工艺控制对复方丹参片保护麻醉犬心肌梗死的影响△

黄琳，林青，肖晓丽，李楚源

（广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东 广州 510515）

药理研究

工艺控制对复方丹参片保护麻醉犬心肌梗死的影响△

黄琳，林青*，肖晓丽，李楚源

（广州白云山和记黄埔中药有限公司，广东 广州 510515）

目的：控制工艺条件制备了有效成分含量不同的复方丹参片，观察其对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死的保护作用。方法：采用麻醉犬冠脉结扎导致心肌梗死的方法造模，观察给药前后的影响。结果：复方丹参片工艺A组、工艺B组能降低冠脉结扎所致心肌梗死麻醉犬的HR和心肌耗氧量，复方丹参片工艺B组能降低冠脉结扎所致心肌梗死麻醉犬的DAP、MAP，抑制冠脉结扎所致的动静脉氧差增加。结论：工艺参数的调整影响复方丹参片有效成分的含量，有效成分达到一定量时，可明显缓解心肌缺血症状。

复方丹参片；麻醉犬；心肌缺血

复方丹参片主要由丹参、三七、冰片3味药组成。其中丹参为君药，三七为臣药，冰片为佐使药，具有活血化瘀、理气止痛的功能，用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者。本文通过建立麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的动物模型，研究工艺相同、调整工艺参数制备的复方丹参片（有效成分含量有差异）抗心肌缺血的作用效果。

1 材料

1.1 药物与试剂

丹参（Radix et Rhizoma Salviae Miltiorrhizae）批号0601002、三七粉（Radix et Rhizoma Notoginseng）批号C6C001、冰片（Borneolum Syntheticum）批号0604007，所有供试品药粉由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供。每克相当于丹参原生药0.95g及三七生药0.3g。为实验统一给药剂量，稀释为人用量4.25g·d－1，相当于原生药5.32g·d－1。复方丹参片工艺A组、B组、C组分别按以下工艺参数制备。

复方丹参片工艺A组：80～90℃提取、浓缩、干燥，加热时间总计65h（72h以内），含丹参酮ⅡA1.08mg·g－1、丹酚酸B21.25mg·g－1；复方丹参片工艺B组：70～80℃提取、浓缩、干燥，加热时间总计30h（36h以内），含丹参酮ⅡA1.76mg·g－1、丹酚酸B34.83mg·g－1；复方丹参片工艺C组：80～90℃下提取、浓缩、干燥，加热时间总计80h，含丹参酮ⅡA0.84mg·g－1、丹酚酸B13.34mg·g－1。

1.2 动物

杂种犬，体重7～10kg，雌雄兼用，均由南京中医药大学动物中心收购自市郊的杂种犬，实验前在该中心驯养，经检疫及驱虫后，用于该项实验。

1.3 仪器

RM-6000八道生理记录仪（日本NIHON KOHDEN公司），DH140人工呼吸器（浙江医科大学医学仪器实验厂），BT01-100型恒流泵（保定兰格恒流泵有限公司），日立7020全自动生化分析仪（苏州日立电器有限公司）。

1.4 试验分组与剂量

取杂种犬25只，随机分为5组，每组5只动物，雌雄兼用。分别为假手术组（给予等容积蒸馏水），蒸馏水组（给予等容积蒸馏水），工艺A组（0.12g生药·kg－1），工艺B组（0.12g生药·kg－1），工艺C组（0.12g生药·kg－1）。将各组动物所用药物溶于蒸馏水中，给药容积为1mL·kg－1，经十二指肠给药。

