过氧化物酶体增殖物激活受体-γ和血管紧张素Ⅱ受体在慢性胰腺炎组织中的表达及意义

黄玲 高军 满晓华 龚燕芳 李兆申

·论著·

过氧化物酶体增殖物激活受体-γ和血管紧张素Ⅱ受体在慢性胰腺炎组织中的表达及意义

黄玲 高军 满晓华 龚燕芳 李兆申

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)和血管紧张素Ⅱ受体(AT1R和AT2R)在慢性胰腺炎(CP)组织中的表达，探讨其意义。方法收集2006年4月至2009年2月经病理确诊的CP 24例，以12例正常胰腺组织作为对照。采用免疫组化方法检测胰腺组织PPAR-γ和AT1R、AT2R的表达。结果正常胰腺组织PPAR-γ和AT1R蛋白多呈阴性表达，阳性分值分别为0.33±0.49和0.42±0.51；AT2R蛋白在腺泡、胰岛细胞可呈阳性或弱阳性表达，在导管细胞质呈弱阳性表达,分值为2.33±1.37。CP组织PPAR-γ、AT1R和AT2R在腺泡、导管、间质及胰岛细胞中均可有不同程度表达，阳性分值分别为3.28±2.46、4.36±2.80和4.61±2.89，均显著高于正常对照组(P值分别为lt;0.01、lt;0.01、lt;0.05)。结论PPAR-γ和AT1R、AT12R在CP组织中均呈高表达，这可能是CP药物治疗的潜在靶点。

胰腺炎，慢性； 过氧化物酶体增殖物激活受体； 血管紧张素受体

过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)属核激素受体，包括PPAR-α、PPAR-β、PPAR-δ和PPAR-γ，其中PPAR-γ研究最为广泛，它在调节炎症应答、脂质合成、糖代谢及各种细胞的分化、增殖和凋亡途径中发挥重要作用[1-2]。胰腺局部的肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，RAS)在胰腺的生理和病理生理过程中发挥重要作用，其生物功能是通过血管紧张素Ⅱ1型(angiotensin Ⅱ type 1 receptor，AT1R)和2型受体(angiotensin Ⅱ type 2 receptor，AT2R)来介导的，以AT1R占主导地位[3]。激活的血管紧张素Ⅱ(ATⅡ)与AT1结合介导氧化应激、诱导炎症反应、细胞凋亡和组织纤维化[4-5]。本文应用免疫组化方法检测慢性胰腺炎(CP)胰腺组织PPAR-γ与AT1R、AT2R蛋白的表达，探讨其临床意义。

材料与方法

一、临床病例

收集我院2006年4月至2009年2月经外科手术及病理确诊的CP患者24例，男性16例，女性8例，年龄32～68岁，平均50岁。其中伴胰腺导管内乳头状黏液瘤1例、假性囊肿4例、脓肿形成1例、胰管结石4例、左侧门脉高压症1例、糖尿病2例。既往有急性胰腺炎发作病史8例，嗜酒者5例，嗜烟酒者2例。取12例正常胰腺组织作为对照。

二、胰腺组织病理检查和胶原含量分析

所有标本常规切片，HE染色。由我院病理科医师阅片。胶原采用苦味酸-天狼星红染色，光镜下为红染。每张切片随机取3个视野，应用MIQAS医学图像定量分析系统软件(上海求为生物科技有限公司)计算阳性红染面积的百分率，即胶原含量。

三、PPAR-γ、AT1R、AT2R和α-SMA蛋白检测

采用Envision免疫组织化学法，按试剂盒(美国DAKO公司)说明书操作。以PBS作为阴性对照，以胰腺癌组织作为阳性对照。胞质或胞核呈棕黄色为阳性染色。在高倍显微镜(×400)下随机取3个视野，计算阳性细胞百分数及染色强度。着色细胞数lt;30%为1分，30%～60%为2分，gt;60%为3分；无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分，两者乘积为总积分。

四、统计学处理

结 果

一、胰腺组织病理学改变及胶原含量

对照组显示正常的胰腺组织结构。所有CP患者的胰腺组织均符合CP病理组织学特征[6]，包括腺泡萎缩、坏死，小叶内和(或)小叶间纤维化，继发胰管改变，腺泡与胰岛分离，炎症细胞浸润等。正常胰腺组织中，仅血管、胰管周围可见红染区(图1a)，胶原含量为(23.83±3.71)%；CP的胰腺组织小叶内和(或)小叶间出现阳性染色(图1b)，胶原含量为(70.50±7.69)%。两者相差显著(Plt;0.05)。

二、α-SMA、PPAR-γ、AT1R和AT2R蛋白表达

正常胰腺组织仅血管平滑肌细胞呈α-SMA阳性(图1c)，分值为0.75±0.45；CP组织在血管壁、小叶内和(或)小叶周围呈α-SMA阳性(图1d)，分值为4.61±3.01，显著高于正常组(Plt;0.01)。

正常胰腺组织PPAR-γ蛋白多呈阴性表达，偶见腺泡细胞核、胰岛细胞质弱阳性表达(图1e)，分值为0.33±0.49；CP组织的腺泡和(或)导管细胞核、间质细胞核阳性染色，胞质染色少见，胰岛细胞核或细胞质偶见(图1f)，分值为3.28±2.46，显著高于正常组(Plt;0.01)。

