高效液相色谱法测定当归养血丸中阿魏酸含量

2010-11-21贺云彪刘军伍良知

中国现代药物应用 2010年16期

贺云彪刘军伍良知

当归养血丸由当归、白芍、地黄和黄芪等10味药组成，收载于《中国药典2005年版版一部》［1］。具益气养血调经功效，临床用于治疗气血两虚、月经不调等病症，疗效显著。法定标准中只收载了显微鉴别项及当归、丹皮的薄层鉴别，无含量测定监控指标，不利于生产和使用相关部门控制其药品质量。本实验采用高效液相色谱法测定阿魏酸含量，并进行了方法学研究，建立阿魏酸含量限度，以便更好地控制该产品质量。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪(美国HP公司)，TU-1900紫外可见光分光光度计(北京普析通用仪器公司)，Hypersil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)(大连伊利特科学仪器有限公司)。药材购自湖南省药材有限责任公司;阿魏酸对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号:110773-200612，供含量测定用);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。当归养血丸(自制，批号分别为:090820，090825，090830，091008，091011，091014)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇-1%冰乙酸溶液(25:75);检测波长为320 nm;柱温:25℃;流速:1.0 ml/min。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。

2.2 检测波长的选择取阿魏酸对照品，加70%甲醇制成每约含10 μg/ml的溶液，以70%甲醇为空白，在400～200 nm进行扫描，结果表明阿魏酸的最大吸收峰为320 nm，且干扰少，故选择320 nm波长为检测波长。紫外扫描图谱见图1。

图1 阿魏酸紫外扫描图

2.3 供试品溶液制备方法的选择

2.3.1 取本品约5 g，精密称定，加入硅藻土5 g，研细，置索氏提取器中，加入70%甲醇100 ml，提取5 h，提取液减压浓缩至约2 ml，残渣用流动相溶解并转移至10 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。

2.3.2 取本品约5 g，精密称定，加入硅藻土5 g，研细，置索氏提取器中，加入乙酸乙酯100 ml，提取5 h，提取液减压浓缩至约2 ml，残留物用流动相溶解并转移至10 ml量瓶中，加流动相至刻度，摇匀。结果见表1。

表1 提取方法考察结果

结果表明用70%甲醇索氏提取的含量比用乙酸乙酯索氏提取高，故选择70%甲醇索氏提取的作为本品的提取方法。

2.4 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成12 μg/ml的溶液，即得。

2.5 干扰试验取阴性对照样品(缺当归)照供试品制备方法制备阴性样品溶液。取阿魏酸对照品溶液、样品溶液及阴性样品溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，检测，记录色谱图，结果表明阴性对照对本品的测定无干扰。结果见图2。

图1 阴性样品(A)、对照品(B)和供试品(C)色谱图1.阿魏酸

2.6 线性关系考查精密吸取浓度为12 μg/ml的阿魏酸对照品溶液 2.5、5、10、15、20、40 μl注入液相色谱仪，记录其峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为:Y=38485 x+567.34，r=0.999 7。结果表明，阿魏酸在0.030～0.480 μg范围内具有良好的线性关系。

2.7 精密度试验精密吸取同一供试品溶液10 μl，连续进样6次，测定峰面积，其峰面积RSD为0.98%。

2.8 稳定性试验分别精密吸取同一供试品溶液10 μl，每隔4 h进样测定一次，共测定6次。结果峰面积RSD为0.64%，表明阿魏酸在20 h内稳定。

2.9 重复性试验取同一批号样品5份，按“2.3”项下制得供试品溶液并测定阿魏酸含量，结果平均含量为0.052 mg/g，RSD 为1.64%。

2.10 回收率试验取已知含量为0.052 mg/g(批号:090820)的样品约2.5 g，共6份，精密称定，分别精密加入阿魏酸对照品溶液(0.12 mg/g)1.0 ml，按含量测定项下的方法测定含量，计算回收率。结果阿魏酸的平均回收率为98.90%(n=6)，RSD 为1.97%，见表2。