1.5 统计学处理

指标表达：

X给药后—给药后观测值，X给药前—为给药前观测值。

心肌耗氧量（kPa·min－1）＝平均动脉压（MAP）×心率（HR）

2 方法与结果

2.1 方法［1-4］

试验犬由前肢小隐静脉用3%戊巴比妥钠（30mg·kg－1）麻醉后，背位固定于手术台上，剪去颈部、胸部和左后肢内侧的毛。将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图（ECG）。分离气管并插入气管插管，分离左侧股动脉、股静脉，分离股静脉插入静脉插管，缓慢恒速输入蒸馏水（约1mL·min－1）；分离股动脉插入动脉插管（管内充满500U·mL－1的肝素蒸馏水），接压力换能器（TP－400T），经放大（AP-641G）测量动脉收缩压（SAP）、动脉舒张压（DAP）、MAP，定标灵敏度为13.33kPa（100mmHg）·cm－1。联接记录仪的连线板直接由动脉压触发心率记数仪（AT-601G）记录HR。于左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏，并接人工呼吸机。打开心包膜，缝于胸壁，做成荷包摇篮。暴露右心耳，静注肝素5～10mg·kg－1使肝素化，用心耳钳夹住右心耳，作一荷包缝口，将缝线穿于一小段橡皮管内，用小钢丝将线勾入橡皮管，于荷包口中心剪一小口，迅速插入冠状窦插管（内径4～5mm，管口为斜角，近管口处为圆形膨大，斜角面避免管口与窦壁紧贴，膨大部为使冠状窦血不致外溢），将小橡皮管内荷包缝线拉紧，靠小橡皮管顶住插管，以避免出血，迅速将插管准确插入冠状窦，结扎右心耳处荷包缝线，固定插管。该插管的远端连接一三通管以备取血。用0号丝线结扎左冠状动脉前降支中下1／3处，假手术组只穿线不结扎。选择梗塞区附近位置12个标测点缝置心外膜电图电极，并在远离梗塞区选一对照点，用手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经传感器（JB-642G）、放大器（AB-621G），用八道生理记录仪记录心外膜电图（EECG）（定标：1mm＝1mV）。结扎15min后经十二指肠给药。直接记录动脉SAP、DAP、MAP、HR，并描记EECG及动脉压（BP）曲线。记录结扎前、结扎15min和给药后（30，45，60，90，120，150，180min）的EECG、SAP、DAP、MAP、HR。各组分别于给药前和给药60min后，左心室取血测动脉血氧，冠状窦处取血测冠状窦血氧，两者氧差反映心肌耗氧。

2.2 结果

见表1～5。

表1 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死SAP的影响（±s）

表1 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死SAP的影响（±s）

注：n＝5

30 45 60 90 120 150 180假手术组－18.27±2.07 18.27±1.67 18.06±1.69 18.33±1.74 18.41±1.89 17.88±1.86 17.72±1.57 17.93±1组别剂量／g·k`g－1给药前给药后时间／min.74变化率%－0.62±2.00－1.76±3.91－0.33±3.58 0.04±3.02－2.84±4.01－3.58±4.66－2.47±4.98蒸馏水组－18.11±3.05 18.43±3.39 18.57±3.41 18.22±3.05 18.35±3.26 18.09±3.47 17.93±3.28 17.50±2.80变化率%1.70±2.62 2.44±3.34 0.76±2.58 1.34±3.07－0.29±5.05－0.98±5.39－3.04±4.42工艺A组0.12 18.19±2.51 17.69±3.26 17.53±2.94 17.85±2.85 17.88±3.18 17.88±3.08 17.53±2.97 17.82±3.26变化率%－3.74±5.04－4.27±6.56－2.46±4.44－2.59±2.87－2.49±3.62－4.34±3.65－2.86±5.73工艺B组0.12 19.29±2.56 18.78±2.21 18.11±2.00 18.22±2.62 17.69±2.79 18.14±2.02 18.11±2.12 17.98±2.01变化率%－1.91±2.85－5.33±3.02－4.96±5.58－7.91±5.44－5.18±3.55－5.36±4.03－6.02±3.43工艺C组0.12 19.34±1.29 18.89±1.96 19.36±1.45 18.86±2.19 18.94±2.15 18.57±2.39 18.78±2.37 18.35±1.45变化率%0.07±6.14 2.83±5.90－0.02±8.85 0.25±5.63－1.79±7.59－0.69±6.47－2.63±4.29

