中药洁痈液对下颌智齿冠周炎致病菌的抑菌实验研究

2010-10-26张剑峰李红专李晋凤

卫生职业教育 2010年23期

张剑峰，李红专，李晋凤

（甘肃省中医院，甘肃兰州 730050）

张剑峰，李红专，李晋凤

（甘肃省中医院，甘肃兰州 730050）

目的为证实自拟方洁痈液治疗下颌智齿冠周炎的疗效，并进一步探索其治疗机理。方法450例下颌智齿冠周炎门诊患者，随机分为3组，每组150人，分别为治疗组、西药对照组和中药对照组。治疗前细菌培养，治疗后进行抑菌实验。结果治疗前培养显示有9种菌种；治疗后发现主要炎症致病菌减少，但正常菌群无明显变化。结论中药洁痈液对下颌智齿冠周炎有抑菌作用。

洁痈液；冠周炎；抑菌实验

冠周炎系阻生牙或正位牙在萌出过程中牙冠周围组织发生的化脓性炎症，亦有称为“冠周感染”[1]。清代郑梅涧著《重楼玉钥》中称冠周炎为“合架风”，描述“此症生在上下牙床两根头勾合之处，起一红核肿痛，牙关紧闭，不能开口……”。甘肃省中医院口腔科自拟方洁齩痈液临床用于治疗下颌智齿冠周炎取得较好效果，为进一步探索其治疗机理，进行抑菌实验研究，现报告如下。

1 资料

1.1 一般资料

将450例患者随机分为3组，每组150人，分别为治疗组、西药对照组和中药对照组[2～17]。450例均为下颌智齿急性冠周炎患者。其中，男性219例，女性231例；年龄最大34岁，最小18岁，平均25.3岁；发病时间最短小于1天，最长5天，2～3天就诊者居多；均有不同程度的局部红、肿、疼痛，咀嚼吞咽功能受影响，部分患者伴发热、头痛等全身症状。

1.2 纳入标准与排除标准

纳入标准：（1）急性局限型：局部有明显疼痛，炎症局限于冠周组织（包括龈瓣、周围粘骨膜），无开口困难和颊部肿胀。（2）急性扩散型：除局限型症状外，炎症已向冠周以外扩散，出现开口困难或颊部肿胀，吞咽疼痛，伴有明显全身症状。

排除标准：（1）冠周炎伴发间隙感染者。（2）冠周炎伴发骨髓炎者。（3）急性牙周膜炎、牙髓炎和牙龈炎。（4）三叉神经痛、非典型面痛和偏头痛表现与冠周炎相似者。

2 方法

3组治疗前采冠周脓性分泌物做需氧菌和厌氧菌培养与鉴定，同时对脓性分泌物涂片作革兰染色和抗酸染色并镜检观察。

3组经治疗1次后，每次治疗前同前法进行细菌培养与鉴定、涂片和镜检，共做3次。具体操作如下。

2.1 细菌培养

2.1 .1取样与接种患者先用生理盐水漱口，再以3%过氧化氢液和生理盐水依次冲洗病变及周围牙面（切忌将冲洗针插入盲袋）。在病变区周围用消毒棉卷隔湿消毒棉球擦干冠周粘膜表面，再以1%碘酊棉球（稍挤干）消毒，用6号半针头插入消毒的橡皮塞内，以隔绝氧气，连针筒一起送检。标本一般在5ml内将其接种于牛心，牛脑提出液琼脂培养基，放入厌氧培养箱内，分区划线接种于BAP和2块巧克力平板上。BAP平板放入厌氧罐中于（35±2）℃孵箱培养2～7d观察结果；一块巧克力平板置于5%～10%CO2环境（35±2）℃孵箱培养1～2d观察结果；另一块巧克力平板置于普通环境（35±2）℃孵箱培养1～2d观察结果。

采集的脓性分泌物接种后再涂片，进行革兰染色，做细菌分类计数。

2.1 .2培养、分离与鉴定细菌学分离鉴定按照口腔厌氧菌分离培养的常规方法进行。取样本液10ul接种于厌氧菌分离血琼脂平皿，用无菌玻璃棒涂布均匀后放置于厌氧菌培养箱。在37℃80%N2、10%CO2和10%H2条件下孵育48小时。记录培养物的菌落数和分类鉴定结果。鉴定结果参照Bergeys系统细菌学手册。

记录每个平板上相同细菌的菌落数，疑为厌氧的细菌分离在BAP平板上，同时在BAP平板上做耐氧试验（耐氧试验进行3次），分离细菌经涂片、革兰染色镜检和触酶试验后，采用VITEK-ANI鉴定菌卡及链球菌鉴定血清等方法鉴定菌种。

