肾葆颗粒的提取工艺研究*

刘 俊,李 倩,徐绍新,袁 铭,向 阳

(武汉健民药业集团股份有限公司,湖北武汉430052)

肾葆颗粒的提取工艺研究*

刘 俊,李 倩,徐绍新,袁 铭,向 阳

(武汉健民药业集团股份有限公司,湖北武汉430052)

目的:研究肾葆颗粒的最佳提取工艺。方法:采用正交试验方法,以干浸膏得率、正丁醇浸出物和淫羊藿苷含量为考核指标,优选出最佳的肾葆颗粒水提和醇提工艺。结果:水提的最佳工艺为加8倍水,浸泡半小时,水煮2次,每次2h;醇提的最佳工艺为加10倍量的70%乙醇回流2次,每次2h。结论:该提取工艺稳定可行。

肾葆颗粒;淫羊藿苷;提取工艺;正交试验

肾葆颗粒是武汉健民药业集团股份有限公司研制开发的一种中药复方制剂,主要用于治疗慢性肾功能衰竭,该药由淫羊藿、黄芪、茯苓、大黄等药材组成,其中黄芪、茯苓等药材采用加水煎煮提取,淫羊藿、大黄等药材采用乙醇提取。甙类、黄酮、多糖为方中的主要有效成分,试验选用部分药材水煎煮提取,部分药材乙醇回流提取[1],以正丁醇浸出物、淫羊藿苷的含量和干膏量[2]为指标,采用正交实验优选最佳试验参数。

1 仪器和材料

HP—1100高效液相色谱仪(Agilent)、Agilent色谱工作站、CQ—250超声波处理器(中国上海船舶电子设备研究所)、CS—501超级恒温器(重庆实验设备厂)、氧气瓶(航天医学工程研究所);淫羊藿苷(中国药品生物制品检定所),所用试剂中除流动相为色谱纯级,其余均为分析纯级,水为重蒸水;所用药材购自湖北省药材公司,经检验均符合2010年版中国药典一部规定。

2 方法与结果

2.1 水提工艺条件的优选

2.1.1 水提工艺正交试验

根据长期的生产实践经验和查阅的相关文献资料报道,影响提取效果的因素有以下四个方面:加水量、浸泡时间、提取次数、提取时间,故我们在预实验的基础上,以干膏重量和正丁醇提取物为考核指标,设立4个因素,3个水平,按照L9(34)正交表安排试验,见表1:

表1 水提正交试验因素水平表

分别取处方量的黄芪、茯苓等药材,按设定的方案进行提取、滤过,滤液合并浓缩成稠膏,60℃减压干燥,称重(W),参照《中国药典》2010年版一部附录ⅩA浸出物测定法(热浸法)[3]62,将干膏粉碎过二号筛,作为供试品。取供试品约2～4g,称定重量(W1),置100ml锥形瓶中,精密加入正丁醇50ml,塞紧,称定重量,静置1h后,连接回流冷凝管,加热至沸腾,并保持微沸1h。放冷后,取下锥形瓶,密塞,称定重量,用正丁醇补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上挥干正丁醇,残渣在105℃的条件下恒温干燥3h,移置干燥器中,放冷30min,然后迅速精密称定重量(W2)。正丁醇浸出物量按下式计算:正丁醇浸出物重=2W2×(W/ W1)。试验结果见表2:

表2黄芪、茯苓水提正交试验设计表与结果

以正丁醇浸出物和干膏率为考核指标,因素对提取的影响顺序均为 C>D>A>B,应选A3B3C3D3,其中因素B的影响最小,B1、B2、B3对正丁醇浸出物和干膏率的影响均不大,为缩短工时,提高效率,选择B1较好。仔细分析其他三个因素, A2与A3、C2与C3、D2与D3对提取的影响差别也不大,从缩短工时,节省能源考虑,选择A2、C2、D2较好。最终我们确定的工艺为A2B1C2D2,即8倍水,浸泡30min,水煮2次,每次2h。

