能够用来进行快速检测。

3.7.2 PCR检测技术 PCR检测方法与细菌学培养方法相比，具有速度快、特异性高等优点，Stemke等用部分肺炎支原体 16 S rRNA基因作目标分子，利用肺炎支原体特有的基因序列作引物建立了直接PCR，检测时间只需4 h。随后，Harasawa等用合成的引物通过PCR扩增出520bp 猪肺炎支原体 DNA，扩增出的DNA用合成的寡核苷酸探针进行印迹杂交鉴定，证明了PCR有特异性。PCR检测技术既可以检测死亡动物体内的肺炎支原体也可以检测活动物体内的肺炎支原体。肺炎支原体定植于上呼吸道纤毛，可以用支气管棉拭子、支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织样品进行肺炎支原体PCR检测，但是有研究认为对肺组织样品检测方式优于BALF方式。不过PCR法也有其缺点，它诊断费用较高，对人员的操作技能具有一定要求，检测过程中处理不当也容易出现假阳性现象。

4 预防

防制猪场肺炎霉形体的感染应坚持综合防治措施，疫苗预防、生物安全、药物控制缺一不可。

4.1 未发病地区和猪场的主要措施

（1）坚持自繁自养原则。尽量不从外地引进种猪，如必须引进时，购入后进行严格的检疫和隔离观察。

（2）加强饲养管理。给予全价饲料，提高猪的体质。推广人工授精，避免母猪与种公猪直接接触，保护健康母猪群。虽然从猪的精液里已分离到支原体，但是研究工作者认为通过人工授精使支原体传播的可能性不大。

（3）免疫接种。猪肺炎支原体自然和人工感染都可产生一定的免疫力，增加猪喘气病的康复力，说明通过肺炎支原体疫苗在控制猪喘气病上是有效的。但机体对猪肺炎支原体的免疫力主要是局部的细胞免疫和黏膜免疫力，特别是气管和肺脏局部的黏膜免疫力，起保护作用的主要是存在于上呼吸道和支气管分泌物中的分泌型IgA。为了保护猪群不受喘气病的侵害，所以应尽早免疫。在仔猪感染支原体前就要进行免疫，这时诱发的免疫保护率更高，保护时间更长。

（4）药物预防。肺炎支原体主要采取粘附呼吸道纤毛感染，注射和口服等方式不能使药物到达纤毛，因此已感染的猪常复发，所以一般药物预防采用间断性给药，这种投药可减少疾病造成的发生，其作用与接种疫苗相似，但对已感染的猪起不到预防作用。

4.2 疫区防控措施

疫区应以监测、免疫为主，结合隔离、治疗、淘汰、消毒等综合防制技术，进行控制与净化。种猪和新生仔猪右侧肺内注射气喘病的弱毒冻干疫苗。阳性猪场病愈母猪临产前1个月用有效的抗生素饲喂2周，如土霉素碱或泰乐菌素等。气喘病感染严重的猪场，如哺乳仔猪发病率高，可对哺乳猪进行疫苗免疫，如5～10日龄首免，25～30日龄加强免疫。同时，利用各种监测手段淘汰和隔离可疑病猪，隔离病猪使用抗生素如泰乐菌素、卡那霉素、林可霉素等进行治疗，并可添加黄芪多糖、多维等提高猪的抵抗力，对喘气严重的猪可以使用阿托品、盐酸麻黄素、氨茶碱等以松弛支气管平滑肌，使气喘减缓，并配合消毒切断传播途径。以康复母猪培育无病的后代，逐步建立和扩大健康猪群。以人工哺乳或健康母猪带仔培育健康仔猪。邓道永等在四川蒲江某规模化养猪场的实验证明，3年来通过此综合防制技术可以使猪肺炎支原体得到控制与净化，治愈后的猪与易感猪同居感染不发病，X线胸透、剖检肺脏均无眼观病变，分离猪肺炎支原体为阴性，种猪的连续2 代仔猪不感染易感猪，结果证明全场猪只无猪支原体肺炎。