HPLC法测定己氯软膏中氯霉素的含量
2011-01-30侯大平曲秀梅张志国
侯大平,曲秀梅,方 芳,李 冬,张志国
佳木斯大学第一附属医院药剂科,黑龙江佳木斯154002
己氯软膏是经过我院药剂科和妇科几代专家和教授摸索、循证研制的制剂。其既具有增强阴道局部抵抗力的作用,又能有效杀灭致病菌,治愈率及总有效率较高,深受广大老年妇女欢迎,此制剂亦为我院特色制剂之一。为保证药品质量和制剂标准提高需要,本文建立了HPLC法测定己氯软膏中氯霉素的含量测定方法,该法操作简便、灵敏度高,结果满意。
1 仪器与试剂
大连伊利特P230Ⅱ高效液相色谱仪,UV230Ⅱ紫外-可见检测器,EC2006色谱数据处理工作站。
甲醇(色谱纯,天津凯通化学试剂有限公司生产);氯霉素对照品(批号:130555-200602,中国药品生物制品检定所提供);己氯软膏(本院制剂室生产);其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Sinochrom ODS2 色谱柱(4.6 mm×200 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(59∶41);流速:1.0 ml/min;检测波长:272 nm;进样量:20 μl。
2.2 试验溶液的制备
精密称取本品约2 g,置100 ml碘瓶中,用甲醇超声提取 2 次(20、15 ml),每次 20 min,冷至室温,转移至 50 ml量瓶中;用少量甲醇洗涤残渣及碘瓶2次,洗液并入量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀;精密量取4 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液作为样品溶液。按照处方比例及制备工艺,制备不含氯霉素的阴性样品,同法制备不含氯霉素的空白溶液。精密称取氯霉素对照品102.5 mg,置50 ml容量瓶用中,加甲醇溶解并稀释至刻度,混匀,作为对照品贮备溶液。精密量取贮备溶液1 ml,置25 ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度(含氯霉素0.082 mg/ml),作为对照品溶液。
2.3 专属性试验
分别取对照品溶液、样品溶液和空白溶液按色谱条件进样,色谱图见图1。
2.4 线性关系试验
分别取对照品贮备溶液 0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3 ml,分别置25 ml容量瓶中,加甲醇至刻度,混匀,分别进样20 μl测定,以峰面积(Y)对进样浓度(X)进行线性回归,得方程为:Y=13.954X+125.98,r=0.9957,氯霉素浓度在 57.4~106.6μg/ml范围内与峰面积成良好线性关系。
2.5 精密度实验
分别取浓度为82 μg/ml对照品溶液,连续进样7次,记录面积,RSD为1.58%,仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
取0906144批号样品(含量100.29%)按“2.1”项下制备提取并进样7次,记录峰面积,RSD为1.68%,表明本方法重现性良好。
2.7 回收率试验
按处方分别精密取己烯雌酚、氯霉素和辅料,按工艺规程配制样品软膏(含氯霉素49.84 mg/g),按样品溶液制备方法分别制备样品溶液7份,按测定方法测定含量,检测结果见表1。
表1 回收率检测结果(±s,n=3)
表1 回收率检测结果(±s,n=3)
加入量(mg/ml) 测得量(mg/ml)0.082 8±0.007 6 0.080 1±0.005 7 0.079 4±0.000 9 0.079 2±0.005 7 0.078 8±0.003 1 0.078 4±0.001 3 0.081 5±0.002 8平均回收率(%)RSD(%)0.081 2 0.079 1 0.080 1 0.079 2 0.080 3 0.079 6 0.079 8回收率(%)101.89 101.24 99.24 100.05 98.16 98.54 102.11 100.181.48
2.8 稳定性试验
样品溶液配制完成后, 分别在 1、3、5、7、22、28 h 进样,记录峰面积,RSD为0.97%,结果表明样品28 h内稳定。
2.9 样品检测
按处方和工艺流程配制样品软膏15批次,按样品溶液制备方法分别制备样品溶液,按测定方法测定含量,检测结果见表2。
表2 样品检测结果
由表2可见,最高含量为108.13%,最低含量为92.57%。
3 讨论
笔者曾力图按文献[1-2]报道的方法同时测定氯霉素和己烯雌酚含量,不仅分离效果不佳,而且含量太低致使己烯雌酚峰高太小,噪声较大,无法进行测定。对于氯霉素的检测波长,文献报道的有 241[1-3]、240[4]、280[5]、和 272[6]nm,本文作者配制含氯霉素0.082 mg/ml的甲醇溶液,在220~300 nm波长进行紫外扫描,结果在272 nm处有最大吸收,与文献[6]和2005年版《中国药典》二部氯霉素含量测定项下的检测波长一致。造成差异的原因可能是与其他作者需要同时检测两种成分含量有关。在进行流动相选择时,经过筛选,以方焱等试验使用的甲醇-水(59∶41)较好,因而选择了此流动相。
由样品检测结果可见,本实验氯霉素最高含量108.13%,最低含量92.57%,鉴于制剂实际情况和检测方法刚开始使用,因此,确定软膏中含氯霉素(C11H12Cl2N2O5)应为标示含量的90%~110%。
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