表2 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死后DAP的影响（±s）

表2 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死后DAP的影响（±s）

注：（1）n＝5，（2）与蒸馏水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

30 45 60 90 120 150 180假手术组－13.19±2.52 13.17±3.06 13.22±2.62 13.11±3.00 13.17±3.28 13.30±2.86 12.60±2.32 13.14±2组别剂量／g·kg－1给药前给药后时间／min.80变化率%－1.35±6.07－0.32±5.67－1.61±5.85－1.60±5.96 0.04±6.58－4.50±8.90－1.08±7.36蒸馏水组－12.40±4.06 13.11±4.41 12.98±4.58 12.90±4.37 13.03±4.20 12.50±4.44 12.48±4.35 12.05±3.93变化率%8.12±9.82 6.37±5.65 6.16±8.65 7.71±8.50 2.35±7.26 2.29±7.50－0.12±13.49工艺A组0.12 13.35±3.49 13.11±3.54 13.25±3.26 13.17±3.54 13.17±3.27 12.85±4.19 12.95±3.29 12.90±3.53变化率%－4.86±7.05－3.15±8.89－4.17±9.33－3.88±8.05－8.00±9.68－5.43±9.46－6.32±6.68工艺B组0.12 14.15±1.56 12.87±1.90 13.81±1.53 13.46±1.56 14.02±1.43 14.07±1.79 13.86±1.59 13.19±2.14变化率%－10.77±4.75**－4.03±4.18*－6.45±4.58－2.42±5.53－2.18±7.89－3.64±5.73－8.74±4.15工艺C组0.12 14.28±1.07 14.10±1.81 13.91±1.16 13.41±2.27 13.75±2.02 13.65±2.09 13.46±2.34 12.90±1.30变化率%3.26±10.02 2.51±12.12－1.59±16.83 0.42±8.02－0.29±10.49－1.96±9.24－5.43±6.36

表3 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死平均动脉压（MAP）的影响（±s）

表3 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死平均动脉压（MAP）的影响（±s）

注：（1）n＝5，（2）与蒸馏水组比较，*P＜0.05

30 45 60 90 120 150 180假手术组－14.88±2.23 14.90±2.50 14.90±2.11 14.80±2.53 14.90±2.74 14.90±2.38 14.30±1.99 14.74±2组别剂量／g·kg－1给药前给药后时间／min.28变化率%－0.31±4.39 0.10±4.72－0.97±4.54－0.50±4.25－0.14±5.35－3.82±6.09－1.14±5.46蒸馏水组－14.30±3.66 14.89±4.03 14.84±4.10 14.67±3.88 14.81±3.84 14.36±4.08 14.29±3.94 13.87±3.52变化率%5.06±5.86 4.62±4.28 3.68±5.20 4.69±5.51 1.06±6.06 0.77±6.10－1.62±8.39工艺A组0.12 14.83±3.30 14.90±2.98 14.64±3.07 14.69±3.30 14.43±3.65 14.88±3.34 14.34±3.32 14.54±3.41变化率%－0.52±7.01－2.35±8.27－2.21±8.84－4.76±5.38－0.97±9.05－4.79±7.24－3.47±7.52工艺B组0.12 15.76±1.57 14.91±1.85 15.25±1.69 14.87±1.80 15.43±1.77 15.47±1.80 15.18±1.67 14.79±2.02变化率%－5.41±5.72*－3.21±4.79*－5.72±5.01*－2.14±4.81－1.79±6.83－3.66±5.13－6.34±5.02工艺C组0.12 15.96±1.08 15.68±1.80 15.68±1.13 15.34±2.27 15.45±1.98 15.33±2.22 15.12±2.13 14.72±1.29变化率%1.99±8.31 2.45±9.73－0.20±12.90 0.29±7.02－0.52±9.19－1.93±7.83－4.15±5.29

