膀胱移行细胞癌组织中p53、VEGF、PCNA的表达及临床意义

李俊鹏 于 满 王志勇 常 辉 王振潮

1 承德医学院 (2007级硕士研究生）（067000）

2 承德医学院附属医院泌尿外科（067000）

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤、其具有高复发、多发性的生物学特点。其发生始终贯穿着一系列分子事件的变化，可能与癌基因的激活和抗癌基因的失活或变异，渐进性细胞间期控制机制的破坏，血管生成等多因素密切相关。据此我们应用免疫组织化学SP方法，检测p53、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）3种肿瘤标志物在膀胱移行细胞癌中的表达，以探讨这3种标志物与膀胱移行细胞癌的病理分级、临床分期的关联性及相互关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

收集承德医学院附属医院2005至2006年手术切除并经病理证实的膀胱移行细胞癌组织石蜡标本43例，其中男30例，女13例，年龄33～87岁，平均年龄65岁。病理分级按WHO标准，G1级12例，G2级24例，G3级7例。临床分期按TNM标准，分为浅表型（Tis～T1）34例，浸润型（T2～T4）9例。另取10例正常膀胱黏膜（取自因前列腺增生症行开放手术的患者）作为对照组。

1.2 试剂

鼠抗人p53单克隆抗体、鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人PCNA单克隆抗体、SP试剂盒均购自北京中山生物技术开发有限公司。

1.3 试验方法

将蜡块标本均行4μm连续切片4张，均经二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化，以过氧化氢阻断内源性酶并行抗原热修复。1张切片行常规HE染色，供组织学观察并进行病理分型和诊断。另3张切片严格按照试剂配套说明书中SP法工作流程操作。每次试验均以PBS代替一抗的方法设置阴性对照，并以已知阳性切片作为阳性对照。

1.4 结果判定

p53、PCNA为细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性染色，VEGF为细胞浆内出现棕黄色或棕色颗粒为阳性染色。选择典型部位，随意取5个高倍视野（10×40），计数1000个细胞，p53、VEGF根据阳性细胞比例分为以下三级，（—）阳性细胞比例＜10%；（＋）阳性细胞比例10%～30%；（＋＋）阳性细胞比例＞30%。PCNA也根据阳性细胞比例分为以下三级，（—）阳性细胞比例＜10%；（＋）阳性细胞比例10%～25%；（＋＋）阳性细胞比例＞25%。其中（—）为该标本目标分子阴性表达，而后二者均为目标分子阳性表达。

1.5 统计学分析

应用SPSS11.5软件包，计数资料采用χ2检验或Fisher精确概率法，相关分析采用spearman等级相关分析。

表1 p53、VEGF、PCNA在正常膀胱组织与膀胱移行细胞癌组织中的表达情况

表2 p53、VEGF、PCNA表达与膀胱移行细胞癌临床特征之间的关系

表3 p53、VEGF、PCNA表达与膀胱移行细胞癌临床特征之间的相关性

2 结 果

2.1 p53、PCNA为细胞核内出现棕黄色颗粒为阳性染色，VEGF为细胞质内出现棕黄色或棕色颗粒为阳性染色。正常膀胱组织与膀胱移行细胞癌组织中3种蛋白的表达（表1）。正常膀胱组织中无p53、VEGF、PCNA阳性表达。膀胱移行细胞癌组织中p53阳性表达率为48.84%；VEGF阳性表达率为67.44%；PCNA阳性表达率为62.79%。3种蛋白在正常膀胱组织与膀胱移行细胞癌组织中表达有显著差异（P＜0.05）。

2.2 3种蛋白表达与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期的关系

p53在G1、G2、G3级膀胱移行细胞癌组织中阳性表达率分别为12.67%、54.17%、85.71%，G1与G2、G3级比较差异有统计学意义（P＜0.05），G2与G3级比较无显著差异（P＞0.05）。p53在Tis～T1与T2～T4期膀胱移行细胞癌组织中阳性表达率分别为38.24%、88.89%，Tis～T1与 T2～T4期比较差异有统计学意义（P＜0.05）。VEGF在G1、G2、G3级膀胱移行细胞癌组织中阳性表达率分别为33.33%、75.00%、100%，G1与G2、G3级比较差异有统计学意义（P＜0.05），G2与G3级比较无显著差异（P＞0.05）。VEGF在Tis～T1与T2～T4期膀胱移行细胞癌组织中阳性表达率分别为58.82%、100%，Tis～T1与T2～T4期比较差异有统计学意义（P＜0.05）。PCNA在G1、G2、G3级膀胱移行细胞癌组织中阳性表达率分别为25.00%、79.17%、100%，G1与G2、G3级比较差异有统计学意义（P＜0.05），G2与G3级比较无显著差异（P＞0.05）。PCNA 在 Tis～T1与T2～T4期膀胱移行细胞癌组织中阳性表达率分别为58.82%、100%，Tis～T1与T2～T4期比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