2.2 体外抑菌实验

2.2 .1方药配制治疗组所用配方为：大黄15g、细辛15 g、苦参12g、黄芩15g、花椒10g、冰片20g、薄荷15g、加水1 000ml，水煎浓缩至300m l，滤后备用。

西药对照组用2%碘甘油，配制方法同上。

中药对照组用六神丸，配制方法同上。

2.2 .2菌种准备厌氧菌：取布氏血琼脂上培养48～72h菌落5个，接种于5～6ml THCK培养基中，培养18～20h，用布氏肉汤调整菌液浊度至0.5麦氏比浊管浓度，约含菌1～2×108cfu/m l，待用。

兼性厌氧菌或需氧菌：取巧克力琼脂上培养24～48h菌落3～5个，接种于M-H肉汤，35℃培养2～6h，用M-H肉汤稀释菌液到0.5麦氏比浊管浊度，约含菌1～2×108cfu/m l，待用。

2.2 .3药液稀释排列无菌试管10支，于第2～10管中各加无菌蒸馏水10m l，取洁齩痈液或对照用药液20m l，于第1管加入10ml、第2管加入10m l，将第2管混合后取出10m l，加入第3管，再混合后取出10m l，加入第4管，如此连续稀释至第9管，取出10ml弃掉，第10管只有无菌蒸馏水作对照，第1～9管则为不同浓度药液10m l。

2.2 .4 含药平板制备采用无菌操作将已融化的无菌Wilkins-chalgren培养基或M-H琼脂900m l分装于10瓶，每瓶90m l，将1～10管中的药液10m l分别加入10瓶琼脂中，每瓶100m l，倾注4个平板，每个平板25m l含药琼脂，若用于链球菌药敏，则每100m lM-H琼脂在临倒平板前用无菌操作加入5m l脱纤维羊血。

2.2 .5细菌接种法将配好的菌液点种于不同药液浓度的Wilkins-chalgren培养基或 M-H琼脂平板上。以第 10管Wilkins-chalgren培养基或M-H琼脂作细菌生长对照，厌氧菌置于厌氧罐中于（35±2）℃孵箱培养2～7d观察结果，链球菌置于5～10%CO2环境（35±2）℃孵箱培养1～2d观察结果，其他细菌置于普通环境（35±2）℃孵箱培养1～2d观察结果。

3 结果

治疗前培养显示的菌种有厌氧链球菌属、类杆菌属、牙龈卟啉单胞菌、口腔普氏菌属、乳杆菌属、草绿色链球菌、微球菌、脆弱类杆菌和金黄色葡萄球菌；治疗后发现主要炎症致病菌明显减少，但正常菌群无明显变化。

3.2 抑菌实验判断标准

以有无细菌生长为判断标准，与对照组（不含药物的M-H琼脂平板）比较，有肉眼可见菌落生长者为无抑菌作用，无菌落生长者的药物最低浓度为药物的MIC。

抑菌实验结果见表2～4。

4 统计学分析

各组抑菌实验表明，P＞0.01,组间比较无显著性差异，表明3组药物对细菌的抑制性相似。

表1 中药洁痈液药物浓度梯度

厌氧链球菌属类杆菌属牙龈卟啉单胞菌口腔普氏菌属乳杆菌属草绿色链球菌微球菌脆弱类杆菌金黄色葡萄球菌--+ + ++ ++ ----++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++细菌 1∶10 1∶20 1∶40 1∶80 1∶160 1∶320 1∶640 1∶1 280 1∶2 560 蒸馏水++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ -++ ++ -++ ++ ++ ++ --+ + ----+ + ++ ----------------------

表2 洁痈液抑菌环直径（mm）

菌种抑菌环直径牙龈卟啉单胞菌中间普雷沃菌核梭杆菌黏放线菌龋齿放线菌38.3 22.1 25.6 23.2 10.1

表3 西药对照组抑菌环直径（mm）

表4 中药对照组抑菌环直径（mm）

5 讨论

关于冠周炎的细菌学，经多年研究，未发现特殊病原菌。在坏死性龈炎常发时期，因冠周炎常伴有坏死性龈炎，曾认为螺旋体和梭形杆菌为主要致病菌。现在很少有学者持这种观点，因为冠周炎很少有坏死性龈炎表现。Rud（1970年）报告998例急性冠周炎，仅7例表现为坏死性龈炎。

现在多数学者认为，冠周炎与一般口腔感染的病原菌相同，即为口腔常见菌落的混合感染。Kay经过392例各型冠周炎盲袋内细菌培养对照，表明均为混合细菌感染，并以甲型链球菌为主。因此，他认为冠周炎是由于混合细菌的协同作用而导致。

