白三烯受体拮抗剂对毛细支气管炎外周血CD4+CD25+Treg的影响及疗效观察

杨 娟,钱玮和,韩雪花,柏 进,成玉花,许 将,单春明

(徐州医学院附属淮安医院儿科,江苏淮安,223002)

毛细支气管炎是婴幼儿时期最为常见的喘息性疾病,有资料表明,白三烯受体拮抗剂能明显改善毛细支气管炎患儿的咳喘症状[1-2],但对调节性T细胞如CD4+CD25+Treg影响研究尚少。为探讨其对毛细支气管炎患儿外周血CD4+CD25+Treg的影响及疗效,作者给予毛细支气管炎患儿孟鲁司特口服治疗,检测治疗前后外周血中CD4+CD25+Treg水平,现报告如下。

1 临床资料与方法

1.1 一般资料

2009年1月～2009年12月期间收治的48例毛细支气管炎患儿,符合以下标准[3]:年龄<2岁,以喘憋为主要临床表现,可有发热或无热,双肺可闻及较多喘鸣音,亦可有湿口罗音,胸片结果显示两肺纹理增粗、斑点状或小片状模糊阴影或透亮度增高,均为首次发作感染性喘息。将患儿随机分为2组:孟鲁司特干预组24例,男15例,女9例;常规治疗组24例,男16例,女 8例。两组患儿年龄、性别、病情轻重等差异无统计学意义(P>0.05)。健康对照组 19例,其中男 11例,女8例。近2周内无呼吸道感染、未用糖皮质激素,无过敏性及免疫相关的疾病。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法:两组患儿均采用相同的综合性治疗(抗病毒、抗生素预防感染、糜蛋白酶雾化吸入及盐酸氨溴索静滴化痰、补液,必要时予吸痰、吸氧、纠酸等治疗)。孟鲁司特干预组在上述基础上加用孟鲁司特(鲁南贝特制药有限公司生产,商品名平奇),用法为4 mg,每晚1次。

1.2.2 检测方法:CD4+CD25+T reg的测定分别采集各组患儿治疗前及治疗后7 d及健康对照儿外周静脉血2 mL,肝素抗凝;取肝素抗凝的全血100 μ L,加入CD4-FITC和CD25-PE单克隆抗体20 μ L,IgG1-FITC 和IgG1-PE作为同型对照,室温避光反应30 min,加2 mL optiLyseC溶血素室温下溶解红细胞20 min;磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤10 min(1 500 r/min),弃上清液后加2 mL PBS后用流式细胞仪检测。流式细胞仪为Beckman-Coulte ALTRA,所有试剂均由苏州生物基因有限公司提供。CD4+CD25+Treg表面CD69的检测为了区别CD4+和CD25+调节性T细胞与近期活化的CD4+T细胞,应用流式细胞仪检测来源于上述各组外周血CD4+CD25+Treg活化表型CD69。

2 结 果

2.1 两组主要临床症状比较

孟鲁司特干预组咳嗽、喘憋、肺部哮鸣音持续天数明显短于常规治疗组,差异有显著性(P<0.01),见表1。

表1 两组主要临床表现持续天数比较( ±s,d)

表1 两组主要临床表现持续天数比较( ±s,d)

组别 n 咳嗽 喘憋 肺部哮鸣音孟鲁司特干预组 24 7.5±2.3＊＊ 4.2±1.4＊＊ 5.9±2.7＊＊常规治疗组 24 10.1±3.2 6.8±2.1 9.3±2.2

2.2 各组治疗前后外周血中CD4+CD25+Treg水平比较

治疗前外周血CD4+CD25+Treg水平均明显低于健康对照组(P<0.01)。治疗7 d后孟鲁司特干预组CD4+CD25+Treg明显上升(P<0.05)。见表2。

表2 治疗前后外周血中CD4+CD25+Treg水平比较(%)

3 讨 论

毛细支气管炎是2岁以下婴幼儿特有的呼吸道疾病,多数在6个月以内,喘憋和肺部哮鸣音为其突出表现,主要由病毒感染引起,半数以上为RSV,此外,副流感病毒、腺病毒、流感病毒、鼻病毒均可引起毛细支气管炎,少数系由人肺炎支原体引起[3]。流行病学调查发现,婴幼儿期患过毛细支气管炎的患儿50%～70%可反复喘息,甚至发展至哮喘[4]。随着免疫学的快速发展,大量研究已证明毛细支气管炎的发病和免疫功能紊乱有关,具有Th1/Th2平衡失调,呈Th2细胞因子强势状态[5-7]。调节性T细胞是不同于Th1和Th2的具有调节功能的T细胞群体,在多种免疫性疾病中起重要调节作用。在这类细胞中,主要发挥作用的是自然状态的CD4+CD25+Treg细胞。这类细胞的缺乏或功能缺陷会影响自身免疫环境的稳定[8],实验证明,在体外用抗原刺激后,人类CD4+CD25+Treg可以抑制CD4+CD25-T细胞增殖和Th2型细胞因子的产生[9]。

研究发现CysLTs受体拮抗剂的作用机制为抑制呼吸道嗜酸性粒细胞炎性反应,抑制炎性反应介质和细胞因子释放,抑制气道LTC4释放,改善肺功能,抑制气道重塑,降低气道高反应性等。CysLTs受体拮抗剂对小鼠和人类的免疫系统具有一定的影响。包括对淋巴细胞的作用,细胞因子和炎症介质释放的影响,膜受体的表达,细胞信号转导的影响等。Toriyama等[10]报道CysLTs受体拮抗剂对大鼠实验性自身免疫性眼色素层视网膜炎(EAU)具有较好的治疗效果。大鼠进行自身免疫处理后,给予CysLTs受体拮抗剂治疗后其EAU眼睛炎症程度对CysLTs受体拮抗剂呈剂量依赖性减轻,其眼组织内淋巴细胞及中性粒细胞渗出明显减少。在CysLTs受体拮抗剂治疗组,大鼠CD45RC在CD4+T细胞上的表达明显减少。该研究表明CysLTs受体拮抗剂对 EAU的免疫抑制机制很可能是通过抑制中性粒细胞和CD4+T细胞的激活而实现的。而TCR介导的信号刺激活化后CD4+CD25+T reg,能够抑制CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化增殖[11]。本研究显示治疗前两组患儿外周血CD4+CD25+Treg占CD4+T细胞的百分比均明显低于健康对照组,治疗后孟鲁司特干预组外周血中CD4+CD25+Treg水平较常规治疗组显著上升(P<0.05),同时咳嗽、喘憋、肺部哮鸣音持续天数明显短于常规治疗组。提示CysLTs拮抗剂治平喘可能机制之一是通过活跃毛细支气管炎患儿体内CD4+CD25+Treg,从而抑制效应性CD4+T细胞尤其是Th2细胞大量增殖活化发挥治疗毛细支气管炎作用的。

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