中性氧化铝对三黄片中盐酸小檗碱含量测定的影响

王世清

(河南省濮阳市药品检验所，河南 濮阳 457000)

国家食品药品监督管理局《药品检验补充检验方法和检验项目批准件》(2007002号)中规定了三黄片每片含盐酸小檗碱不得低于4.36 mg。然而，笔者在使用该标准过程中，曾先后用上海五四化学试剂有限公司、上海纳辉干燥试剂厂、上海陆都化学试剂厂的中性氧化铝测定同一批三黄片的含量，结果分别为2.53，4.94，3.02 mg，出现了合格与不合格两种截然不同的结论。为了寻找三黄片中盐酸小檗碱含量测定不准确的原因，笔者再次进行了试验，结果理想，报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪手动进样器(美国);Precisa92SM202ADR型电子天平;KQ2200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。盐酸小檗碱对照品(批号为110713-200609，中国药品生物制品检定所);中性氧化铝(批号为F20080901，国药集团化学试剂有限公司);三黄片(批号为08010342，襄樊隆中药业股份有限公司);乙腈(色谱纯)，水(重蒸馏水)，其他试剂(分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[1]

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.05%十二烷基硫酸钠(含0.1%磷酸)-乙腈(52∶48);流速:0.8 mL/min;检测波长:265 nm;柱温:室温;进样量:20 μL(20 μL定量环);进样方式:手动进样。理论板数按盐酸小檗碱峰计算不低于4 000。

2.2 对照品溶液制备

精密称取105℃下干燥5 h的盐酸小檗碱对照品(含量按98.14%计)12.38 mg，置200 mL无色量瓶中，用甲醇适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为对照品溶液A(盐酸小檗碱的浓度为0.060 8 mg/mL)。另精密称取105℃下干燥5 h的盐酸小檗碱对照品14.94 mg(相当于3片三黄片的含量)，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)溶液75 mL，称定质量，密塞，超声处理30 min，放冷，再称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL，置中性氧化铝柱(5 g，100～200目，1.0 cm×15 cm，用甲醇10 mL预洗)上，以甲醇60 mL洗脱，收集洗脱液，低温蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为对照品溶液B(盐酸小檗碱的理论质量浓度为0.097 8 mg/mL)。

2.3 样品中盐酸小檗碱含量测定

取本品10片(除去糖衣)，称定质量，研细，取约相当于1片的质量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)溶液25 mL，称定质量，密塞，超声处理30 min，放冷，再称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过。精密量取续滤液5 mL，置中性氧化铝柱(5 g，100～200目，1.0 cm ×15 cm，用甲醇 10 mL预洗)上，以甲醇60 mL洗脱，收集洗脱液，低温蒸干(避免快速蒸发引起的边缘效应造成的损耗)，残渣用甲醇溶解，转移至10 mL量瓶中并稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。用高效液相色谱仪测定，结果见表1和表2。

表1 三黄片中盐酸小檗碱的含量测定

表2 以对照品溶液B为基准计算的样品含量

3 讨论

由表1可见，与标准相比，虽加大了甲醇的洗脱量(增加50%)、加粗了中性氧化铝柱的直径(增大50%)，却仍不能改变测定结果。结合本批产品前几次的测定结果，笔者认为中性氧化铝是影响测定结果的关键因素。从表2可以看出，中性氧化铝对盐酸小檗碱的吸附作用相当严重(虽然此法中盐酸小檗碱的状态与样品中的不同，但中性氧化铝对盐酸小檗碱的吸附作用可见一斑)，损耗达40%以上;以对照品溶液B为基准计算的样品含量值与厂家投料相符。因此，选用合格的中性氧化铝就成为本法的关键。同时，也提示今后遇到此类问题时应多加注意。

在检验过程中还发现，对照品溶液保存在棕色量瓶与保存在无色量瓶中，峰面积的重复性不同，使用无色量瓶效果较好，使用棕色量瓶则较差。初步判断可能是由于盐酸小檗碱存在两种异构体，进样及操作过程中发生了吸光转型所致。因此，在配制对照品溶液和供试品溶液时宜用无色量瓶，且应同时配制。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录ⅥD.