70年代以来，学者进而观察到口腔感染（包括冠周炎）除需氧菌外，有更多厌氧菌存在。因此，更强调需氧菌与厌氧菌的混合感染，且以厌氧菌占主体。而在厌氧菌中又以革兰阴性杆菌和革兰阳性球菌最为多见，在兼性厌氧菌中则主要为链球菌。有学者观察到口腔内的厌氧菌达100种以上，还有学者在每个口腔感染灶中，可培养出3～6种厌氧菌和1种需氧菌。Nitzan通过冠周炎盲袋内细菌培养与涂片检查，观察到除厌氧和需氧菌外，多数涂片还有螺旋体、梭形杆菌存在，但对其作用仍不清楚，不能肯定其是否与感染有关。

张炳新等（1990年）通过生化研究和电镜观察，认为冠周炎为口腔常见菌丛感染。观察到在各种厌氧菌中，以革兰阴性杆菌和螺旋体为主，主要为产黑色素拟杆菌和齿密螺旋体，螺旋体主要存在于盲袋深部，并可侵入组织。

3 组细菌培养结果显示，治疗前有9种菌种。

洁齩痈液由大黄、细辛、苦参、黄芩、花椒、冰片和薄荷组成。单味药已在临床上进行了较多实验研究。韩宁等取大黄总蒽醌和大黄酸标准品，用琼脂稀释法做细菌敏感性试验。结果显示：二者除对变形链球菌、中间型链球菌和伴放线杆菌无作用外，对口腔其他常见菌均有作用，尤其对牙龈卟啉菌ATCC33277和中间型普氏菌ATCC25261有作用；大黄总蒽醌浓度在1.4μg/ml，大黄酸标准品浓度在4.17μg/ml时有抑菌作用。韩宁等使用甲壳胺配伍制成中药大黄滴剂对金黄地鼠试验性牙周炎进行治疗，通过观察唾液隐血（SOB）、菌斑指数（PT）、牙槽骨吸收值(ABL)、细菌学及组织学变化发现：大黄滴液组的SOB、PT和ABL值明显低于对照组；组织学观察大黄滴液组炎症细胞浸润较少，牙槽骨吸收也较对照组少；细菌检出率大黄滴液组明显少于对照组。动物实验显示：大黄滴液除具有良好的抑菌作用外，在治疗牙周出血、减缓牙槽骨吸收方面也有一定作用。

本治疗组洁齩痈液以大黄为君药，其复方制剂有明显抑菌作用，并且3组药物的抑菌性比较无显著性差异。此外，洁齩痈液还有止痛，促进组织细胞修复及愈合的作用，其症状缓解迅速、用药量小、无毒副作用，并且方法简便易行，具有极好的临床应用价值。

大黄为蓼科草本植物,现代医学研究表明其主要有效成分为蒽醌衍生物大黄素、大黄酸、芦荟大黄等。大部分为与葡萄糖结合苷，而另一部分游离状态的苷元大黄具有抗厌氧菌作用。冠周炎是由以革兰阴性厌氧为主的细菌感染性疾病，抑制厌氧菌活性是防治冠周炎的关键。（1）研究表明，大黄蒽醌类具有明显的抑菌作用。据文献报道，大黄蒽醌类对临床常见100株厌氧菌有很强的抑菌作用，特别是对脆弱类杆菌、产黑色素类杆菌敏感。且大黄酸、大黄素等蒽醌衍生物在8μg/m l时就能抑制76%～91%的厌氧菌生长，其作用部位可能是干扰厌氧菌细胞壁的形成。韩宁等用琼脂稀释法做口腔常见菌对大黄总蒽醌和大黄酸标准品的敏感性试验，发现二者的抑菌效果基本相同，而对牙龈卟啉菌ATCC33277和中间型普式菌ATCC25261的抗菌作用最强。其机理也可能是通过抑制细菌核酸的生物合成和呼吸过程而具有抗菌活性。（2）大黄具有免疫调控作用。内毒素（LPS）是革兰阴性厌氧菌独有的致病物质，是冠周炎的主要病因之一。研究表明,大黄对LPS诱生的巨噬细胞分泌炎性细胞因子功能具有明显的抑制作用,并呈连续性作用，随大黄作用时间延长与浓度增加而增强。（3）大黄具有清除氧自由基作用。大黄是一类作用很强的自由基清除剂和脂质过氧化抑制剂,可利用其抗氧化和清除自由基的能力抑制疾病发生和发展。化学发光体系检测证实大黄有清除多种活性氧和抑制脂质过氧化作用。（4）大黄对细胞具有保护作用。乔林等在研究大黄对烫伤大鼠肠黏膜上皮细胞线粒体呼吸功能的影响中发现，大黄能显著提高各时相点细胞色素aa3、b、c、cl含量，对线粒体内膜和呼吸链有明显保护作用。杨明华等用4种大黄蒽醌衍生物对人牙周膜细胞作用进行了体外研究，结果表明4种大黄蒽醌衍生物对人牙周膜细胞均无明显细胞形态学改变，其中大黄素对人牙周膜细胞有一定促生作用。