正常胰腺组织AT1R蛋白多呈阴性表达，偶见腺泡、胰岛细胞质弱阳性表达(图1g)，分值为0.42±0.51；CP组织腺泡、导管、胰岛细胞质阳性染色，间质细胞质偶见(图1 h)，分值为4.36±2.80，显著高于对照组(Plt;0.01)。

正常胰腺组织AT2R蛋白在腺泡、胰岛细胞质可呈阳性或弱阳性表达，在导管细胞质弱阳性表达(图1i),分值为2.33±1.37；CP组织腺泡、导管、胰岛细胞质呈阳性或强阳性染色(图1j)，分值为4.61±2.89，显著高于正常组(Plt;0.05)。

讨 论

在不同的炎症反应中，PPAR-γ表达各异，如在人类的溃疡性结肠炎和肝硬化病变中呈低表达，而在动脉粥样硬化病变中呈高表达[6]。Nakajima等[7]报道，小鼠肠道缺血-再灌注损伤时肠道组织存在内源性PPAR-γ途径，内源性配体激活PPAR-γ为肠道缺血-再灌注损伤提供保护作用，包括直接受累的组织和远处脏器。而严重的内毒素血症，PPAR-γ的保护作用不能阻止肝脏损伤的发生[8]。体外实验证实，合成的PPAR-γ配体的亲和力在nmol范围，大多数内源性配体在μmol范围，说明合成的PPAR-γ配体具有较高的亲和力[9]。

图1a、c、e、g、i分别为正常胰腺组织天狼星红染色及α-SMA、PPAR-γ、AT1R、AT2R的表达(×200)；b、d、f、h、j分别为CP组织天狼星红染色及α-SMA、PPAR-γ、AT1R、AT2R的表达(×200)

ATⅡ参与心、肝、肾等脏器的纤维化形成过程。在CP 动物模型中，ATⅡ介导TGF-β1的产生和胰腺星状细胞(PSCs)激活、增殖，促进胶原合成和胰腺组织纤维化进展[10]。Yamada等[11]研究显示，在Wistar Bonn/Kobori大鼠自发性CP模型中，AT1R拮抗剂坎地沙坦通过抑制TGF-β1的过表达，阻止PSCs的激活，改善CP的炎症和纤维化程度。AT1R拮抗剂替米沙坦具有部分激动PPAR-γ的特性。Imayama等在体外研究发现，通过激活PPAR-γ，能抑制AT1R的表达，这种对ATⅡ功能的双重抑制，即直接阻断AT1R以及激活PPAR-γ、下调AT1R有助于更完全地抑制肾素-血管紧张素系统。

本实验结果显示，CP的胰腺组织中，腺泡坏死、萎缩，胰腺实质由大量纤维组织取代，并伴胰管结构的异常。这些纤维组织内可见富含α-SMA蛋白的PSCs。与正常对照组比较，CP组织中PPAR-γ、AT1R和AT2R蛋白均呈高表达，提示这些蛋白参与胰腺纤维化的过程。

AT2R在胚胎发育期呈高表达，在正常成人的心血管系统呈低表达。在高血压、动脉粥样硬化形成、心肌梗死等病理状态下，AT2R的扩张血管作用被增强，在心血管重塑和炎症过程中，AT2R能够刺激心肌和血管平滑肌生长、增殖和凋亡，但仍存在争议。目前，AT2R确切的扩血管作用可能有助于改善胰腺血流，以及减少胶原沉积作用，但是否能够缓解CP病情进展，有待于进一步研究。

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2010-02-01)

(本文编辑：屠振兴)

Expressionofperoxisomeproliferator-activatedreceptor-γandangiotensinⅡreceptorproteininchronicpancreatitistissue

HUANGLing,GAOJun,MANXiao-Hua,GONGYan-Fang,LIZhao-shen.

DepartmentofGastroenterology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

LIZhao-shen,Email:zhsli@81890.net

ObjectiveTo investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPAR-γ) and angiotensin receptor (AT2R) in chronic pancreatitis tissue.MethodsBetween April 2006 and February 2009, 24 patients were pathologically diagnosed as chronic pancreatitis were enrolled and 12 samples of normal pancreatic tissues were treated as controls. Immunohistochemical staining was used to detect PPAR-γ and AT1R, AT2R expression in pancreatic tissues.ResultsPPAR-γ and AT1R were mostly negatively expressed in normal pancreatic tissues, the positive scores were 0.33±0.49 and 0.42±0.51, respectively, while AT2R were weakly positively or negatively expressed in acinus and islet cell, and it was weakly positively expressed in ductal epithelial cells, the positive score was 2.33±1.37. In chronic pancreatitis tissue, PPAR-γ, AT1R and AT2R were positively expressed in acinus, ductal epithelial cells, and islet cell, the positive scores were 3.28±2.46, 4.36±2.80 and 4.61±2.89, which were significantly higher than those in the normal group (Plt;0.01,Plt;0.01,Plt;0.05).ConclusionsPPAR-γ, AT1R and AT2R were positively expressed in chronic pancreatitis tissue, and they may be the treatment target of chronic pancreatitis.

Pancreatitis,chronic； Peroxisome proliferator-activated receptors； Angiotensin receptors

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.02.013

200433 上海，第二军医大学长海医院消化内科

李兆申，Email：zhsli@81890.net