表4 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死心率（HR）的影响（±s）

表4 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死心率（HR）的影响（±s）

注：（1）n＝5，（2）与蒸馏水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

30 45 60 90 120 150 180假手术组－159.98±15.58 158.93±18.66 161.40±21.88 158.68±16.67 157.00±14.04 160.98±14.74 160.7组别剂量／g·kg－1给药前给药后时间／min 8±19.98 157.77±20.55变化率%0.75±4.40 2.13±3.31 0.65±2.88－0.32±1.57 2.22±3.36 1.82±2.49－0.12±3.03蒸馏水组－146.60±5.64 149.80±6.26 151.20±7.82 150.00±4.74 150.40±8.38 150.60±6.77 150.20±7.29 151.40±5.22变化率%－1.29±2.48－0.43±1.43－1.13±2.40－0.96±2.04－0.77±2.65－1.01±4.15－0.22±2.37工艺A组0.12 160.00±16.20 155.40±17.08 161.59±19.28 162.40±18.69 163.87±20.86 167.05±20.39 164.87±20.74 167.60±24.12变化率%－6.11±2.77*－2.47±2.77－1.94±2.61－1.14±3.85 0.88±5.51－0.53±3.61 1.00±5.93工艺B组0.12 152.03±24.35 142.20±23.21 146.80±22.04 146.80±22.77 151.93±25.50 147.71±21.38 146.98±21.63 150.01±23.05变化率%－6.40±1.85**－3.20±1.38*－3.24±2.53－0.05±3.12－2.51±4.01－3.05±1.80－1.14±2.09工艺C组0.12 134.72±10.90 136.92±10.82 140.34±11.20 136.62±11.97 141.27±13.85 139.64±13.47 138.02±12.18 140.04±12.67变化率%－0.38±2.86 2.09±2.56－0.64±3.83 2.73±5.801.57±5.88 0.38±4.07 1.90±5.63

表5 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死心肌耗氧量的影响（±s）

表5 复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗死心肌耗氧量的影响（±s）

注：（1）n＝5，（2）与蒸馏水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

给药后时间／min组别剂量／g·kg－1给药前30 45 60 90 120 150 180假手术组－2 392.54±479.64 2 341.06±－1.19±7.48蒸馏水组－2 092.67±529.96 574.84变化率%0.35±3.89 2 381.34±562.37 2 417.65±552.71 2 367.76±590.00 2 346.60±522.69 2 407.76±509.02 2 305.43±465.58 2.24±6.04－0.36±4.49－0.86±3.25 1.95±3.16－2.06±6.63－1.82±8.77工艺A组0.12 2 373.51±353.64 2 097.31±534.13变化率%3.80±8.21 2 210.49±504.69 2 229.64±564.57 2 195.59±561.35 2 204.29±461.80 2 147.29±544.56 2 147.12±615.33 4.18±4.59 2.51±5.97 3.74±6.80 0.22±5.31－0.29±6.51－4.20±7.78工艺B组0.12 2 408.30±542.78 2 346.23±302.44变化率%－11.76±6.85*2 160.68±270.42 2 337.87±254.80 2 335.41±304.28 2 285.55±369.15 2 373.16±265.83 2 363.10±291.31－4.20±9.92－4.73±5.97－6.98±9.04－2.95±7.29－3.27±10.46－12.17±8.04工艺C组0.12 2 176.74±255.20 2 235.00±551.01变化率%－14.16±7.48**2 175.09±495.99 2 429.10±522.56 2 386.77±517.41 2 360.61±582.54 2 300.30±517.76 2 242.79±495.49－4.18±3.86*－5.80±4.37*－7.31±7.08－9.37±7.19－11.59±4.66 2 057.43±228.49变化率%1.63±9.09 2 146.40±307.68 2 196.22±192.14 2 099.43±395.30 2 191.54±423.28 2 146.81±428.67 2 087.89±374.89－2.45±5.38 4.61±10.55－0.56±16.12 3.30±12.49 1.32±14.12－1.49±9.84

