丹酚酸B对大鼠动脉粥样硬化的影响

朱 靖 博，迟 晓 君，李 丽

( 大连工业大学 生物与食品工程学院， 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

以动脉粥样硬化为主的心脑血管病因其具有“发病率高，死亡率高，致残率高，复发率高”以及“并发症多”的特点，被世界卫生组织认定为危害人类健康的“头号杀手”[1]。动脉粥样硬化是与氧化胁迫、血管内壁功能障碍相关的炎症性疾病[2]，其中，氧化胁迫在动脉粥样硬化病理过程处于核心地位。丹参酚酸B具有极强的水溶性抗氧化能力和强大的钙铁离子螯合能力[3]，研究发现，其体外抗LDL氧化能力明显优于抗动脉粥样硬化药probucol(普罗布克)[4]。然而，到目前为止，丹酚酸B对动脉粥样硬化的体内活性的研究均通过灌胃的给药方式，无法避免口服药物存在的生物利用度差的缺陷。本实验应用丹酚酸B通过腹腔注射的干预方法，并以辛伐他汀作对照，以血液中高灵敏度C反应蛋白(hs-CRP)及胆固醇与高密度脂蛋白的比值(TC/HDL)联合作为评价指标，观察丹酚酸B对大鼠动脉粥样硬化的影响，进一步探讨其作用机制，旨在为动脉粥样硬化的预防与治疗提供新的方法。

1 材料与方法

1.1 材 料

1.1.1 动物及饲料

SD大鼠，体重130～150 g，由大连医科大学SPF实验动物中心提供，动物许可证号为SCXK(辽)2008-002。

高脂饲料组成：10% 蛋黄粉，市售；5% 猪油，市售；0.2% 胆固醇，购自北京鸿润宝顺科技有限公司；0.5% 胆盐，购自北京奥博星生物技术责任有限公司；84.3% 基础饲料，大连医科大学SPF实验动物中心提供。

1.1.2 药品及试剂

丹酚酸B(纯度98%)由本实验室提供；维生素D3购自上海通用药业股份有限公司；辛伐他汀购自杭州默沙东制药有限公司；血脂检测试剂购自中生北控生物科技股份有限公司；大鼠血清hs-CRP检测试剂，美国ADL公司原装进口试剂。

1.1.3 仪 器

UV-2102 PC型紫外可见分光光度计，BIO-RAD酶联免疫仪，TGL-16B离心机。

1.2 方 法

1.2.1 动物饲养及分组

SD大鼠60只，适应性喂养一周后，随机分为以下6组(n=6)：

Ⅰ，正常对照组；Ⅱ，模型组；Ⅲ，低剂量药物组[丹酚酸B：2 mg/(kg·d)]；Ⅳ，中剂量药物组[丹酚酸B：12.5 mg/(kg·d)]；Ⅴ，高剂量药物组[丹酚酸B：20 mg/(kg·d)]；Ⅵ，辛伐他汀组[辛伐他汀：10 mg/(kg·d)]。

1.2.2 模型制备及给药

模型组、低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组及辛伐他汀组均喂饲高脂饲料，同时于实验开始时腹腔注射维生素D3(40万U/kg体重)，每隔一天注射一次，共两次。正常组喂饲普通饲料，同时腹腔注射生理盐水做对照。

低剂量药物组、中剂量药物组、高剂量药物组及辛伐他汀组从第5周开始每天注射不同剂量药物；正常组与模型组注射等量生理盐水作对照，直至实验结束。

1.2.3 指标测定及方法

分别于实验开始前，造模4周末，8周末，从眼眶取血，取血前禁食12 h。待血液自行凝固后离心分离血清。

参照相应试剂盒说明测定血清中各项指标。其中，胆固醇(TC)用酶比色法(CHOD-PAT法)检测，高密度脂蛋白(HDL)用磷钨酸-镁沉淀法检测，高灵敏度C反应蛋白(hs-CRP)用酶联免疫法检测。

1.2.4 统计学方法

用 SPSS 10.0软件包进行统计学处理，数据用(x±s)表示，组内检验用T检验，组间检验用方差检验，P<0.05为差异在统计学上有显著性意义。

2 结果与讨论

2.1 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中胆固醇(TC)浓度的影响

由表1可见，喂饲高脂饲料及注射大剂量VD3后，丹酚酸B各药物组，辛伐他汀组及模型组血液中胆固醇浓度具有升高的趋势，4周末胆固醇浓度与开始时相比具有显著性差异(*P<0.05)。经过药物干预后各药物组均能降低血液中胆固醇浓度，与药物干预前相比具有显著性差异(△P<0.05)。

