LC-MS/MS方法测定中成药麻仁丸中添加伪品大黄的研究

孙爱萍， 张西如， 谷菲菲

(1.河北化工医药职业技术学院机电工程系，河北 石家庄050026;2.河北省药品检验所，河北 石家庄050011)

中成药“麻仁丸”的化学成分为白芍、大黄、厚朴、火麻仁、苦杏仁、枳实。具有泻热通肠，凉血解毒，逐瘀通经的功能。用于实热便秘，积滞腹痛，泻痢不爽，湿热黄疸等症［1］。其中大黄为常用中药，来源于蓼科植物掌叶大黄(R.palmatum L)、唐古特大黄(R.tanguticum)或药用大黄(R.officinale Baill)的干燥根及根茎［2］。正品大黄和伪品大黄同为蓼科植物，含有相同的大黄酸、大黄素、大黄酚、芦荟大黄素、大黄素甲醚［3-5］。正品大黄含有番泻苷A和番泻苷B的泻下成分，而不含土大黄苷。伪品大黄因不含番泻苷A和番泻苷B，含土大黄苷而无泻下作用［6］。土大黄苷具有抗菌、改善微循环、降血脂、降血糖、抗肿瘤、抑制过敏反应、调控机体免疫防御系统、抗血栓以及抗氧化等作用。长期以来大黄药材混乱现象比较严重，伪品大黄充当正品大黄药用的情况常有发生，于是就导致了“病准方对药不灵，成药效果又不佳”的现象发生，加之含大黄的成药标准中存在着未完善的地方，从而不能完全保证用药安全有效。因此，有必要建立灵敏、可靠的分析方法对中成药麻仁丸制剂中掺入的伪品大黄进行鉴定。作者建立了液相色谱及直接电喷雾串联四级杆质谱法［7-10］，可以快速、准确地对麻仁丸中是否含有土大黄苷作出判断，进一步判断是否有用伪品大黄充当正品大黄药用的情况。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC-20AD液相色谱仪-API3200质谱联用仪;赛多利斯BP211D型电子天平。

1.2 试药 土大黄苷对照品(批号794-200103，中国药品生物制品检定所);麻仁丸样品均为市售样品。所用试剂乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

2 色谱条件

2.1 HPLC条件 色谱柱:资生堂 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相:以水-乙腈(45∶55);紫外波长:200～400 nm;柱温:35 ℃;流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

2.2 LC-MS条件

HPLC条件:0.01 mol/L醋酸铵-乙腈(40∶60);流速:1.0 mL/min;进样量:5 μL。

MS条件:电喷雾离子化负离子检测方式(ESI-);质核比范围:100～600;离子源电压:-5 000 V;雾化气:10 L/min(高纯氮气)，加热辅助气:10 L/min(高纯氮气)，气帘气:10 L/min(压缩空气)，离子源温度:500℃ ，锥孔电压:-10 V，去簇电压:-65 V，碰撞能量:-20 V。

3 溶液的配制

3.1 对照品溶液的制备 精密称取土大黄苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含20 μg的溶液，即得。

3.2 供试品溶液的制备 取本品蜜丸适量，剪碎，精密称取4 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，精密量取滤液5 mL，至100 mL的量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm的滤膜过滤，即得。

4 土大黄苷对照品的色谱、光谱及质谱行为

采用负离子检测方式对土大黄苷对照品进行HPLC、MS和MRM分析，保留时间为26 min。土大黄苷的准分子离子［M-H］-峰为m/z 419;对m/z419进行离子扫描，产生的主要碎片离子m/z为257和241，相应的图谱见图1，推测其质谱裂解途径如图2所示。

图1 土大黄苷的一级(A)和二级(B)质谱图

图2 土大黄苷对照品在ESI(-)方式下的质谱裂解

5 供试品溶液的定性检测

在相同的色谱及质谱条件下对麻仁丸的供试品溶液进行HPLC、MS和MS-MS分析，在样品中检测到土大黄苷的准分子离子即m/z 419，对m/z 419进行二级全扫描质谱分析，产生与土大黄苷对照品完全一致的碎片离子，且紫外光谱、保留时间分别与土大黄苷对照品相同。

结合紫外光谱、液相色谱保留时间、准分子离子和二级质谱裂解碎片四方面的信息，可以证明所检查的麻仁丸样品中有土大黄苷存在，既而可以判断麻仁丸中被非法掺入了伪品大黄。

6 讨论

对液质联用的条件进行了优化，结果表明，采用0.01 mol/L醋酸铵-乙腈为流动相离子化好，峰响应值高，色谱峰峰对称，色谱分离结果较为理想。考察了不同离子化模式对分析结果的影响，结果发现，在负离子模式下可获得较好的质谱信号。

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