喉咽清口服液中蜕皮甾酮测定法的改进

2011-01-30何选林王群英

中成药 2011年6期

何选林，王群英

(湖南省永州市药品检验所，湖南永州425100)

喉咽清口服液主要由土牛膝、马兰草、车前草、天名精等中药组成，辅料为蔗糖、防腐剂，具有清热解毒、利咽止痛的作用［1］。土牛膝中含有黄酮苷、氨基酸、有机酸、酚类、挥发油及生物碱等成分［2］，《中国药典》2010版一部该品种采用高效液相色谱法测定喉咽清口服液中蜕皮甾酮，该方法提取时杂质太多，影响蜕皮甾酮的分离，导致测定的含量偏低，本实验修改了提取的溶剂，该法简单、快速、结果直观。并通过生产厂家提供的6批样品进行了比较。结果表明改进法准确有效。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱系统1525泵，2996紫外检测器(美国)，Empowers工作站。蜕皮甾酮对照品(中国药品生物制品检定所，批号11638-200402)，喉咽清口服液样品(规格每支10 mL，为某公司生产的6批产品080605、080607、080608、080704、080706、080801);乙腈为色谱纯、重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil-ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以乙腈-水(20 ∶80)为流动相;检测波长为 248 nm;柱温室温，进样量 20 μL。在此条件下［3］67，［4-9］，色谱图见图1，蜕皮甾酮的保留时间为7.8 min，理论塔板数按蜕皮甾酮计算为6 800。

图1 高效液相色谱图

2.2 对照品溶液制备精密称取蜕皮甾酮对照品30 mg，置50 mL的量瓶中，加乙醇适量，振摇使蜕皮甾酮溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液贮备液。

2.3 供试品溶液的制备取本品25 mL，置具塞锥形瓶中，加正丁醇25 mL，超声30 min，放冷后，滤过，用乙醇10 mL分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照溶液的制备精密称取处方中除土牛膝的细粉(约相当于蜕皮甾酮3 mg)，置具塞锥形瓶中，加正丁醇25 mL，超声30 min，放冷后，滤过，用乙醇10 mL分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为阴性对照溶液。

2.5 线性关系考察精密量取对照品溶液贮备液1、2、3、5、10 mL溶液分别置50 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，注入液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，求得回归方程:Y=7 680.2+674 256.4X，r=0.999 96，结果表明，当进样量为 20 μL 时，蜕皮甾酮在12～120 μg/mL质量浓度范围内，呈良好的线性关系。

2.6 精密度考察取2.2项下质量浓度为60 μg/mL的对照品溶液，依法测定，记录连续5次的峰面积，RSD为0.98%。

2.7 重复性试验取同份样品按2.11项测定蜕皮甾酮5次，含蜕皮甾酮质量浓度为62.4 μg/mL，RSD为0.66%;结果表明重复性好。

2.8 稳定性试验取同份样品分别在0、4、8、12、16 h测定蜕皮甾酮，质量浓度为59 μg/mL，RSD为0.61%;结果表明稳定性好。

2.9 阴性对照试验取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按本实验条件进样为20 μL，色谱图见图1，在本实验条件下阴性对照无干扰。

2.10 回收率试验精密称取已测定的同一批样品9份，分别精密加入对照品适量，按2.3项制备样品，依法测定回收率，结果见表1。

表1 样品的回收率测定结果

2.11 样品测定取本品25 mL，置具塞锥形瓶中，加正丁醇25 mL，超声30 min，放冷后，滤过，用乙醇10 mL分数次洗涤容器及残渣，合并滤液和洗液蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加乙醇稀释至刻度，作为供试品溶液。分别吸取供试品溶液与对照品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图见图1B，按外标法以峰面积计算质量浓度与法定方法质量浓度［3］1159比较结果见表2。