表1 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中胆固醇浓度的影响

Tab.1 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood total cholesterol

c(TC)/(mmol·L-1)开始4周末8周末对照组1.45±0.421.14±0.221.29±0.23丹酚酸B低剂量组1.84±0.302.86±0.63*1.37±0.30△丹酚酸B中剂量组1.26±0.402.88±0.72*1.53±0.18△丹酚酸B高剂量组1.73±0.212.44±0.60*1.42±0.26△辛伐他汀组1.93±0.322.48±0.66*1.52±0.26△模型组1.91±0.382.69±0.94*5.74±0.90注:饲养前后组内比较:4周末与开始比较,*P<0.05;8周末与4周末比较,△P<0.05。

2.2 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中高密度脂蛋白(HDL)浓度的影响

由表2可见，喂饲高脂饲料及注射大剂量VD3后，丹酚酸B中剂量药物组，辛伐他汀组及模型组血液中高密度脂蛋白浓度有降低的趋势，4周末丹酚酸B中剂量组，辛伐他汀组，模型组高密度脂蛋白浓度与开始时相比具有显著性差异(*P<0.05)。经过药物干预后各药物组血液中高密度脂蛋白胆固醇浓度与药物干预前相比无显著性差异(△P>0.05)。

表2 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中高密度脂蛋白胆固醇(HDL)浓度的影响

Tab.2 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood high density lipoprotein

c(HDL)/(mmol·L-1)开始4周末8周末对照组0.98±0.111.02±0.170.98±0.19丹酚酸B低剂量组1.17±0.261.05±0.500.97±0.19△丹酚酸B中剂量组1.22±0.271.01±0.23*0.95±0.20△丹酚酸B高剂量组1.29±0.401.01±0.210.99±0.18△辛伐他汀组1.58±0.251.00±0.26*0.96±0.20△模型组1.95±0.341.38±0.49*1.07±0.19注:饲养前后组内比较:4周末与开始时比较,*P<0.05; 8周末与4周末比较,△P>0.05。

2.3 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中TC/HDL的影响

由表3可见，喂饲高脂饲料及注射大剂量VD3后，丹酚酸B各药物组，辛伐他汀组及模型组血液中TC/HDL具有升高的趋势，4周末TC/HDL与开始时相比具有显著性差异(*P<0.05)。经过药物干预后各药物组均能降低血液中TC/HDL，与药物干预前相比具有显著性差异(△P<0.05)。

2.4 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中高灵敏度C反应蛋白(hs-CRP)质量浓度的影响

由表4可见，喂饲高脂饲料及注射大剂量VD3后，丹酚酸B各药物组，辛伐他汀组及模型组血液中hs-CRP均有升高的趋势，4周末血液中hs-CRP质量浓度与开始时相比具有显著性差异(*P<0.05)。经过药物干预后各药物组均能降低血液中hs-CRP质量浓度，与药物干预前相比具有显著性差异(△P<0.05)。

表3 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中n(TC)/n(HDL)的影响

Tab.3 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on then(TC)/n(HDL) of blood

n(TC)/n(HDL)开始4周末8周末对照组1.45±0.381.15±0.291.39±0.46丹酚酸B低剂量组1.59±0.363.32±1.81*1.43±0.26△丹酚酸B中剂量组1.79±0.453.02±1.18*1.66±0.28△丹酚酸B高剂量组1.48±0.402.47±0.89*1.47±0.32△辛伐他汀组1.25±0.272.62±0.94*1.64±0.42△模型组1.01±0.202.12±0.69*5.66±1.74注:饲养前后组内比较:4周末与开始时比较,*P<0.05;8周末与4周末比较,△P<0.05。

表4 丹酚酸B及辛伐他汀对血液中hs-CRP质量浓度的影响

Tab.4 Effect of salvianolic acid B and simvastatin on the concentration of blood hs-CRP

ρ(hs-CRP)/(μg·mL-1)开始4周末8周末对照组0.02±0.010.02±0.010.02±0.01丹酚酸B低剂量组0.26±0.010.45±0.10*0.34±0.12△丹酚酸B中剂量组0.02±0..010.47±0.15*0.35±0.11△丹酚酸B高剂量组0.02±0.010.43±0.17*0.36±0.14△辛伐他汀组0.04±0.060.40±0.12*0.35±0.11△模型组0.02±0.010.41±0.11*0.40±0.11注:饲养前后组内比较:4周末与开始时比较,*P<0.05;8周末与4周末比较,△P<0.05