细辛中含有a-细辛脑，又名a-细辛醚和细辛脑(asarone)。自60年代起，国内外对a-细辛脑进行了广泛研究，已证实其有较强的药理活性，具止咳、祛痰、平喘镇静、解痉以及抗惊厥作用。对肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有不同程度的抑制作用。

体外百部煎剂及酒浸剂对多种致病菌如肺炎球菌、乙型溶血性链球菌、脑膜炎球菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌等有不同程度的抑制作用。丛晓东等对直立百部、蔓生百部、大百部、金沙江百部、细花百部、小叶百部、天门冬、密齿天门冬、湖北大百部9种百部类药材抑制结核杆菌作用的研究表明，9种百部类药材和各提取物在1～4周内其抑菌作用无明显变化，说明其抑菌作用比较稳定、持久。

体外实验表明薄荷煎剂对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、甲型链球菌、福氏痢疾杆菌、白喉杆菌、伤寒杆菌等均有抑制作用。薄荷具有抗病毒作用，薄荷煎剂10mg/m l在原代乳兔肾上皮细胞培养上抑制10 TCIDS～100 TCIDS（半数组织培养感染量）的单纯疱疹病毒感染，增大感染量则无抑制作用。欧薄荷水提取物经鸡胚试验证明，对单纯疱疹病毒、牛痘病毒、Sem liki森林病毒和流行性腮腺炎病毒均有抑制作用，但对流感病毒A和B无效。薄荷的毒副作用十分少见，其主要成分薄荷醇既可内服，又可外用，临床应用十分广泛。

黄芩具有广谱抗菌和抗病毒作用。吕小迅等研究了黄芩醇溶性部分和水溶性部分的抗真菌作用，发现黄芩的醇溶性部分对Tr的抑制作用较强，对其他供试菌抑制作用则较弱;其水溶性部分对Tr,Tg,Ef,Cn和Ca等5种供试菌均有较强抑制作用;同时证明黄芩的有效成分主要存在于其水溶性部分。未经乙醇处理，直接用稀醋酸提取的黄芩药液，对多种致病性真菌均有抑制作用，并与黄精有一定协同作用。张秀娟等采用滤纸片法，对黄芩水煎液、黄芩甙和去黄芩甙水煎液3者的抑菌效果进行了比较，得出黄芩水煎液抗菌作用最强的结论。刘云波等用K-B纸扩散法对黄芩体外抗菌作用的研究结果表明，黄芩浸出液的纸片对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌和乙型链球菌均有明显抑制作用。刘菊福等探讨了不同产地黄芩70%（体积分数）乙醇提取物的主要药效作用，各产地黄芩均表现了抑菌、抗炎、解热和镇静药效。曹励之等的实验表明，黄芩甙具有较强抑菌作用，在脑脊液中的浓度较高，有利于治疗感染性脑水肿。质量浓度为16ng/m l的黄芩甙与卞基青霉素合用，可使新霉素和青霉素对金黄色葡萄球菌抗性株的最低有效质量浓度分别从125ng/ml和250ng/m l下降为4ng/m l和16ng/m l，并有量效关系。对内酰氨这类抗菌素，加用质量浓度为16ng/m l的黄芩甙，可恢复其抗菌作用。另有文献报道，黄芩甙和黄芩素对沙门氏菌未表现出抑制作用，其原因是黄芩水提物可刺激多磷酸激酶的转录，尤其在沙门氏菌早期生长阶段。经药物敏感性试验表明，花椒挥发油对细菌和真菌有不同程度的抑制作用，能显著提高C57BL6（特殊处理的小鼠）小鼠溶菌霉含量，增强其腹腔巨噬细胞吞噬能力和吞噬指数，并使腹腔巨噬细胞形成EA（玫瑰花环）和Ye（玫瑰花节）花环的能力大大增强，由此认为花椒挥发油通过增加溶菌霉含量及巨噬细胞吞噬活性增强机体免疫力，在抗菌、抗病毒、抗肿瘤免疫及免疫调节中发挥重要作用。卢长庆等研究表明花椒挥发油及水提液在试管内对星形奴卡菌有抑制作用，可防止霉菌生长。

洁齩痈液为以上药物的复方制剂，可能具有协同抑菌作用。在口腔局部急性炎症时，利用本中药方直达病所的特点，使药物在局部发挥最大作用，显著改善局部症状，在用药数分钟后，局部疼痛明显减轻（这可能与薄荷、花椒的麻醉止痛作用有关）。

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