复方丹参片工艺A组、工艺B组能降低冠脉结扎所致心肌梗死麻醉犬的HR和心肌耗氧量，与蒸馏水组比较有明显差异（P＜0.05，P＜0.01），复方丹参片工艺B组能降低冠脉结扎所致心肌梗死麻醉犬DAP、MAP和心肌耗氧量，与蒸馏水组比较有明显差异（P＜0.05，P＜0.01）。

3 讨论

复方丹参片的有效成分主要分为水溶性和脂溶性两部分，分别以丹酚酸B、丹参酮ⅡA为代表，均为对热敏感的化合物。工艺A、B、C组所用复方丹参片为不同工艺参数下制备，主要是控制提取、浓缩、干燥等加热步骤的时间。加热时间短、温度低，所得丹参酮ⅡA、丹酚酸B为代表的有效成分含量较高。其中工艺A组复方丹参片含丹参酮ⅡA1.08mg·g－1、丹酚酸B 21.25mg·g－1，工艺B组含丹参酮ⅡA1.76mg·g－1、丹酚酸B 34.83mg·g－1，工艺C组含丹参酮ⅡA0.84mg·g－1、丹酚酸B 13.34mg·g－1。

对比3种工艺的复方丹参片，当有效成分达到一定量时，有较好的抗心肌缺血作用，其效应与剂量有关，即复方丹参片水溶性和脂溶性有效成分含量越高，抗心肌缺血的作用越好。经测定考察，市售各厂家的复方丹参片有效成分含量波动较大，对药效作用必然存在影响。大部分市售复方丹参片，其丹酚酸B、丹参酮ⅡA为代表的水溶性成分和脂溶性成分含量接近工艺C，少数接近工艺A，更少数接近工艺B。因此，在处方固定的情况下，有必要通过优化工艺、细化参数，提高有效成分的转移率和终产品的有效成分含量，制造优质药品，保证临床疗效。

［1］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学（第2版）［M］.北京：人民卫生出版社，1991：854.

［2］冯国鸣，冯高闳，周前贵.甲基橙皮甙对犬冠脉、肾、脑循环的作用［J］.中国药理学报，1988，9（6）：548.

［3］于占久.关于心肌梗死的试验研究-Ⅰ.动物蒸馏水的建立及心外膜电图标测术［J］.中华心血管病杂志，1980，8（1）：65.

［4］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学（第3版）［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1003.

Effects of Danshen Tablets Under Process Control on M yocardial Infarction Caused by Coronary Artery Ligation of Anesthetic Dogs

Huang Lin，Lin Qing，Xiao Xiaoli，Li Chuyuan
（Hutchison Whampoa Guangzhou Baiyunshan ChineseMedicine Company Limited，Guangzhou Guangdong510515，China）

Objective：Prepared Danshen tablets under different process control plans are to be observed protective effects on acutemyocardial infarction of dogs.MethodsTomake themodel of acutemyocardial infarction of dogs by coronary ligation and to observe changes before and after of administration.ResultsDanshen tablets have the protective effect on acute myocardial infarction.Both processes A and B appeared to decrease heart rate（HR）and myocardial oxygen consumption of the animalmodels；Processes B decrease DAP，MAP and the increase of arteriovenous oxygen difference.ConclusionDanshen Tablets can markedly relieve myocardial ischemia.The parameters of extraction impact on the content of themain effective constituents.The higher content of effective constituents induces themore remarkable protective effect.

Danshen Tablet；Anesthetic dog；Myocardial ischemia

广州市科技局科技攻关计划项目（2004Z1-E5021）

*林青，Tel：（020）87100367，E-mail：linqing＠813zy.com

2009-11-20）