2.1.2 水提工艺验证

按照优选的最佳水提工艺,取同批次相同量的黄芪、茯苓等药材,进行三次重复试验,结果见表3:

从以上的验证试验结果来看,三次试验的结果无明显差异,说明该工艺是科学合理的。

2.2 醇提工艺条件的优选

2.2.1 醇提正交试验

根据查阅相关文献和预试验的情况,从乙醇浓度、加醇量、提取次数、提取时间几方面考查对淫羊藿、大黄等药材的提取。正交试验设计见表4:

表4 淫羊藿、大黄正交试验因素水平表

分别取1倍处方量的淫羊藿、大黄等药材,按设定的方案进行提取,滤过,滤液合并静置12h,分取上清液浓缩成稠膏,减压干燥,称重,计算干膏量,依照《中国药典》2010年版一部淫羊藿项下淫羊藿苷的含量测定方法,采用高效液相色谱法测淫羊藿苷含量[3]306-308,折算成总含量,具体方法和结果如下表:

(1)色谱条件及系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-2%冰醋酸溶液(52:48)为流动相;检测波长为270nm。理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于2500。

(2)对照品溶液制备:精密称取淫羊藿苷对照品适量,加甲醇制成1ml含0.1mg的溶液,即得。

(3)供试品溶液的制备:取本品干膏粉约0.1g,精密称定,置50ml量瓶中,加甲醇40ml,密塞,超声处理30min,放置至室温,加甲醇定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

(4)测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl,注入液相色谱仪,测定,计算淫羊藿苷的含量,结果见表5、表6:

表5 淫羊藿、大黄提取正交试验设计表与结果

表6方差分析结果表

以淫羊藿苷含量为考核指标,因素对实验结果的重要性为A〉B〉C〉D,应选A3B3C2D3;以干膏量为考核指标,因素对实验结果的重要性也为A〉B〉C〉D,应选A3B3C3D3。考虑到因素C不具有显著性,从节约能源,节省工时考虑,选择C2较好,最终将乙醇回流的工艺条件定为A3B3C2D3,即以10倍量的70%乙醇回流2次,每次2h。

2.2.2 醇提工艺验证

对优选的试验方案进行三次重复试验,所用药材均为同一批且均为一倍处方量,结果如表7:

表7醇提工艺验证试验

结论:三个试验号的结果没有明显差异,表明该工艺是稳定可行的。

3 讨论

3.1 本方剂中的水提部分主要含有甙类、多糖等成分,具有补气固表、利水渗湿、健脾宁心等功效,其中主要有效成分茯苓多糖具有增强肌体免疫力的作用。而茯苓等药材难以建立含量测定,故采用正丁醇浸出物作为水提工艺的考核指标更具有针对性。

3.2 淫羊藿为小檗科淫羊藿属植物箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、巫山淫羊藿或朝鲜淫羊藿的干燥地上部分,具有补肝肾、强筋骨、祛风湿的功效,对肾、心血管系统有广泛的药理作用,药理实验表明:淫羊藿苷(黄酮类)、淫羊藿总黄酮、多糖是淫羊藿的主要有效成分[4]。目前含淫羊藿制剂多以淫羊藿苷为质控指标,故在研究中选择淫羊藿苷作为醇提工艺的考核指标是合理的。

[1]王洪锐,杨帆,陈健勇,谭新,梁惠明.正交设计试验法优选淫羊藿提取工艺条件[J].广东药学院学报,2003,19(1):7-8.

[2]卢泓,庄珂.正交设计优选淫羊藿提取工艺研究[J].长春中医学院学报,2004,20(3):36-37.

[3]国家药典委员会.中国药典(二部)[M].医药科技出版社,2010.

[4]王昌林,李呈,王粤新.淫羊藿及其有效成分的药理研究概况[J].中国中药杂志,1998,23 (3):183-185.

[责任审校:秦春娥]

R944.2

A

1672-1047(2010)04-0031-04

10.3969/j.issn.1672-1047.2010.04.08

2010-06-25

刘 俊,男,工程师。E-mail:whzylj@sohu.com.