1 206例呼吸道感染儿童肺炎支原体DNA检测结果分析

钟伟明，郭 静，陈 俏

（广西贵港市妇幼保健院检验科，广西贵港 537100）

肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是小儿呼吸道感染的重要病原体之一，除呼吸道感染（咽炎、支气管炎、肺炎）外，MP尚可通过血行播散或免疫机制引起脑炎、肾炎、心肌炎等多种肺外并发症[1-2]，对儿童健康有较大危害性。近年来MP感染的发病率呈上升趋势[3]。多项研究显示，10%～30%的社区获得性肺炎病例由MP引起[4]，而儿童社区获得性肺炎中，有近40%由MP引起。肺炎支原体性肺炎（MPP）通常表现为一类非典型的肺炎，常见症状：头痛、肌痛、咽喉炎、干咳等，白细胞计数正常或轻度升高。但其症状、体征及胸部X线缺乏特异性，确诊需依靠病原学检查。

以往认为MPP为自限性疾病，临床经过和预后较好。但是近年发现部分MPP患儿病程长、症状重、甚至会遗留肺部损害和肺外表现[5]，因此，MPP早期诊断及治疗越来越来受到重视。本研究采用FQ-PCR对1 206例呼吸道感染患儿的咽拭子标本检测MP-DNA，为临床诊断MPP提供准确快速的诊断依据。

1 材料与方法

1.1 对象

2008年2月～2009年3月我院儿科收治1 206例呼吸道感染患儿中，男698例，女508例；入院年龄1月龄～12岁；病程2～20 d。经临床检查，均为呼吸道感染，有发热、咳嗽等症状，已排除其他病因。

1.2 标本采集

用湿润了的无菌生理盐水咽拭子，采集患儿上腭悬雍后部分泌物，置于干燥试管中，密封立即送检。

1.3 试剂与方法

仪器为中山大学达安基因股份公司DA7600实时荧光定量PCR扩增仪，试剂为中山大学达安基因股份公司生产的肺炎支原体核酸扩增荧光定量检测试剂盒，严格按试剂说明书操作。

1.4 统计学方法

所有数据分析采用SPSS 11.0统计软件包处理，计数资料的比较采用χ2检验。

2 结果

咽拭子MP-DNA的检测结果见表1。

表1 不同年龄组儿童MP感染的检出率（例）Tab.1 Detection rate of MP infection in different age children(case)

2.1 MP总检出率

1 206例呼吸道感染患儿中，MP-DNA阳性435例，总检出率为36.0%。

2.2 不同性别患儿MP检出率

受检男性患儿698例，检出阳性254例，检出率为36.4%；受检女性患儿508例，检出阳性181例，检出率为35.6%。男女性别之间MP检出率差异无统计学意义（χ2=0.07，P＞0.05）。

2.3 不同年龄组儿童MP感染的检出率

1 206例呼吸道感染的患儿中MP-DNA总阳性数为435例，其中小于1岁141例，1～3岁198例，4～6岁60例，7～14岁36例，阳性者主要为1～3岁的患儿。各年龄组之间检出率比较差异无统计学意义（χ2=4.33，P＞0.05）。

3 讨论

支原体是一种介于病毒和细菌之间能独立生活的最小微生物，广泛存在于自然界中。MP是对人类有致病性的主要支原体，主要通过呼吸道飞沫传播，是各年龄段儿童急性呼吸道感染的常见病原。近年来，肺炎支原体感染明显上升，不仅引起严重的肺炎，还引起严重的并发症或持久的后遗症，严重的肺炎也可导致死亡。MPP一年四季均有发生，并可在学校、幼儿园等人群密集场所暴发流行，学龄儿童及婴幼儿普遍易感。

本研究使用MP荧光定量PCR进行检测，男性患儿检出率为36.4%，女性患儿为35.6%；男女之间MP检出率差异无统计学意义。MP总检出率为36.0%，与方红等[6]的报道基本一致。

既往认为MP感染多见于学龄儿童及青少年，但近年来，报道婴幼儿感染病例逐渐增多。本文中小于1岁组的检出率为35.8%，1～3岁组的检出率为37.9%，显示婴幼儿发病率有增高趋势，呈现低龄化趋势[7]。其原因可能包括：①肺炎支原体感染年龄前移；②实验室检测技术进步；③临床医师对肺炎支原体感染的重视程度及诊断意识不断提高。这两年龄组MP感染发病人数最多，MP检出率也最高，分析其原因是婴幼儿免疫功能不健全，易被各种病原体感染。各年龄组MP-DNA检出率比较，差异无统计学意义，以1～3岁组最高，为37.9%。

肺炎支原体感染的临床表现、肺部X线表现均不具特异性，故本病的诊断主要根据实验室检查结果。实验室诊断方法有支原体分离培养、血冷凝集实验、支原体特异性抗体检测及PCR等方法。分离培养MP对诊断和鉴别诊断有决定性意义，但是其要求高且需要时间长，而且检出率低，难以被临床接受，因而限制了其在临床的推广应用。以往临床依赖血冷凝集试验进行诊断，但病程在1周以上才会有阳性结果，而且与其他感染有一定的交叉反应，无法满足早期诊断和早期治疗的目的。抗MP-IgM是机体受支原体感染最早出现的特异性抗体，它于发病后1周左右可检出，10～20 d达高峰，12～16周转阴，易受以下因素影响。①患儿年龄：因婴幼儿免疫系统发育尚未完全，在MP感染后抗体生成不足，影响检出率；②病程：MP-IgM发病后1周左右才开始上升，对于小于1周病程的易造成漏诊、误诊；③免疫功能状态：对于免疫低下患儿，其免疫反应低，IgM升高幅度很低，抗MPIgM检出率低。因此，MP-IgM存在一定的局限性[8]。

PCR技术用于病原体的检测，其敏感性、稳定性是以往其他检测技术无法比拟的，但存在基因高效扩增造成增产物污染而导致假阳性的可能。1995年出现的以标记特异性荧光探针为特点的荧光定量PCR技术完全闭管式操作，大大减少了扩增物污染的机会，提高了检测特异性，并可对扩增物进行精确定量[9]。FQ-PCR技术巧妙地利用了PCR的DNA高效扩增、探针技术高特异性和光谱技术的敏感性及定量分析的优点，解决了以上问题，可作为肺炎支原体感染的早期诊断的有效方法。

本研究结果表明，采用FQ-PCR检测MP-DNA法既有利于早期诊断，又能提高诊断的准确性。肺炎支原体感染率较高，对小儿呼吸道感染患者进行MP-DNA检测，有利于支原体肺炎的早期诊断及合理治疗。

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