小白菊内酯对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响

沈三英,蔡怡芳,卢桥发

(1.武汉市普爱医院呼吸内科,湖北 武汉 430034;2.湖北省阳新县第三医院,湖北 阳新 435000)

近年研究表明 ,转化生长因子-β1(TGF-β1)在肺纤维化进程中起重要作用,其中关键环节是能诱导成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,分泌多种细胞因子,导致大量细胞外基质的沉积[1]。核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)通过调控多种因子的基因表达而调控肺纤维化的进程[2]。本研究观察NF-κB抑制剂小白菊内酯(Parthenolide,PNT)对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞转分化的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

健康清洁级雄性 SD大鼠由武汉大学医学部实验动物中心提供,体重 180～220 g,合格证号:SYXK(鄂)2006-0017。

RPMI 1640培养基、小牛血清(美国 Gibco公司);TGF-β1(美国 Peprotech公司 ),α-SMA单抗(北京中山公司),胰蛋白酶(美国 Ameresco公司)。

PNT(美国 Sigma公司),以DMSO溶液配成100 mmol/L并保存于30℃,临用时配成20nmol/L的终浓度[3]。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养气管内一次性滴注博莱霉素5mg/kg后14d,处死大鼠,低温下取出肺脏,采用组织块法原代培养肺成纤维细胞,传代纯化细胞,第4代成纤维细胞用于实验。

1.2.2 细胞分组细胞分成对照组、TGF-β1组、低剂量 PNT组和高剂量 PNT组。将第4代成纤维细胞以1×104的浓度接种于24孔培养板内的盖玻片上,待细胞均匀贴附后,分别加药。对照组:更换培养基;TGF-β1组:加含10 μg/L TGF-β1的培养基 ;低剂量 PNT组:分别加含10μg/L TGF-β1和20 μmol/L PNT的培养基;高剂量 PNT组:分别加含10 μg/L TGF-β1和50 μmol/L PNT的培养基。

1.2.3 免疫细胞化学染色法检测平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscle actin,α-SMA) 计数细胞爬片α-SMA免疫阳性细胞,运用多视野参数统计模块对结果进行统计分析,获得平均积分吸光度值。

1.3 统计学处理

2 结 果

结果见表1、图1。TGF-β1组α-SMA阳性率和平均吸光度值均明显高于对照组,PNT能部分拮抗TGF-β1的作用。

表1 α-SMA阳性细胞百分率和平均积分吸光度值比较

图1 低 PNT组α-SMA免疫细胞化学染色阳性细胞(×200)

3 讨 论

在肺纤维化进程中,NF-κB的过度激活是引起炎症反应及炎症损伤的关键因素,可促进多种促炎因子的释放而加重肺纤维化。其中,TGF-β1是一种重要的促炎细胞因子,是诱导肺成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞的标志性蛋白α-SMA的最重要的细胞因子。PNT是从草本类植物艾菊中提取出来的一种倍半萜稀内酯化合物,近年来被证实是NF-κB的一种特异性抑制剂[4]。

本研究选择 PNT抑制成纤维细胞的NF-κB激活,观察其对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞表达 α-SMA的影响。结果显示,TGF-β1组的阳性细胞百分率(53.5±7.6)%和平均积分吸光度值(36.4±4.9)均明显高于对照组(P＜0.05),证实TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞表达 α-SMA。低剂量 PNT组的阳性细胞百分率和平均积分吸光度值低于TGF-β1,但仍高于对照组;高剂量 PNT组的阳性细胞百分率和平均积分吸光度值与TGF-β1组无显著差异,提示 20μmol/L PNT能部分拮抗、50 μmol/L PNT可完全拮抗 TGF-β1的诱导作用。

[1]雷丰丰,赵健雄,王学习,等.红芪总多糖对大鼠肺纤维化及其转化生长因子 β1-干预的实验观察[J].中药材,2008,31(6):873-877.

[2]林箐,倪莲芳,任雅丽,等.PPARγ和NF-κB在肺纤维化中的表达与意义[J].北京大学学报:医学版,2009,41(5):545-547.

[3]汤霞靖,姚克,叶盼盼,等.小白菊内酯对氧化应激诱导人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用[J].眼科研究,2007,25(11):854-857.

[4]吴雪梅,刘霞,王琛,等.核因子-κB特异性抑制剂小白菊内酯在大鼠心肌组织的药效时间[J].中国生化药物杂志,2009,30(6):365-367.