抗风湿类中成药中非法加入尼美舒利的检测

李存金，郭飞宇

(1.江西省宜春市药品检验所，江西 宜春 336000; 2.宜春职业技术学院，江西 宜春 336000)

抗风湿类中成药中非法添加的化学物质主要有两类:一类为抗炎、镇痛类西药，有双氯芬酸钠、吲哚美辛、布洛芬、吡罗西康、氨基比林等;另一类为激素类西药，如醋酸强的松、磷酸地塞米松、强的松等[1]。尼美舒利抗炎效果显著，解热镇痛效力强，其不良反应国内报道不多，但国外报道其有极高的致严重肝损害风险。临床应用也应注意肝功不全患者禁用、避免与有肝损害的药物联合应用，且长期应用者定期检查肝功能，一旦发现肝功能改变应及时停药[2]。因此，尼美舒利的应用需要临床医生的指导。患者服用非法添加了尼美舒利的中成药后，短期内症状虽可缓解，但长远看会对身体造成伤害[3-6]。为有效查处、打击此类假药的生产及销售，笔者参考文献[7-9]，用高效液相色谱(HPLC)法检测了抗风湿类中成药中非法添加的化学物质尼美舒利，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪，Waters 1525型高效液相色谱仪，SK250LHC型超声波清洗器，普析通用TU1901型紫外分光光度计。尼美舒利对照品(批号为100555-200501，中国药品生物制品检定所);水(二次重蒸馏水)，甲醇(色谱纯)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μ m);流动相:0.004 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH至4.0)-甲醇(45∶55);检测波长:298 nm;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精取尼美舒利对照品适量，加甲醇超声溶解并稀释成0.5mg/mL的对照品贮备液，精取贮备液10 mL，置25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得对照品溶液。若供试品为片剂、丸剂、颗粒剂，研细，称取一次最大服用剂量，置具塞锥形瓶中，加入约20 mL甲醇超声处理10 min，放冷至室温，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过;若供试品为胶囊剂，取一次最大服用剂量内容物，研细，置具塞锥形瓶中，加入约20 mL甲醇超声处理10 min，放冷至室温，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液5 mL，置25 mL量瓶中，胶囊壳[9]用热水(70～80℃)10 mL溶解，用20 mL氯仿萃取，萃取液蒸干，残渣加甲醇5 mL溶解，并入上述25 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，滤过;若供试品为口服液[10]，量取5 mL，置25 mL量瓶中，加入约15 mL甲醇超声处理10 min，待温度与室温平衡后，用乙腈定容至刻度，超声混匀，置冰箱中冷藏过夜。滤过后取续滤液，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:取质量浓度为1.000 4 mg/mL的对照品贮备液 1，2，3，4，5，6 mL，置 10 mL 量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精取10 μL注入高效液相色谱仪测定，以质量浓度为对峰面积进行回归，得线性回归方程为 Y=14.866 98X+9.486 73，r=0.999 9(n=6)。结果表明，尼美舒利质量浓度在 100.04～600.24 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样6次，依法测定。结果峰面积的 RSD小于0.1%(n=6)，表明方法精密度良好。

重复性试验:取同一供试品6份，依法制备供试品溶液并测定峰面积。结果平均含量为3.2%，RSD=0.2%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，依法于 0，0.5，1.0，3.0，5.0，24.0 h时分别进样。结果峰面积的 RSD为1.2%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

空白干扰试验:共测定了5种剂型20批次抗风湿类中成药样品。取样品，依法制备供试品溶液，注入液相色谱仪。结果在对照品溶液成分色谱峰相应位置上，无其他色谱峰出现(图1)，证明该色谱条件下，各样品杂质干扰小。

最低检测限确定:在 S/N=3时，尼美舒利的最低检测限为0.6 ng。

图1 高效液相色谱图

加样回收试验:精密称取阴性样品适量，精密加入尼美舒利对照品10 mg，依法制备供试品溶液并测定含量，计算回收率。结果见表1。

表1 尼美舒利加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密称取样品适量，依法制备供试品溶液并测定含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

考察了不同比例(55 ∶45，50 ∶55，60 ∶40)的甲醇-0.004 mol/L磷酸二氢钾溶液(磷酸调节pH至4.0)作为流动相。结果表明，在选定的3种流动相比例适当变动的情况下，杂质成分仍能很好地分离，理论板数均不小于4 000。比较了本试验用流动相中0.004 mol/L磷酸二氢钾溶液的pH(3.9，4.0及4.1)，结果pH在4.0或微小的变动时，杂质成分仍能很好地分离，理论板数均不少于4 000。

曾用不同品牌色谱柱进行试验，结果Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Symmetry C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，Hypersil ODS2柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)均能取得满意的分离效果与理论板数。

取尼美舒利对照品适量，加甲醇超声溶解并用流动相稀释成750 μg/mL的待测溶液。照紫外分光光度法在200～400 nm波长范围内扫描。综合考虑尼美舒利的吸收波长范围，结合中成药和保健品成分复杂等情况，本试验选298 nm为分析波长。

取本品阳性样品，分别超声处理5，10，15 min，结果超声处理10min即可将尼美舒利基本提取完全，故本试验采用超声处理10min。

[1]吴庆春.中成药非法添加化学药品的类型及鉴别[N].中国医药报，2008-01-06.

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