RP-HPLC法测定不同时期山茱萸中马钱苷的含量

江苏省徐州医药高等职业学校王继光湘潭职业技术学院李君

RP-HPLC法测定不同时期山茱萸中马钱苷的含量

江苏省徐州医药高等职业学校王继光
湘潭职业技术学院李君

山茱萸来源于山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb. et Zucc.的干燥成熟果肉，收载于《中国药典》2005年版一部，为中医临床常用药，也是六味地黄丸等常用中成药的原料。现代研究证明马钱苷是山茱萸药材主要活性成分之一。本文以山茱萸中马钱苷含量变化为依据，RP-HPLC法测定不同生长时期，不同产地山茱萸中马钱苷的含量。

一、材料

1.样品。山茱萸样品分别于2008年8月～11月采制河南西峡山茱萸GAP基地、浙江临安山茱萸GAP基地、陕西佛坪山茱萸GAP基地，经王继光主任中药师鉴定为山茱萸科植物山茱萸（CornusofficinalisSieb．etZucc.）的果实。

2.主要仪器。岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-20A型紫外检测器，CTO-10ASvp型柱温箱，CBM-102型工作站，电子天平（BS224S，北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

3.试剂。马钱苷对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇、异丙醇、乙腈为色谱纯（天津四友天津四友精细化学品有限公司），所用其他试剂均为分析纯。

二、实验方法

1.色谱条件与系统适用性试验。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈—水（15∶85）为流动相，检测波长240nm。

2.对照品溶液的制备。精密称取马钱苷对照品适量，加80%甲醇制成每1ml含40μg的溶液，即得。

3.供试品溶液的制备。取本品粉末（过三号筛）约0.1g。精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

4.测定法。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ l，注入液相色谱，测定，即得，见图1、图2。

图1 马钱苷标准品

图2 马钱苷样品

5.准确称取马钱苷对照品2.01mg，80%甲醇定溶于5ml量瓶中，制成对照品溶液。依次以5，10，15，20，25μl进样，作HPLC分析。以峰面积（X）为横坐标，马钱苷对照品含量（Y）为纵坐标，得回归方程为：y=384308x+25510，r＝0.9996，说明马钱苷在5.01-24.6μg范围内线性良好。

图3 马钱苷对照品含量回归方程

6.精密度试验。称取山茱萸干燥果肉粗粉0.1g，按上述方法制备样品液，连续进样5次，计算RSD值，结果见表1。

表1 精密度试验

表2 河南西峡山茱萸不同生长期马钱苷的含量

表3 浙江临安山茱萸不同生长期马钱苷的含量

7.稳定性实验。同一样品分别在0，2，4，6，8，12h测定，计算RSD值。

8.重现性实验。平行称取山茱萸干燥果肉粗粉0.1g5份，按上述方法制备样品液，进行HPLC分析，计算RSD值。

表4 陕西佛坪山茱萸不同生长期马钱苷的含量

9.加样回收率实验。精密称取山茱萸干燥果肉粗粉5份，加入一定量的马钱苷对照品，按上述方法制备样品液，进行HPLC分析，计算加样回收率。

三、实验结果与分析

以HPLC法分别测定河南西峡、浙江临安、陕西佛坪山茱萸生长期为8月15日，8月30日，9月15日，9月25日，10月5日，10月15日，10月25日山茱萸样品中马钱苷的含量测定。结果见表2～表4。

四、讨论

实验结果显示，不同生长期、不同产地山茱萸中马钱苷含量的变化趋势是相同的，即随着山茱萸果实的成熟，马钱苷含量逐渐升高，在果实成熟时马钱苷的含量最高。不同产区的山茱萸在同一生长期马钱苷的含量存在差异，可能是因为不同的山茱萸基地，山茱萸生长环境的土壤、水分、温度等条件不同的所致，具体原因有待进一步研究。

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