2.5 丹酚酸B抑制动脉粥样硬化的量效关系及与辛伐他汀药效对比

由表5可见，给予药物干预后，对于血液中TC，HDL，TC/HDL以及hs-CRP等指标，丹酚酸B低剂量组、丹酚酸B中剂量组、丹酚酸B高剂量组各药物组间进行比较均无显著性差别(*P>0.05)，且丹酚酸B各药物组与辛伐他汀组比较亦无显著性差别(△P>0.05)。

表5 丹酚酸B抑制动脉粥样硬化的量效关系及与辛伐他汀药效对比

Tab.5 Dose-effect relationship of the salvianolic acid B inhibiting atherosclerosis and the comparison of efficacy between salvianolic acid B and simvastatin

c(TC)/(mmol·L-1)c(HDL)/(mmol·L-1)n(TC)/n(HDL)ρ(hs-CRP)/(μg·mL-1)对照组1.29±0.230.98±0.191.39±0.460.02±0.01丹酚酸B低剂量组1.37±0.30*△0.97±0.19*△1.43±0.26*△0.34±0.12*△丹酚酸B中剂量组1.53±0.18*△0.95±0.20*△1.66±0.28*△0.35±0.11*△丹酚酸B高剂量组1.42±0.26*△0.99±0.18*△1.47±0.32*△0.36±0.14*△辛伐他汀组1.52±0.260.96±0.201.64±0.420.35±0.11模型组5.74±0.901.07±0.185.70±1.830.40±0.11注:丹酚酸B各药物组间比较: *P>0.05; 丹酚酸B各药物组与辛伐他汀组比较,△P>0.05。

3 结 论

动脉粥样硬化是一种与氧化胁迫、血管内壁功能障碍相关的炎症性疾病，而丹酚酸B具有极强的水溶性抗氧化能力[5-6]和很强的钙铁离子螯合能力，因此有望取得理想的治疗效果。本实验应用丹酚酸B通过腹腔注射的干预方法，并以辛伐他汀作对照，以血液中hs-CRP及TC/HDL联合作为评价指标，观察丹酚酸B对大鼠动脉粥样硬化的影响，其中，hs-CRP与TC/HDL两项指标联合在临床上诊断阳性率能达到95%以上[7-8]。实验结果表明，丹酚酸B能够通过降低血脂及血液中hs-CRP水平，治疗动脉粥样硬化及其相关疾病。推其作用机制是丹酚酸B的极强水溶性抗氧化能力抑制低密度脂蛋白(LDL)氧化形成氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，从而抑制脂质的形成以及炎症反应的发生，达到治疗动脉粥样硬化的疗效。实验同时发现，丹酚酸B生物活性很强，其低剂量[2 mg/(kg·d)]与辛伐他汀[10 mg/(kg·d)]对动脉粥样硬化抑制作用无显著差异，显示出其具有预防与治疗动脉粥样硬化的市场潜力。这为动脉粥样硬化的预防和治疗提供了新的思路。然而，其治疗动脉粥样硬化的作用在目前所取得剂量范围内尚无明显的剂量依赖关系。因此，其剂量依赖关系的剂量范围还有待进一步的深入研究。

[1] 曹志成. 运用中西医理论探讨动脉粥样硬化研究进展[J]. 中西医结合心脑血管病杂志, 2007, 5(2):141-143.

[2] 袁晓亮. 氧化修饰与抗氧化剂在动脉粥样硬化形成中作用机制的实验研究[D]. 西安:第四军医大学, 2003.

[3] 赵桂峰,李竹庭,范英昌. 丹酚酸B对缺氧再复氧心肌细胞内Ca2+浓度变化的影响[J]. 现代中西医结合杂志, 2004, 13(1):19-20.

[4] LIN Yun-lian, CHANG Ying-ying, KUO Yueh-hsiung, et al. Anti-Lipid-peroxidative principles fromTournefortiasarmentosa[J]. Natural Products, 2002, 65:745-747.

[5] 田影,何克江,朱靖博. 丹酚酸B的体外抗氧化活性研究[J]. 大连工业大学学报, 2008, 27(4):307-308.

(TIAN Ying, HE Ke-jiang, ZHU Jing-bo. Antioxidative activity of salvianolic acid B[J]. Journal of Dalian Polytechnic University, 2008, 27(4): 307-308.)

[6] 吴兰,祝其峰,陈瑗,等. 丹酚酸B对Cu2+介导的LDL氧化修饰的抑制作用[J]. 中国老年学杂志, 1996, 16(4):239-242.

[7] RIFAL N, RIDKER P M. Proposed cardiovascular risk assessment algorithm using high sensitivity C-reactive protein and lipid screening[J]. Clinical Chemistry, 2001, 47: 28-30.

[8] 尹宁,梁静. Hs-CRP联合血脂检测对冠心病的预测价值[J]. 新疆医学, 2006, 36(4):103-104.