莱芜地区HBV基因型分布及临床意义*

彭 琳 李 菊 董学广

(1. 莱芜市人民医院检验科，山东 莱芜 271100; 2. 莱芜市口镇中心医院检验科，山东 莱芜 271112)

乙型肝炎病毒(HBV)感染已成为一种严重威胁人类健康的公共卫生问题，全世界约有20亿人曾受或正在经受到HBV感染，其中3.5～4亿人已经成为HBV慢性携带者，这其中的20%左右可能将最终死于与HBV感染相关的肝病。我国是乙型肝炎的高发区，约有病毒感染者1.2亿，约占总人口的10%。HBV感染后的临床过程多种多样，除了宿主的免疫状况、感染方式等，与感染病毒株的基因型种类也关系密切。目前认为，根据HBV全基因核苷酸序列异源性≥8%或者S基因区核苷酸序列异源性≥4%可定为不同的基因型。自1988～2002年已经相继发现了8种HBV基因型A～H[1、2]。研究表明，基因型的分布与地理因素、人种差异有关[3、4]，同时也与肝病活动、预后和治疗的疗效相关[5]，因此，有必要对不同地区的HBV基因型进行流行病学调查研究。但由于目前各地区的检测方法不同，研究的结论不尽相同。本研究采用荧光定量 PCR方法，应用商品化HBV基因分型试剂盒，对莱芜地区的HBV基因型流行情况进行初步调查，以明确本地区HBV基因型的分布情况，并进一步分析其临床意义。

1 材料与方法

1.1研究对象 所选231例HBV感染者，为2008年12月至2010年3月间在泰山医学院附属莱芜医院门诊和住院患者，其中男性134例，女性97例，年龄12～70岁。其中无症状携带者(ASC)45例；慢性乙型肝炎(CHB)68例；乙型肝炎肝硬化(HLC)65例，原发性肝细胞癌(HCC)53例。所选病例均排除甲、丙、丁、戊等其他类型肝炎病毒感染及其他可导致肝脏病变的疾病，诊断均符合2000年第十次全国 (西安)病毒性肝炎会议修订的病毒性肝炎诊断标准[6]。抽取患者静脉血3ml，离心后取血清，-20℃冰箱冻存备用。采血同时收集临床资料。

1.2血清病毒学标记物检测 采用ELISA法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-Hbe、抗-HBc，试剂由英科新创(厦门)科技有限公司提供，操作按照试剂盒说明书进行。采用荧光定量PCR方法检测血清HBV-DNA拷贝数，以截止值≥1×103拷贝数/ml为阳性。HBV-DNA PCR检测试剂盒由中山大学达安基因股份有限公司提供。

1.3基因型的检测 HBV基因分型测定试剂盒由上海复星医学科技发展有限公司提供，应用ABI7500 荧光定量PCR仪 (美国ABI公司)，检测所选血清HBV基因型，操作严格按试剂盒说明书进行。该试剂盒采用特异性荧光实时PCR方法进行HBV基因分型，FAM波长检测B型乙型肝炎病毒，JOE波长检测C型肝炎病毒。使用双波长试剂，单个反应管配液，加B型、C型两种探针，结果判读见表1。

表1 双波长HBV分型试剂结果判读

1.4统计学方法 应用χ2检验分析数据，P≤0.05为有统计学意义。

2 结 果

45例无症状携带者中37例HBV-DNA定量阳性(82.22%)，其他3种HBV感染者HBV-DNA定量全部阳性。对HBV-DNA阳性的216例标本进行HBV基因分型，其中B基因型39例(18.06%), C基因型179例(82.87%)，B+C混合基因型5例(2.31%)，未检出非B非C型。其中ASC患者中以B型为主(64.86%)；而其余三种感染者中以C型基因居多：CHB患者中C型为82.35%，HLC患者中C型为90.77%，HCC患者中C型为98.11%。各类HBV感染者具体HBV基因型类别见表2。

表2 莱芜地区231例各类HBV-DNA阳性者基因型分布

3 讨 论

乙型病毒性肝炎是一种世界性的传染病，特别是在亚洲、非洲等发展中国家广为流行。随着HBV分子病毒学研究的不断深入，对HBV基因型(即HBV核苷酸序列的差异)的研究日益受到重视，众多研究表明，HBV基因型与临床表现、预后判断、治疗应答均有一定关系。通过对不同地区乙肝病毒基因型的流行特点进行动态研究可以跟踪乙肝病毒的流行趋势、耐药特点及其变异情况，并可为乙肝病毒的防治策略的更新、新药研制及疫苗研发提供及时可靠的实验依据。HBV基因型呈一定的地理区域性分布[7]。其中A型主要分布于欧洲北、西部和非洲撒哈拉沙漠地带；B和C主要分布于亚洲东、南部[8、9]；D型分布最广，是从地中海、近东直到中亚和印度的优势基因型，也发现于东亚、东南亚某些少数民族：E型主要分布于非洲撒哈拉沙漠地带；F型分布于美国土著人、波利尼西亚和中美洲；G型发现于法国和美国；H型分布于尼加拉瓜、墨西哥和美国。我国 HBV基因型主要为B和C型, 也存在少量的A和D型以及这些基因型的混合感染，目前研究大体上认为我国北方以C型为主，南方以B型为主，但不同地区也存在差异。D型仅见于西部及少数民族地区，A型较为罕见。

莱芜属于北方地区，本地区乙肝病毒基因型的流行特点尚未有报道。本研究采用荧光定量PCR方法对本地区乙肝病毒基因型进行了初步分析，结果表明，216例HBV-DNA阳性感染者HBV基因分型全部是B型、C型或者B/C混合型，未检出其他非B非C基因型。其中B基因型39例(18.06%), C基因型179例(82.87%)，B+C混合基因型5例(2.31%)，B+C混合基因型5例(2.31%)，结果与国内文献报道[10]基本一致。由于检测方法，病例选择的不同也会对检测结果有一定的影响。对全国不同地区病例采用同一选择标准、同一检测方法，会得出更为可靠的结论。

国内外众多研究发现，HBV基因型与临床表现、预后、治疗应答均有一定关系，不同基因型具有不同的致病性。葛宪民和台湾学者Kao等[11]的研究结果提示，随着疾病严重程度的增加，C型所占的比例升高，而B型所占比例降低，C型对肝脏的损伤比B型更严重，更易发展成为肝硬化。本研究发现HBV基因型与疾病的活动性可能存在一定的关系，慢性乙型肝炎重度、肝硬化、原发性肝癌患者中C基因型比例明显高于慢性HBV携带者，B基因型则在慢性HBV携带者比例较高。 由此我们推测C基因型HBV感染者较B基因型更易发展成肝硬化、原发性肝癌。

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