2.3 3种蛋白表达与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期的相关性

3种蛋白表达与膀胱移行细胞癌病理分级呈正相关（rp53=0.409、rVEGF=0.467、rPCNA=0.481，P均＜0.05）。p53、VEGF蛋白表达与膀胱移行细胞癌临床分期呈正相关（rp53=0.455、rVEGF=0.304，P均＜0.05）。PCNA蛋白表达与膀胱移行细胞癌临床分期无相关性。

3 讨 论

3.1 p53在膀胱移行细胞癌中表达的意义

p53在1989年被霍普金斯大学的Bert Vogelstein等真正明确为抑癌基因，其分为野生型与突变性，野生型p53基因是细胞周期的重要调节基因，它的失活对肿瘤的形成起重要作用[1]。阎洪涛等[2]研究表明，p53与膀胱移行细胞癌组织学分级、临床分期和预后密切相关。本组研究结果表明，p53在正常膀胱黏膜中无表达，在膀胱移行细胞癌组织中明显表达。p53阳性率随膀胱移行细胞癌病理分级增高而增高，随临床分期增加而增高，且p53与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期呈正相关。其可以作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的重要指标。

3.2 VEGF在膀胱移行细胞癌中表达的意义

VEGF最早于1989年发现[3]，可在很多正常成人和动物组织中表达，但一般水平较低，在视网膜病变和肿瘤等病理情况下其表达异常升高。膀胱癌是一种血管丰富的实体肿瘤，在膀胱癌整个发生、发展过程中血管生成几乎贯穿于始终。郭雪涛等[4]研究表明，VEGF的表达率随肿瘤分期、分级的升高而明显增高。本组研究结果表明，VEGF在正常膀胱黏膜中无表达，在膀胱移行细胞癌组织中明显表达。VEGF阳性率也随膀胱移行细胞癌病理分级增高而增高，随临床分期增加而增高，且VEGF与膀胱移行细胞癌病理分级、临床分期也呈正相关。因此其也可以作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的重要指标。

3.3 PCNA在膀胱移行细胞癌中表达的意义

PCNA是由Miyachi等[5]1978年发现的一种相对分子质量为36×103的组蛋白，是DNA复制合成必不可少的物质，直接参与DNA的合成。其在静止期细胞中的量很少，于细胞周期G1期开始合成，在S期达高峰，于G2、M期明显下降，对DNA复制的调节起重要作用。PCNA的合成和表达与细胞增殖状态密切相关，是反映细胞增殖的主要生物学指标。卢童等[7]研究表明，PCNA与膀胱移行细胞癌病理分级呈正相关，与临床分期无相关性。本组研究结果表明，PCNA在正常膀胱黏膜中无表达，在膀胱移行细胞癌组织中明显表达。PCNA阳性率也随膀胱移行细胞癌病理分级增高而增高，随临床分期增加而增高，且PCNA与膀胱移行细胞癌病理分级呈正相关，但PCNA与膀胱移行细胞癌临床分期无相关性。因此其可以作为判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后的辅助指标。

综上所述，采用免疫组织化学SP法检测p53、VEGF、PCNA在膀胱移行细胞癌组织中的表达，对于判断膀胱移行细胞癌恶性程度和预后有较好的临床应用价值。

[1] Lane DP. P53 guanlian of the genoma [J].Nature,1992,358(6381)：15-16.

[2] 阎洪涛,龚百生,廖勇,等.膀胱移行细胞癌组织中P53和血管内皮生长因子表达的关系及临床意义[J].中华泌尿外科杂志,2006,27(3)：178-180.

[3] Ferrara N,Henzel WJ. Pituitary follicular cells secrete a novel heparin-binding. Growth factor. Specifi c for vascular endothelial cells [J]. Biochem Biophys Res Commun,1989,161(2)：851-858.

[4] 郭雪涛,崔明玉.P53、P16、TGF-α、EGFR、VEGF在膀胱移行细胞癌组织中的表达及意义[J].现代泌尿外科杂志,2007,14(4)：225-228.

[5] Miyachi K,Frilzler MJ,Tan EM,et al. Autoantibody to a nuclear antigen in proliferating cells [J].J Immunol,1978,121(6)：2228-2234.

[6] 卢童,杨为民,章群. 膀胱移行细胞癌组织中P16、P53和PCNA的表达及其意义[J].临床泌尿外科杂志,2008,23(1)：58-60.