HPLC测定谷维素双维B片中维生素B1和维生素B6的含量

2010-11-17李莎

中国生化药物杂志 2010年3期

李莎

(贵州省毕节地区药品检验所,贵州毕节 551700)

谷维素双维 B片是由谷维素、维生素B1、维生素B6组成的复方制剂,具有强化神经系统功能、促进机体代谢和营养的作用,为植物神经调节首选药,在临床具有广泛的应用。谷维素双维 B片为国家药品标准化学药品地方标准上升国家标准第八册收载的品种[1],其维生素B1含量测定方法为重量法,维生素B6为紫外分光光度法,这些方法操作繁琐且误差较大。本文参考相关文献[2-5],研究了采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定维生素B1和维生素B6含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100 Serise高效液相色谱仪;Mettler AE-240电子分析天平;日本岛津 UV-2401型紫外分光光度计。

1.2 试药

维生素B1对照品(批号 100390-200502)、维生素B6对照品(批号 100116-200502)(中国药品生物制品检定所);谷维素双维B片(浙江贝达药业有限公司,批号:090112;北京万辉双鹤药业有限责任公司,批号:081106;沈阳管城制药有限责任公司,批号:090101。规格均为:谷维素10mg,维生素B65mg,维生素B12mg);乙腈为色谱纯;庚烷磺酸钠、三乙胺、冰醋酸均为分析纯;水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验

色谱条件:大连依利特 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相 :乙腈 -庚烷磺酸钠溶液(庚烷磺酸钠 0.32 g,三乙胺 2mL,冰醋酸 10mL,加水至1 000mL)(10∶90);检测波长280 nm;流速:1.0mL/min;进样量 10μL;柱温 35℃。

2.2 溶液的配制及色谱图

2.2.1 对照品溶液精密称取105℃干燥至恒重的维生素B1对照品 40.44mg和维生素B6对照品101.56mg,置同一 200mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品贮备液,维生素B1和维生素B6的浓度分别为202.2和507.8μg/mL。

取对照品贮备液1mL,置10mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液,维生素B1和维生素B6的浓度分别为20.22和50.78 μg/mL。精密量取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见图1A。

2.2.2 供试品溶液取本品 20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素B12mg)置100mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,作为供试品溶液。精密量取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见图1B。

2.2.3 空白辅料溶液按处方(谷维素10.0 g、维生素B12.0 g、维生素B65.0 g、淀粉 50 g、低取代羟丙纤维素24 g、羧甲基淀粉钠 7.5 g、微晶纤维素20 g、硬脂酸镁 2.5 g、8%淀粉浆适量制成1 000片)称取除维生素B1和维生素B6外的各种辅料及谷维素适量,混匀,称取相当于1片的量,置100mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,即得。取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,结果见图1C。可见,该溶液在维生素B1和维生素B6的保留时间处无吸收峰,辅料及谷维素对样品测定无干扰。

2.3 标准曲线的制备

精密量取对照品贮备液1,2,3,4,5,8,10,15,20mL,分别置50mL量瓶中,用流动相稀释至刻度。每种浓度重复进样 4次,测定峰面积,以峰面积(Y)为纵坐标,进样量(X,μg/mL)为横坐标,进行线性回归,得回归方程,维生素B1:Y=8.344 9X-2.118 4,r=0.999 9;维生素B6:Y=15.359 2 X-0.115 2,r=0.999 9。结果表明 ,维生素B1在4.04～80.00 μg/mL,维生素B6在10.16～203.12μg/mL范围内呈线性关系。

图1 对照品溶液(A)、供试品溶液(B)及空白辅料溶液(C)的HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of standard solution(A),sample solution(B)and blank solution(C)

2.4 精密度试验

精密量取供试品溶液,连续进样 8次,记录色谱图。维生素B1峰面积RSD为0.15%(n=8),维生素B6峰面积 RSD为0.09%(n=8),表明精密度良好。

2.5 重复性实验

取同一批号(090112)样品 6份,分别测定含量,结果维生素B1的含量RSD为0.24%(n=6),维生素B6的含量RSD为0.40%(n=6),表明本法重复性较好,方法准确可靠。

2.6 稳定性试验

取2.5项下的溶液室温放置0,4,8,12 h后分别进样测试,记录色谱图。结果维生素B1峰面积RSD为0.27%,维生素B6峰面积 RSD为0.28%,样品溶液至少在12 h内稳定。

2.7 加样回收率试验

取本品 20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素B12mg)置100mL量瓶中,共称9份。其中3份分别加入对照品贮备液6mL,3份分别加入对照品贮备液10mL,3份分别加入对照品贮备液14mL。加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,分别精密量取续滤液5mL,置10mL量瓶中,加流动相稀释至刻度,精密量取10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,计算含量,并求回收率,结果见表1～2。

表1 加样回收率试验测定结果(维生素B1)Tab.1 Results of recovery tests(Vitamin B1)

表2 加样回收率试验测定结果(维生素B6)Tab.2 Results of recovery tests(Vitamin B6)

2.8 样品的测定

取本品 20片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素B12mg)置100mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过,精密量取续滤液10μL注入液相色谱仪,记录色谱图,用外标法以峰面积计算即得。同时采用文献[1]方法测定维生素B1和维生素B6含量,结果见表3～4。

表3 维生素B1含量测定结果(n=3)Tab.3 Results of determination of Vitamin B1(n=3)

3 讨论

3.1 供试品溶液制备方法的选择

表4 维生素B6含量测定结果(n=3)Tab.3 Results of determination of Vitamin B6(n=3)

在制备供试品溶液时,曾采用超声处理和溶剂直接溶解两种方法,经过比较,两种提取方法测定结果无明显差异。由于溶剂直接溶解法操作比较简便,故本文中采用此法。

3.2 检测波长的选择

经对维生素B1和维生素B6两种对照品溶液分别在200～400 nm波长内进行扫描,发现维生素B1在234和264 nm波长处有最大吸收,维生素B6在291和330 nm波长处有最大吸收,为兼顾两者的灵敏度,考虑到两者均在280 nm波长处有较大吸收,在此波长下,两种维生素均有良好的峰形,故选择280 nm作为检测波长。