高效液相色谱法同时测定枳实导滞丸中柚皮苷与橙皮苷含量

刘 源，沈好文

(江苏省镇江药品检验所，江苏 镇江 212003)

枳实导滞丸[1]收载于2005年版《中国药典(一部)》，由黄芩[2-3]、大黄、白术、茯苓、泽泻、枳实(炒)[4]、黄连(姜汁炙)、六神曲(炒)等组方，具消积导滞、清利湿热之功效，用于饮食积滞、大便秘结等症。本试验在药典规定的基础同时测定枳实导滞丸的柚皮苷、橙皮苷[5-6]两种有效成分的含量，这有利于更好地评价和监控产品质量。

1 仪器与试药

2695型液相色谱仪，Empower色谱工作站(美国沃特斯公司);AG-245型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)。柚皮苷对照品(批号为110722-200610)、橙皮苷对照品(批号为110721-200512)均由中国药品生物制品检定所提供;乙腈、甲醇(色谱级)，其他试剂(AR 级);枳实导滞丸(批号分别为 081110，090618，091006，湖北香连药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:水 -乙腈，梯度洗脱(表 1);检测波长:230 nm，流速:1.0 mL/min;柱温:37 ℃ ;进样量:10 μL。理论板数按柚皮苷计算应不低于 3 000。色谱图见图1。

表1 梯度洗脱条件

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

精密称取柚皮苷、橙皮苷对照品适量，分别加甲醇制成质量浓度为2.62 μg/mL和0.32 μg/mL的对照品溶液。取样品装量差异项下供试品，研细，取约1.5 g，精密加甲醇100 mL使溶解，加热回流1 h，称重，用甲醇补足减失的质量，滤过，精取续滤液1 mL，加甲醇至100 mL，即得供试品溶液。取枳实导滞丸的阴性样品，制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:精密称取柚皮苷对照品10.47 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，分别精密量取1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，置100 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10 μL进样，以峰面积对对照品质量浓度(μg/mL)进行线性回归，得柚皮苷回归方程 Y=2.4×106C+76 787，r=0.999 7。柚皮苷质量浓度在1.047～10.47 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。精密称取橙皮苷对照品12.75 mg，置100 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1 mL，加甲醇至10 mL，再分别精密量取 1.0，2.5，5.0，7.5，10.0 mL，置 100 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密量取10 μL进样，以峰面积对对照品质量浓度(μg/mL)进行线性回归，得橙皮苷回归方程为Y=2.4×106X+76 787，r2=0.999 6。橙皮苷质量浓度在 0.127 5～1.275 μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，连续进样5次。结果得柚皮苷与橙皮苷峰面积的 RSD分别为1.1%和1.5%(n=5)。表明进样精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，6，8 h时进样测定。结果柚皮苷和橙皮苷含量的 RSD分别为1.0%和1.2%(n=5)，表明溶液稳定性良好。

重复性试验:取同一批号样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量。结果柚皮苷平均含量为18.07 mg/g，RSD为1.9%(n=6);橙皮苷平均含量为 3.35 mg/g，RSD为1.7%(n=6)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:分别称取已知含量的样品适量，精密加入对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备溶液，测定含量并计算回收率。结果见表2。

表2 柚皮苷与橙皮苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取2.2项下供试品溶液和对照品溶液，各进样10 μL，测定峰面积，按外标法计算。结果3批样品的柚皮苷含量分别为18.12，17.93，18.51 mg/g，平均含量为18.19 mg/g;橙皮苷的含量分别为3.18，3.63，3.49 mg/g。

3 讨论

曾分别使用超声和直接加热回流两种方法处理样品，结果后者较前者效果好，样品杂质干扰少，分离效果好，故采用直接加热回流的方法处理样品。以甲醇-水作为流动相时，成分的分离及测定结果均不理想;改为水-乙腈后，测定结果符合预期。在后来的试验中，通过进一步摸索，又采用梯度洗脱方法，得到了满意的结果，故决定采用水-乙腈梯度洗脱的方法。本测定方法简便、准确、重现性好，可有效控制产品质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:515.

[2]石 焱，吴 琼.高效液相色谱法测定枳实导滞丸中黄芩苷含量[J].解放军药学学报，2006，22(6):474-475.

[3]罗兴平，聂凌云，陈立仁，等.HPLC测定肝泰康胶囊中黄芩苷的含量[J].解放军药学学报，2004，20(2):148.

[4]欧阳荣，周新蓓，皮晓华.枳实生品及不同炮制品中橙皮苷含量比较[J].中国药房，2004，15(1):57.

[5]史万忠，徐德生，刘 力，等.HPLC法测定中药复方OPG片中橙皮苷的含量[J].中国试验方剂学杂志，2003，9(1):4.

[6]谭生建，刘 刚.高效液相色谱法测定枳实导滞丸中橙皮苷和黄芩苷的含量[J].解放军药学学报，2006，22(5):387.